反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中主藥含量

逯小萌

（河南省濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南濮陽(yáng)457000）

反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中主藥含量

逯小萌

（河南省濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南濮陽(yáng)457000）

目的建立測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱為T(mén)hermo-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為0.01mol/L醋酸鈉緩沖液（含0.004mol/L庚烷磺酸鈉，0.2%三乙胺，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH= 4.0）-甲醇（70∶30），流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為261 nm。結(jié)果鹽酸倍他司汀進(jìn)樣量在0.102 3～1.023 0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率為99.61%，RSD=0.21%（n=9）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確度、靈敏度及重復(fù)性均較好，可用于鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量測(cè)定。

鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液；鹽酸倍他司??；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液的主要成分為鹽酸倍他司汀，輔料為氯化鈉與注射用水，主要用于內(nèi)耳眩暈癥，亦可用于動(dòng)脈硬化、缺血性腦血管疾病及高血壓所致體位性眩暈、耳鳴［1］。其國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)［2］中含量測(cè)定項(xiàng)使用紫外分光光度法。紫外分析法相對(duì)液相色譜法不準(zhǔn)確，專(zhuān)屬性不強(qiáng)。為此，本試驗(yàn)中建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫Agilent1260型高效液相色譜儀；G1314B型安捷倫Agilent 1260可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（安捷倫公司）；H4033A色譜工作站；Precisa92SM-202A型電子天平。鹽酸倍他司汀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100265-201203，供含量測(cè)定用）；鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液（河南天方華中藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為F14042403，F(xiàn)14042404，F(xiàn)1404243，每瓶含鹽酸倍他司汀0.02 g、氯化鈉4.5 g）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01mol/L醋酸鈉緩沖液（含0.004mol/L庚烷磺酸鈉，0.2%三乙胺，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=4.0）-甲醇（70∶30）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：261 nm；進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)大于2 000，鹽酸倍他司汀峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。在此色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

精密量取本品20mL，置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得每1mL中含32μg的供試品溶液。精密稱(chēng)取鹽酸倍他司汀對(duì)照品17.05 mg，置50 mL容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，再取5mL，置50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液。按供試品溶液制備方法制備不含鹽酸倍他司汀的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察：分別精密稱(chēng)取2份鹽酸倍他司汀對(duì)照品10mg，置150mL容量瓶中，進(jìn)行破壞性試驗(yàn)。加入0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，室溫放置30min，進(jìn)行酸破壞；加入0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，室溫放置30min，進(jìn)行堿破壞。按擬訂色譜條件進(jìn)樣20μL測(cè)定。結(jié)果倍他司汀在酸性或堿性條件下均穩(wěn)定。

線(xiàn)性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液3，5，10，15，20，25，30μL注入高效液相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程Y=30.852X-1.537 3，r= 0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，鹽酸倍他司汀進(jìn)樣量在0.102 3～1.023 0μg范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積平均值為616.83，RSD=0.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積的平均值為617.09，RSD= 0.41%（n=8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按擬訂方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的RSD=0.23%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的同一批樣品6份各2mL，分別加入0.8，1.0，1.2mL質(zhì)量濃度為0.081 g/L的對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相定容至5mL，配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個(gè)量級(jí)的待測(cè)溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸倍他司汀加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密量取3批樣品，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為F14042403，F(xiàn)14042404，F(xiàn)1404243的鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量分別為99.71%，100.07%，100.02%，其RSD分別為0.16%，0.21%，0.19%（n=2）。

3 討論

本品的現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法，按原標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)過(guò)程中試驗(yàn)數(shù)據(jù)有時(shí)不穩(wěn)定，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響，放置時(shí)間的延長(zhǎng)及室溫等客觀原因造成溶劑的揮發(fā)也是影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)的因素［3-6］。本試驗(yàn)中采用RP-HPLC法，選定最大吸收波長(zhǎng)261 nm和流動(dòng)相pH調(diào)節(jié)至4.0等色譜條件對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，樣品主成分峰與相鄰溶劑及雜質(zhì)峰達(dá)到基線(xiàn)分離，且陰性對(duì)照品溶液峰對(duì)其無(wú)干擾，分離效果滿(mǎn)意。此外，方法學(xué)考察的內(nèi)容均達(dá)到了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)要求，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)，受客觀因素的影響較小，可用于鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量測(cè)定。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：768-769.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第七冊(cè)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：227.

［3］唐坤.反相高效液相色譜法測(cè)定倍他司汀的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（4）：502-504.

［4］郭宇鵬，王克柳，夏方亮.HPLC法測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液的含量［J］.齊魯藥學(xué)，2005，24（8）：469-470.

［5］宋毓.反相高效液相色譜法測(cè)定倍他司汀片的含量［J］.黑龍江科技信息，2014（7）：14.

［6］代廣會(huì)，張錦，周定利，等.HPLC法測(cè)定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液主藥及其有關(guān)物質(zhì)的含量［J］.中國(guó)藥房，2008，19（4）：296-297.

Content Determination of Betahistine Hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection by RP-HPLC

Lu Xiaomeng
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Puyang，Henan，China 457000）

Objective To establish an RP-HPLC method for the Content Determination of betahistine hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection.Methods The chromatographic column was Thermo-C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）；the mobile phase was 0.01 mol/L sodium acetate buffer（containing 0.004 mol/L heptane sulfonic acid sodium salt，0.2%triethylamine，regulated to pH 4.0 glacial acetic acid）-methanol（70∶30）；the flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was 30℃；the detection wavelength was 261 nm.Results Betahistine hydrochloride showed good linear relationship with the peak area in the range of 0.102 3-1.023 00μg（r=0.999 9），the average recovery was 99.61%，RSD=0.21%（n=9）.Conclusion This method is accurate，sensitive and repeatable，and can be used as the content determination of betahistine hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection.

Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection；betahistine hydrochloride；RP-HPLC；content determination

R927.2；R987

A

1006-4931（2015）22-0121-02

2015-02-05；

2015-05-20）