測(cè)定鹽酸倍他司汀原料及制劑中鹽酸倍他司汀含量的反相高效液相色譜法

喬艷萍

測(cè)定鹽酸倍他司汀原料及制劑中鹽酸倍他司汀含量的反相高效液相色譜法

喬艷萍

目的 探析鹽酸倍他司汀原料及制劑中鹽酸倍他司汀含量檢測(cè)中應(yīng)用反相高效液相色譜法的效果及意義。方法 采用C18色譜柱以混合溶液-乙腈-己胺為流動(dòng)相，波長(zhǎng)為261nm，流速設(shè)定為1．0ml/min，柱溫設(shè)定為50℃，進(jìn)樣量為100ul。結(jié)果 鹽酸倍他司汀和雜志峰分離良好，倍他司汀在0．05-0．55mg/ml范圍內(nèi)線性良好（r=0．99998）。結(jié)論 反相高效液相色譜法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可適用于測(cè)定鹽酸倍他司汀原料及制劑中鹽酸倍他司汀的含量。

鹽酸倍他司??；反相高效液相色譜法；含量

鹽酸倍他司汀是臨床一種常用的血管擴(kuò)張藥物，主要用于治療椎基底動(dòng)脈供血不足、美尼爾氏綜合癥、腦動(dòng)脈硬化、不穩(wěn)定心絞痛，取得了一定的治療效果。根據(jù)2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》，多采用有汞污染的高氯酸滴定法測(cè)定原料含量，紫外分光光度法測(cè)定片劑含量。本文筆者采用反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸倍他司汀原料及制劑含量，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 檢測(cè)儀器 Flexar液相色譜儀，TGL-18C高速臺(tái)式離心機(jī)，實(shí)驗(yàn)室溫度控制器，08890-XX超聲波清洗器，KHW-D-ILC精密拉伸水浴鍋；FA124電子分析天平；JTU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。色譜柱使用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5um）。

1.2 試驗(yàn)試劑 鹽酸倍他司汀對(duì)照組品、鹽酸倍他司汀原料、鹽酸倍他司汀片、甲醇、庚烷磺酸鈉、醋酸鈉、三乙胺、乙腈、試驗(yàn)用水為高純水。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 色譜條件 流動(dòng)相選擇甲醇-庚烷磺酸鈉--醋酸鈉溶液- 冰醋酸 - 三乙胺 （25∶40∶35∶0.01∶0.01），調(diào)整 Ph=3.3；檢測(cè)波長(zhǎng)=261nm；流速 =1.0ml/min；柱溫 =30℃。

1.3.2 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取0.1mg倍他司汀對(duì)照品后加入1ml流動(dòng)相配制成0.1mg/ml對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)液。

1.3.3 供試品溶液 精密稱(chēng)取裝量差異項(xiàng)下鹽酸倍他司汀10mg，以P2O5為干燥劑于100℃減壓干燥2h，置于10ml量瓶?jī)?nèi)，精密加入流動(dòng)相100ml超聲（240W，40kHz）30min溶解，定容，再精密量取2ml并加流動(dòng)相稀釋至100ml刻度，搖勻，濾過(guò)，制備供試品溶液。取鹽酸倍他司汀片劑輔料制取空白輔料溶液，過(guò)濾進(jìn)樣。

1.3.4 專(zhuān)屬性考察 參照1.3.3項(xiàng)供試品標(biāo)準(zhǔn)液制備流程制備去除倍他司汀的陰性溶液，按法測(cè)定。

1.3.5 精密度考察 精密稱(chēng)取0.1mg倍他司汀加入1ml加流動(dòng)相配制成濃度為0.1mg/ml供試品標(biāo)準(zhǔn)液，在設(shè)定的色譜條件下每次吸取10ul，連續(xù)進(jìn)樣6次，觀察記錄峰面積。

1.3.6 對(duì)照平線性考察 配成1ml流動(dòng)相內(nèi)含 0.05、0.15、025、0.35、0.55mg的倍他司汀對(duì)照組品溶液，精密吸取上述每濃度溶液10ul并注入液相色譜儀，在同等色譜條件下觀察并記錄色譜峰，縱坐標(biāo)為峰面積（γ），橫坐標(biāo)為對(duì)照組品進(jìn)樣量（χ），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.7 重現(xiàn)性考察 精密稱(chēng)取適量同一批次鹽酸倍他司汀樣品6份，遵照測(cè)定方法項(xiàng)下相關(guān)操作制備鹽酸倍他司汀樣品溶液，測(cè)定倍他司汀含量并計(jì)算RSD值。

1.3.8 準(zhǔn)確度考察 精密稱(chēng)取適量對(duì)照品、原料（已知純度）9份，置于容量瓶?jī)?nèi)，同時(shí)精密加入適量鹽酸倍他司汀對(duì)照品，按項(xiàng)下規(guī)范化制備成80%、100%、120%溶液，取模擬樣品參照“含量測(cè)定”項(xiàng)下試驗(yàn)操作規(guī)范進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算回收率和RSD值。

1.3.9 樣品含量測(cè)定 遵照上述檢測(cè)方法，在利用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品的含量。

2 結(jié)果

倍他司汀出峰處陰性液無(wú)色譜峰，陰性試驗(yàn)無(wú)感染，提示專(zhuān)屬性良好。精密度良好，RSD=0.95%。倍他司汀于0.05-0.55mg、ml范圍線性聯(lián)合，r=0.99998，見(jiàn)圖1。重現(xiàn)性試驗(yàn)樣品RSD=0.58%，提示重現(xiàn)性良好。準(zhǔn)確度試驗(yàn)計(jì)算回收率=99.6%，RSD=0.66%。三批樣品含量標(biāo)示量分別為100.1%、99.5%、99.8%。

圖1 鹽酸倍他司汀工作曲線

3 討論

本次試驗(yàn)筆者采用紫外分光光度法，于190-400nm波長(zhǎng)范圍依次掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在波長(zhǎng)為206、216nm處吸收率最大，但是波長(zhǎng)為206nm掃描時(shí)不能準(zhǔn)確將鹽酸倍他司汀和溶劑峰分開(kāi)，故筆者認(rèn)為選擇波長(zhǎng)216nm作為本次紫外檢測(cè)的波長(zhǎng)。流動(dòng)相亦會(huì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性，冰醋酸、三乙胺、甲醇均為影響因素，筆者通過(guò)各種不同比例配置成溶液相，發(fā)現(xiàn)以鹽酸倍他司汀色譜峰拖尾因子、保留時(shí)間、半峰寬、理論板數(shù)為考察指標(biāo)，甲醇-0.01mol/L醋酸鈉溶液-0.04mol/L庚烷磺酸鈉 - 冰醋酸 - 三乙胺（25∶35∶40∶0.01∶0.01）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好。結(jié)果顯示，鹽酸倍他司汀和雜志峰分離良好，倍他司汀在0.05-0.55mg/ml范圍內(nèi)線性良好（r=0.99998）。

綜上所述，反相高效液相色譜法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可適用于測(cè)定鹽酸倍他司汀原料及制劑中鹽酸倍他司汀的含量。

作者單位：454750孟州市食品藥品檢驗(yàn)所

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