Folin-Ciocaileu法測定鼠尾草多酚含量

冷雪嬌，章林，鄧紹林，*，王卓，裴玉瓊，許金國，潘蘇華

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210046；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京210095）

Folin-Ciocaileu法測定鼠尾草多酚含量

冷雪嬌1，章林2，鄧紹林2，*，王卓1，裴玉瓊1，許金國1，潘蘇華1

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210046；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京210095）

采用Folin-Ciocaileu法，以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，測定鼠尾草多酚含量，用比色法測定其穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性和加樣回收率。標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=0.1525x＋0.018 1（R2=0.998）。本方法測得的鼠尾草中多酚含量為3.86%，5組樣品的平均回收率為101.3%。本方法測定鼠尾草多酚含量具有較高的穩(wěn)定性（RSD=1.63%）、重現(xiàn)性（RSD= 3.01%）和精密度（RSD=1.02%）。

鼠尾草；多酚；Folin-Ciocaileu法

鼠尾草（salvia officinalis L.）為唇形科、鼠尾草屬植物，其葉、莖和花均有很高的利用價(jià)值，被廣泛的用作醫(yī)藥、香料和食品行業(yè)的原料［1］。鼠尾草是著名的民間常用草藥，有活血化淤、通經(jīng)止痛、清心除煩、治月經(jīng)不調(diào)、心絞痛、肝脾腫大等作用［2］，還可以作為香辛料來調(diào)味和保藏食物［3］?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明鼠尾草具有良好的抗氧化作用，主要表現(xiàn)在自由基清除活力、螯合過渡金屬離子活性和單線態(tài)氧清除能力［4］，鼠尾草的抗氧化能力源于其所含有的抗氧化活性物質(zhì)，如萜類化合物、黃酮類化合物和酚酸，其中酚類化合物起主要作用［5］，因此，有必要了解鼠尾草中的多酚含量及其測定方法。目前，F(xiàn)olin-Ciocaileu比色法廣泛的應(yīng)用于植物多酚的含量測定，此方法操作簡便、精密度較高、重現(xiàn)性好，并且所需儀器設(shè)備價(jià)格低廉。本試驗(yàn)選擇Folin-Ciocaileu比色法測定鼠尾草中的多酚含量，研究此方法是否可應(yīng)用于鼠尾草的多酚含量測定。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

鼠尾草粉：山東濟(jì)南海樂西亞澤公司；沒食子酸（HPLC級(jí)純）：阿拉丁公司；石油醚、乙醇、鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰、無水碳酸鈉、磷酸、溴等均為國產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

PS-10A超聲波：潔康牌數(shù)碼超聲波清洗機(jī)；WFJ 2100可見分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司；AUY120電子天平：日本SHIMADZU公司；ZKSY-600恒溫水浴鍋：南京科爾儀器設(shè)備有限公司；Milli-Q超純水系統(tǒng)：Millipore公司。

1.3方法

1.3.1Folin-Ciocaileu試劑的配制［6］

稱取50 g鎢酸鈉和12.5 g鉬酸鈉置入1 L磨口圓底燒瓶中，用350 mL蒸餾水溶解，緩慢加入85%磷酸25 mL，濃鹽酸50 mL，充分混勻，放入數(shù)粒玻璃珠，連接回流冷凝裝置，文火回流10 h（回流不一定連續(xù)）。用25 mL蒸餾水沖洗冷凝管上的附著物，拆開冷凝管后加入75 g無水硫酸鋰和幾滴溴水（邊加邊振搖），開口繼續(xù)加熱沸騰15 min，直至溴水完全揮發(fā)，終點(diǎn)顏色為黃綠色。冷卻后定容至500 mL，過濾，儲(chǔ)存于棕色瓶中，放入冰箱保存?zhèn)溆?，使用時(shí)稀釋1倍。

1.3.2沒食子酸標(biāo)液的配制

精確稱取0.035 4 g沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，用燒杯溶解后，定容至250 mL，濃度為140 μg/mL，使用時(shí)濃度稀釋1倍。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立［7］

