5%阿維·虱螨脲乳油高效液相色譜分析

藍(lán)宏彥 ，龔發(fā)秀，梁永星，鄧欣毅，吳燕飛，鄧明學(xué)

（1.柳州市惠農(nóng)化工有限公司，廣西 柳州 545616 ；2.廣西特色作物研究院，廣西 桂林 541004)

阿維·虱螨脲 5%乳油由阿維菌素和虱螨脲復(fù)配而成。阿維菌素是一種大環(huán)內(nèi)酯雙糖類化合物，是從土壤微生物中分離的天然產(chǎn)物，對(duì)昆蟲和螨類具有觸殺和胃毒作用并有微弱的熏蒸作用，無(wú)內(nèi)吸作用。但它對(duì)葉片有很強(qiáng)的滲透作用，可殺死表皮下的害蟲，且殘效期長(zhǎng)。其在柑橘上主要登記用于防治潛葉蛾、銹壁虱、紅蜘蛛[1]。虱螨脲是諾華公司1997 年開(kāi)發(fā)成功的昆蟲幾丁質(zhì)合成抑制劑，屬于苯甲酰脲類殺蟲劑，藥劑通過(guò)作用于昆蟲幼蟲阻止脫皮過(guò)程而殺死害蟲，尤其對(duì)果樹(shù)等食葉毛蟲有出色的防效，對(duì)薊馬、銹螨、白粉虱有獨(dú)特的殺滅機(jī)理，適于防治對(duì)合成除蟲菊酯和有機(jī)磷農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲。藥劑的持效期長(zhǎng)，有利于減少打藥次數(shù)[2]。兩種化合物復(fù)配是很好的藥劑。目前，阿維·虱螨脲復(fù)配制劑的分析方法未見(jiàn)報(bào)道。本文建立了在同一液相色譜條件下同柱分離測(cè)定阿維菌素和虱螨脲的高效液相色譜法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好的特點(diǎn)，準(zhǔn)確度和精確度均能達(dá)到定量分析的要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與溶液

甲醇（分析純），新蒸二次蒸餾水，阿維菌素（B1a+B1b）標(biāo)樣（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%），虱螨脲標(biāo)樣（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.0%），阿維·虱螨脲5%乳油試樣。

1.2 儀器

日本島津SPD-M20A 高效液相色譜儀，具有自動(dòng)進(jìn)樣器；LCsolution-島津液相工作站；色譜柱：250mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝ODS-C185μm填充物。

1.3 液相色譜操作條件

流 動(dòng) 相：甲 醇∶水=85∶15（V/V）；流 量：1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm；進(jìn)樣體積20μL；保留時(shí)間：虱螨脲約為5.54min；阿維菌素（B1b）約為8.36min，阿維菌素（B1a）約為10.27min，這樣可使阿維菌素和虱螨脲在C18柱上獲得較好的分離效果和較高的靈敏度。

上述液相色譜操作條件是典型的操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)和當(dāng)時(shí)溫度條件，對(duì)給定的操作參數(shù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以獲得最佳效果。典型的標(biāo)樣和試樣的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1 與圖2。

圖1 阿維·虱螨脲標(biāo)樣圖譜

圖2 5 %阿維·虱螨脲試樣圖譜

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取虱螨脲標(biāo)品0.0538g（精確至0.0002g）和阿維菌素標(biāo)品0.050g（精確至0.0002g） 置于50.0mL 容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取試樣 1.60g (精確到0.0002g)于50.0mL 容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，然后超聲溶解，冷卻至室溫，搖勻備用。

1.4.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針標(biāo)樣溶液面積相對(duì)變化＜1.0%,按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示虱螨脲或阿維菌素（B1a+B1b）含量X（%），按下列公式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中虱螨脲或阿維菌素（B1a+B1b）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中虱螨脲峰或阿維菌素（B1a+B1b）峰面積的平均值；m1為虱螨脲或阿維菌素（B1a+B1b）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為標(biāo)樣中虱螨脲或阿維菌素（B1a+B1b）的質(zhì)量，g；p 為虱螨脲或阿維菌素（B1a+B1b）標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

用虱螨脲標(biāo)樣溶液在不同的波長(zhǎng)條件下用高效液相色譜儀分別進(jìn)樣，可觀察到在204nm 和245nm波長(zhǎng)條件下有較大的吸收波長(zhǎng)，但是在204nm 波長(zhǎng)條件下溶劑對(duì)峰的干擾很大，因此選用245 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 色譜柱的選擇

根據(jù)虱螨脲的化學(xué)結(jié)構(gòu)，我們選擇常用的ODS-C18和正相填料Kromasil Si60柱進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)選用的反向填料柱能較好地將虱螨脲和雜質(zhì)分離，因此選擇用反向柱。

2.1.3 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)虱螨脲的特點(diǎn)，對(duì)使用的甲醇和水按不同的比例，在色譜柱上進(jìn)行選擇比較。經(jīng)過(guò)測(cè)定，選擇甲醇溶液體積分?jǐn)?shù)85%，水體積分?jǐn)?shù)15%，流量為1.0mL·min-1時(shí)有效成分與雜質(zhì)能很好地分離，峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，并且分析時(shí)間較短，提高了工作效率。

2.2 分析方法的線性相關(guān)性

分別準(zhǔn)確稱取99.0%虱螨脲標(biāo)樣約0.0538g 和98.0%阿維菌素標(biāo)樣約0.050g（精確至0.0002g），分別置于50.0mL 容量瓶中，用甲醇稀釋定容至刻度，搖勻后，置于10mL 容量瓶中，按上述色譜操作條件進(jìn)行分析，以虱螨脲、阿維菌素質(zhì)量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1、圖1 和圖2）。虱螨脲線性回歸方程為：y=6868806x+310433.7，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999；阿維菌素線性回歸方程為：y=18785537x+309871.9，相關(guān)系數(shù)0.9999，由此可見(jiàn)，虱螨脲、阿維菌素的液相色譜分析法線性關(guān)系良好。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 虱螨脲線性關(guān)系圖

圖2 阿維菌素線性關(guān)系圖

2.3 分析方法精確度實(shí)驗(yàn)

在同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5 個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得虱螨脲的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02，變異系數(shù)為0.60%；測(cè)得阿維菌素的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.013，變異系數(shù)為0.69%（表2）。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

在已知含量的樣品中，加入1.4.1 中配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，在上述方法和操作條件下進(jìn)行定量分析，測(cè)得虱螨脲的平均回收率為99.93%；阿維菌素的平均回收率為99.96%（表3）。

3 結(jié)論

綜上所述，該方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好的特點(diǎn)，準(zhǔn)確度和精確度均能達(dá)到定量分析要求，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測(cè)的參考方法。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

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