大葉井口邊草中的化學(xué)成分研究*

朱艷玲，楊雁，宋流東，趙勤實(shí)

（1.中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所，云南昆明650201；2.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南昆明650106；

3.昆明醫(yī)科大學(xué)，云南昆明650500）

大葉井口邊草中的化學(xué)成分研究*

朱艷玲1，2，楊雁2，宋流東3，趙勤實(shí)1

（1.中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所，云南昆明650201；2.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南昆明650106；

3.昆明醫(yī)科大學(xué)，云南昆明650500）

目的從大葉井口邊草中提取出一些具有抗艾滋病毒活性的化學(xué)成分。方法采用硅膠柱層析、凝膠柱層析、反相柱層析及高效液相法分離大葉井口邊草中的乙酸乙酯萃取物。結(jié)果提取分離得倍半萜8個(gè)、二萜7個(gè)、黃酮4個(gè)、三萜3個(gè)和生物堿1個(gè)，化合物共23個(gè)。結(jié)論該試驗(yàn)中提取的化合物10是首次從大葉井口邊草分離得到的。后期將從該試驗(yàn)中分離提取的二萜和倍半萜做了抗艾滋病毒活性檢測(cè)，結(jié)果顯示無抗艾滋病毒活性。

大葉井口邊草；成分；黃酮；二萜；三萜

大葉井口邊草Pteriscretica L.又名雞爪鳳尾草、大葉鳳尾蕨、八字龍等，分布在云南、臺(tái)灣、四川，具有除濕止痢、止血、清熱解毒的功效，用于治療黃疸性肝炎、尿路感染、腸炎、痢疾、急性膽囊炎等疾病。早在20世紀(jì)70年代就有其化學(xué)成分研究的報(bào)道，主要為茚滿酮及對(duì)映-貝克杉烷二萜類化合物［1］。為提取具有抗艾滋病毒活性的化學(xué)成分，對(duì)大葉井口邊草的化學(xué)成分進(jìn)行了提取、分離研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與材料

JASCODIP-370型數(shù)字式旋光儀；國(guó)產(chǎn)XRC-1型顯微熔點(diǎn)儀；Bio-Rad FTS-135型紅外光譜儀；UV210A型紫外光譜儀；GAUTO Spec-3000型質(zhì)譜儀，APIQ star Pulsar型質(zhì)譜儀；DRX-500型核磁共振儀；HP1100型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；80～100目硅膠拌樣，200～300目硅膠層析（德國(guó)默克公司）；40～60μm RP-18材料裝反相柱（德國(guó)默克公司）；D101型聚苯乙烯大孔樹脂和Sephadex LH-20型凝膠（天津化工廠）；10%H2SO4的乙醇溶液顯色。大葉井口邊草全草樣品由（中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所）成曉教授鑒定，采自云南昆明植物園，采摘日期為2006年5月，采用干制法制標(biāo)本，標(biāo)本存放于中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本館，編號(hào)為CX20060516。

2　方法與結(jié)果

2.1分離與提取方法

采集大葉井口邊草全草，曬干后得23 kg，絞碎，80 L丙酮泡24 h，反復(fù)浸泡3次，合并丙酮液，然后過濾，蒸干。水溶解浸膏，用乙酸乙脂萃取3次，合并所有乙酸乙酯部分，蒸干乙酸乙酯得浸膏350 g。用80～100目700 g硅膠加入350 g乙酸乙酯浸膏，拌樣，然后用200～300目2 000 g硅膠層析，梯度洗脫溶劑用石油醚-丙酮（1∶0-0∶1），薄層色譜（TLC）檢測(cè)，相同部分合并，分為7個(gè)部分（部位Ⅰ-Ⅵ）。