精密吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL 70 μg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液于10 mL量瓶內(nèi)，加1.0 mL Folin-Ciocaileu試劑，再加入10%碳酸鈉溶液3 mL（前后時(shí)間間隔不應(yīng)超過8 min），混勻，加水定容，再混勻。然后室溫下避光放置反應(yīng)2 h，在765 nm處測吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鼠尾草樣品中的多酚含量以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)。

1.3.4鼠尾草樣品溶液的制備［8］

鼠尾草粉中按鼠尾草粉：石油醚為1∶10（g/mL）加入石油醚浸提12 h脫脂，室溫下干燥至恒重。準(zhǔn)確稱取1.0 g鼠尾草粉末，加入60%乙醇20 mL，40℃，超聲提取30 min共3次，合并提取液，過濾，定容至100 mL，待測。

1.3.5鼠尾草樣品中多酚含量的測定

將鼠尾草樣品液稀釋10倍，用樣品空白作為對(duì)照。移液管精確量取稀釋液0.5 mL置于10 mL容量瓶中，加Folin-Ciocaileu試劑1.0 mL，再加入10%碳酸鈉溶液3 mL，混勻，加水定容，繼續(xù)搖勻，然后室溫下避光放置反應(yīng)2 h，在765 nm波長處測吸光度，代入回歸方程，得多酚濃度（μg/mL）。

1.3.6鼠尾草多酚測定方法評(píng)價(jià)

1.3.6.1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取鼠尾草酚類提取樣品液按上述處理及測定方法，分別在樣品液與顯色劑反應(yīng)0.5、1、2、3、4 h后測吸光度，以評(píng)價(jià)該比色分析方法在一定時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定性。

1.3.6.2重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取鼠尾草樣品4份，依上述制備及分析方法，分別測定其多酚含量，并計(jì)算測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD），以評(píng)價(jià)該方法的重現(xiàn)性。

1.3.6.3精密度實(shí)驗(yàn)

用Folin-Ciocaileu法測定同一鼠尾草提取樣品液5次，計(jì)算測定結(jié)果的RSD，以評(píng)價(jià)該方法的精密度。

1.3.6.4加樣回收率實(shí)驗(yàn)

鼠尾草酚類樣品液中加入不同量的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別測定其多酚含量，并計(jì)算回收率和RSD，以評(píng)價(jià)該方法的準(zhǔn)確度和可靠性。取0.4 mL稀釋10倍的鼠尾草樣品溶液于10 mL具塞刻度試管中，再加稀釋10倍的沒食子酸標(biāo)樣0、0.5、1、1.5、2 mL，加1 mL福林試劑，再加3 mL 10%碳酸鈉，定容至10 mL，搖勻，室溫放置2 h，測吸光度。

2　結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

由圖1可知，沒食子酸在0 μg/mL～5 μg/mL濃度范圍內(nèi)與其吸光度值呈良好的線性關(guān)系，在此范圍內(nèi)線性回歸方程為Y=0.152 5X+0.018 1（R2=0.998）。

圖1　沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1Gallic acid standard curve

2.2鼠尾草中多酚含量的測定

精密稱取1.0 g鼠尾草粉4份，按照1.3.4的方法制備供試品溶液，按照1.3.5的方法進(jìn)行操作，設(shè)空白管。為消除供試品溶液本身顏色的干擾，同時(shí)制備不加顯色劑的對(duì)照管，于765 nm波長處測定吸光度。結(jié)果見表。結(jié)果表明，本方法測得的鼠尾草中多酚含量平均為3.86%，RSD=3.71%。

表1　鼠尾草中多酚含量Table 1Content of polyphenols in sage

2.3Folin-Ciocaileu方法的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和精密度

本試驗(yàn)驗(yàn)證了Folin-Ciocaileu比色法測定鼠尾草中酚類含量的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和精密度，結(jié)果見表2。

表2　Folin-Ciocaileu方法的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和精密度Table 2Stability，repeatability and precision of the Folin-Ciocaileu method

由表2可見，該方法在體系反應(yīng)完全后放置4 h內(nèi)測定的吸光度值變化較?。≧SD=1.63%），表明方法穩(wěn)定性較好；重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)測得5個(gè)不同鼠尾草樣品中多酚含量值較接近（RSD=3.01%），表明該方法重現(xiàn)性較好；精密度實(shí)驗(yàn)，同一樣品5次測定的多酚含量值相差較?。≧SD=1.02%），表明該方法精密度較高，完全能滿足樣品分析的要求。

