加味黃芪建中顆粒對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠相關(guān)細(xì)胞因子及免疫球蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究

高金良

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕科，吉林 長(zhǎng)春 130117）

加味黃芪建中顆粒對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠相關(guān)細(xì)胞因子及免疫球蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究

高金良

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕科，吉林 長(zhǎng)春 130117）

目的 探討加味黃芪建中顆粒對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠相關(guān)細(xì)胞因子及免疫球蛋白的影響。方法 選取清潔級(jí)Wistar大鼠48只，隨機(jī)分4組，正常組、模型組、雷公藤多苷片組、加味黃芪建中顆粒組，每組12只，均行細(xì)胞因子、免疫球蛋白檢測(cè)。結(jié)果 模型組細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）高于正常組，細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）低于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）較模型組降低，細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）較模型升高，加味黃芪建中顆粒組變異幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。結(jié)論 加味黃芪建中顆?？娠@著改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠的細(xì)胞因子及免疫球蛋白狀況。

加味黃芪建中顆粒；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；細(xì)胞因子；免疫球蛋白；影響

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為主的自身免疫性疾病，傳統(tǒng)治療方案中，多采用抗風(fēng)濕藥物治療，患者幾年后常常會(huì)出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)［1］，逐漸失去臨床療效結(jié)果多數(shù)患者的病情不能得到長(zhǎng)期有效的控制，因此合理用藥，在疾病的早期控制病情的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。中藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是具有一定優(yōu)勢(shì)的［2］，不良反應(yīng)小，安全性較高，報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性Wistar大鼠48只，體質(zhì)量180～250 g。

1.2試劑：加味黃芪建中顆粒：藥物組成：飴糖30 g、桂枝15 g、芍藥18 g、生姜9 g、大棗6枚、黃芪30 g、炙甘草6 g、秦艽10 g、雞矢藤10 g。采用免煎顆粒制劑，取自正規(guī)醫(yī)院顆粒藥房，每日1劑。雷公藤多苷片：10毫克/片，浙江普洛康裕天然藥物有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z33020778。

1.3方法：取凍干卡介苗素1支（50 mg），80 ℃、1 h滅活，混入滅菌液體石蠟油和羊毛脂（2∶1）10 mL中，制成Freund's完全佐劑。除正常組外，在每鼠右后足拓皮內(nèi)注射Freund's完全佐劑0.05 mL致炎，復(fù)制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型。致炎后第19天開始給藥，連續(xù)30 d，各組的給藥量相當(dāng)于臨床用量的5倍，具體給藥方法如下：①正常對(duì)照組：給予9 g/L氯化鈉溶液灌胃，10 mL/kg，每天1次。②模型對(duì)照組：給予9 g/L氯化鈉溶液灌胃，10 mL/kg，每天1次。③雷公藤多甙治療組：將雷公藤多苷片研成細(xì)末，加9 g/L氯化鈉溶液，配制成混懸液，按照10 mL/kg的劑量灌胃，每天1次。④加味黃芪建中顆粒治療組：將加味黃芪建中顆粒，加9 g/L氯化鈉溶液，配制成混懸液，按照10 mL/kg的劑量灌胃，每天1次。末次用藥24 h后，用20 g/L烏拉坦溶液按大鼠體質(zhì)量5 mL/kg劑量，腹腔注射麻醉，由腹主動(dòng)脈抽取4～6 mL血液，4000 r/min，離心10 min，取血清測(cè)定細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、IL-4、IL-10、ESR、RF、CRP）及免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA），均采用ELISA法測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。檢測(cè)指標(biāo)的時(shí)間節(jié)點(diǎn)為末次用藥24 h。

1.4評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)節(jié)炎指數(shù)［3］：全身病變按5級(jí)評(píng)分法評(píng)價(jià)，根據(jù)未注射佐劑的其余3只肢體的病變程度合計(jì)積分，計(jì)算出關(guān)節(jié)炎指數(shù)。①0分：無(wú)紅腫。②1分：小趾關(guān)節(jié)紅腫。③2分：趾關(guān)節(jié)和足拓腫脹。④3分：踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹。⑤4分：包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。滿分12分，分?jǐn)?shù)越高，關(guān)節(jié)炎越嚴(yán)重。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：SPSS16.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間差異用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1各組大鼠細(xì)胞因子與關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較：模型組細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)高于正常組，細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）低于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)較模型組降低，細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）較模型升高，加味黃芪建中顆粒組變異幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。見表1。

2.2各組大鼠免疫球蛋白比較：模型組免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）高于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）較模型組降低，加味黃芪建中顆粒組降低幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。見表2。

表1　各組大鼠細(xì)胞因子與關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較（）

表1　各組大鼠細(xì)胞因子與關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較（）

注：TNF-α為腫瘤壞死因子α，IL-1為白細(xì)胞介素1，IL-4為白細(xì)胞介素4，IL-10為白細(xì)胞介素10，ESR為血沉，RF為類風(fēng)濕因子，CRP為C反應(yīng)蛋白。與正常組比較，aP＜0.05。與模型組比較，bP＜0.05。與雷公藤多苷片組比較，cP＜0.05