2.4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

按照1.3.6的方法進(jìn)行加樣回收率的測定，結(jié)果見表3。

表3　鼠尾草多酚含量測定加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3Recovery rate of polyphenols in sage

由表3可見，5次加樣回收實(shí)驗(yàn)的最低回收率為99.6%，最高回收率為103.5%，平均回收率為101.3%， RSD=1.61%。表明此法有很高的準(zhǔn)確性和可靠性。

3　結(jié)論

本試驗(yàn)以沒食子酸為對(duì)照品，采用Folin-Ciocaileu比色法測定鼠尾草多酚含量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，多酚濃度在0 μg/mL～5 μg/mL范圍內(nèi)與吸光值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。本方法測得的鼠尾草中多酚含量平均為3.86%，RSD為3.71%。穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為1.63%，重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD為3.01%，精密度試驗(yàn)RSD為1.02%，5組樣品的平均回收率為101.3%，RSD為1.61%。本方法操作簡單、效率高、設(shè)備要求低、精密度高、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好，可為鼠尾草多酚的檢測提供了技術(shù)參考。

［1］Santos-Gomes P C，Seabra R M，Andrade P B，et al.Determination of phenolic antioxidant compounds produced by calli and cell suspensions of sage（Salvia officinalis L.）［J］.Journal of Plant Physiology，2003，160（9）：1025-1032

［2］曲慧.甘西鼠尾草提取物抗氧化活性的初步研究［J］.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，24（4）：261-263

［3］Durling N E，Catchpole O J，Grey J B，et al.Extraction of phenolics and essential oil from dried sage（Salvia officinalis）using ethanolwater mixtures［J］.Food Chemistry，2007，101（4）：1417-1424

［4］Pizzale L，Bortolomeazzi R，Vichi S，et al.Antioxidant activity of sage（Salvia officinalis and S fruticosa）and oregano（Origanum onites and O indercedens）extracts related to their phenolic compound content［J］.Journal of the Science of Food and Agriculture，2002，82（14）：1645-1651

［5］Lu Y，F(xiàn)oo L Y.Antioxidant activities of polyphenols from sage（Salvia officinalis）［J］.Food Chemistry，2001，75：197-202

［6］吳亮亮，石雪萍，張衛(wèi)明.Folin-Ciocalteu比色法測定花椒中多酚含量的研究［J］.中國野生植物資源，2010（6）：54-56

［7］曹艷萍，代宏哲，曹煒，等.Folin-Ciocaileu比色法測定紅棗總酚［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（4）：1299-1299

［8］王曉陽，唐琳，趙壘，等.Folin-Ciocaileu比色法測定刺槐花中的多酚含量［J］.食品與藥品，2010，12（9）：332-335

Determination of Polyphenols in Flowers of Salvia Officinalis L.by Folin-Ciocaileu Method

LENG Xue-jiao1，ZHANG Lin2，DENG Shao-lin2，*，WANG Zhuo1，PEI Yu-qiong1，XU Jin-guo1，PAN Su-hua1
（1.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China；2.College of Food Science and Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，Jiangsu，China）

Gallic acid as reference，the Folin-Ciocalteu method was established to determine the content of polyphenols in sage.The stabilization，precision，repetition and recovery rate of this method were investigated. The regression equation was：Y=0.152 5X+0.018 1（R2=0.998）.This method measured the polyphenols content in sage was 3.86%，the average recovery rate of five groups of samples was 101.3%.This method for determining the content of polyphenols in sage possesses high stability（RSD=1.63%），repeatability（RSD= 3.01%）and precision（RSD=1.02%）.

sage；polyphenols；folin-ciocaileu method

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.025

2014-03-18

南京中醫(yī)藥大學(xué)青年自然科學(xué)基金（13XZR29）

冷雪嬌（1988—），女（漢），助理實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事食品安全與工藝研究工作。

鄧紹林（1986—），男，實(shí)習(xí)研究員，碩士，主要從事畜產(chǎn)品加工與質(zhì)量控制研究。