組別　例數(shù)　TNF-α（g/L）　IL-1（μg/L）　IL-4（μg/L）　IL-10（μg/L）正常組　12　7.8±1.2　0.7±0.3　7.8±1.0　52.8±6.7模型組　12　27.1±2.6a　2.0±0.9 a　4.3±1.2 a　15.6±1.9 a雷公藤多苷片組　12　15.4±2.3ab　1.4±0.7ab　5.2±0.8ab　31.4±2.3ab加味黃芪建中顆粒組　12　8.6±1.4 abc　0.8±0.2abc　7.1±1.3abc　46.7±4.1abc組別　例數(shù)　ESR（mm/h）　RF（ng /L）　CRP（mg/L）　關(guān)節(jié)炎指數(shù)（分）正常組　12　0.8±0.2　33.1±4.8　1.6±0.4　0.0±0.0模型組　12　12.7±2.9a　89.2±17.6a　3.7±1.3a　6.8±2.9a雷公藤多苷片組　12　4.3±1.5ab　64.7±10.3ab　2.3±1.0ab　4.2±1.2ab加味黃芪建中顆粒組　12　1.2±0.5abc　38.5±6.2abc　1.7±0.6abc　1.7±0.3abc

表2　各組大鼠免疫球蛋白比較（）

表2　各組大鼠免疫球蛋白比較（）

注：IgM為免疫球蛋白M，IgG為免疫球蛋白G，IgA為免疫球蛋白A。與正常組比較，aP＜0.05。與模型組比較，bP＜0.05。與雷公藤多苷片組比較，cP＜0.05

組別　例數(shù)　IgM（mg/L）　IgG（mg/L）　IgA（mg/L）正常組　12　261.5±24.3　395.7±34.6　71.2±5.8模型組　12　517.2±43.8a　978.1±91.7a134.7±13.2a雷公藤多苷片組　12　397.4±35.0ab672.9±80.3ab109.8±10.6ab加味黃芪建中顆粒組　12　272.7±31.8abc449.5±51.7abc80.3±6.4abc

3　討 論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展與體內(nèi)諸多因子的改變密切相關(guān)［4］。中藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果較好［5］。黃芪建中湯加秦艽、雞矢藤、青風(fēng)藤、三七、薏苡仁組成核心方：加味黃芪建中湯。方中重用黃芪、飴糖為君增強(qiáng)益氣建中之力，臣以辛溫之桂枝溫陽(yáng)氣，祛寒邪；酸甘之白芍養(yǎng)營(yíng)陰；生姜溫胃散寒，甘溫質(zhì)潤(rùn)之飴糖，溫補(bǔ)中焦，緩急止痛大棗補(bǔ)脾益氣；佐以秦艽、雞矢藤、青風(fēng)藤助黃芪、飴糖健脾祛風(fēng)濕，舒筋絡(luò)，散瘀止痛，解毒消腫；薏苡仁健脾舒筋，祛濕除痹。方中在健脾祛濕的基礎(chǔ)上加三七，活血化瘀生新，入胃經(jīng)，養(yǎng)胃止血不留瘀，化瘀通絡(luò)不傷正。炙甘草為使藥益氣和中，調(diào)和諸藥。其中飴糖配桂枝，辛甘化陽(yáng)，溫中焦而補(bǔ)脾虛；芍藥配甘草，酸甘化陰，緩肝急協(xié)調(diào)雞矢藤而止痛。秦艽、雞矢藤、青風(fēng)藤微寒以劫黃芪、桂枝而升陽(yáng)助火，祛濕邪；黃芪、飴糖、薏苡仁益氣固本扶正祛邪；三七化瘀通絡(luò)貫穿疾病的始終；諸藥合用，共奏健脾益氣，散寒祛濕、通絡(luò)止痛之功效。本次研究的結(jié)果表明，雷公藤多苷片與加味黃芪建中顆粒均是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效治療藥物，且加味黃芪建中顆粒的治療效果更佳，可顯著改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠的細(xì)胞因子及免疫球蛋白狀況。但此次研究也存在一定的弊端，樣本量較少，仍需要進(jìn)一步擴(kuò)大。加味黃芪建中顆粒是否可以徹底治愈類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，仍需要進(jìn)一步研究。

［1］王旻晉，武永康，林輝.甲氨蝶呤治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的不良反應(yīng)及應(yīng)對(duì)措施［J］.華西醫(yī)學(xué)，2013，28（6）:940-943.

［2］王俊杰，范永升.中藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（7）:1588-1590.

［3］陳建雙，于海榮，張玉玲，等.赤雹根總皂甙對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠血清細(xì)胞因子的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（5）:1097-1098.

［4］施曉柯.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)細(xì)胞因子的研究進(jìn)展［J］.中山大學(xué)研究生學(xué)刊（自然科學(xué)·醫(yī)學(xué)版），2012，33（4）:1-5.

［5］曾海坤，曾灶英，郭大敏，等.中藥生地馬錢丸配合來氟米特治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的療效及安全性［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（16）:153-154.

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1671-8194（2015）20-0052-02