極性較小部分餾分段Ⅱ（58 g），硅膠100 g拌樣，硅膠1 000 g層析，洗脫劑為石油醚-丙酮（9∶1），得化合物23（19 g）。相同點(diǎn)部分合并得11 g，經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）層析，相同餾分合并，得B1～B3三部分。B1部分經(jīng)丙酮柱Sephadex LH-20層析、石油醚-丙酮（7∶3）硅膠柱層析，半制備得7 mg化合物3和9mg化合物4；B3部分用石油醚-丙酮（7∶3）柱層析，冰水下靜置2 d，得到1 g白色結(jié)晶化合物20。

經(jīng)大MCI脫色后得48 g部分Ⅲ，用甲醇柱Sephadex LH-20層析，合并相同餾分，得A，B，C三部分。A部分分別經(jīng)丙酮柱Sephadex LH-20層析，石油醚-丙酮（7∶3）硅膠柱層析得3 g化合物12；B部分拌樣以石油醚-丙酮（8∶2）硅膠柱層析，放置3 d，得28mg化合物8（白色結(jié)晶）；C部分3 g，用石油醚-丙酮（8∶2）硅膠柱層析洗脫，得51mg化合物10（白色粉末）。

第Ⅳ部分有68 g，經(jīng)MCI脫色得47 g，反復(fù)用石油醚-丙酮、氯仿-丙酮等洗脫劑洗脫，用硅膠層析，劃分為A，B，C三部分。A部分5 g經(jīng)丙酮Sephadex LH-20層析，最后純化得78mg化合物9和2mg化合物16；B部分8 g用石油醚-丙酮（8∶2～6∶4）梯度洗脫，得21mg化合物11（白色粉末）；C部分2.8 g經(jīng)氯仿-甲醇（1∶1）柱Sephadex LH-20層析，經(jīng)半制備得8mg化合物14和12mg化合物15。

極性較大部分V有28 g，用反相MCI95%乙醇脫色3次得18 g，200 g硅膠裝柱，石油醚-丙酮（7∶3）洗脫，得3 g化合物22。剩余部分經(jīng)反相MCI層析，硅膠柱層析反復(fù)純化后得1.2 g化合物1，30mg化合物2，10mg化合物5，70mg化合物13，8mg化合物21。

極性較大部分為Ⅵ有23 g，用MCI脫色3次得14 g，用Sephadex LH-20柱層析劃斷（甲醇），分為A，B，C，D四部分。1.8g A部分拌樣，裝柱，用氯仿-甲醇（13∶1）洗脫，得13mg化合物19和16mg化合物5；B部分700mg，用反相柱MCI以30%甲醇分離，得14mg結(jié)晶7；C部分3.6 g，SephadexLH-20層析（丙酮）并半制備后得9 mg化合物17和7mg化合物18；D部分480mg，硅膠柱層析得28mg化合物7。

2.2結(jié)果鑒定

試驗(yàn)得到倍半萜8個(gè)、二萜7個(gè)、黃酮4個(gè)、三萜3個(gè)和生物堿1個(gè)，化合物共23個(gè)。波譜分析后，鑒定結(jié)構(gòu)為：4′，5，7-三羥基黃酮（1）［2］；4′，5，7-三羥基-3′-甲氧基黃酮（2）［3］；（S）-蕨素B（3）［4］；（R）-蕨素B（4）［4］；α-乙酰氨基-苯丙基-α-芐胺-丙酸丙酯（5）［5］；（2R，3S）-蕨素C（6）［6］；4′，5，7-三羥基-3′-甲氧基黃酮（7）［7］；2，6，15-三元醇16-雙鍵-貝殼杉烯（8）［8］；（24R）-Cycloart-25-ene-3β，24-diol（9）［9］；2，6-二醇-15-貝殼杉烷（10）［10］；2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-2，16-貝殼杉烷二醇（11）［10］；3′，4′，5，7-四羥基黃酮-7-O-L-鼠李吡喃苷（12）［11］；（ent-2，6，16）-貝殼杉烷三醇（13）［12］；（2R，3S）-蕨素C（14）［13］；（2R，3R）-蕨素C（15）［13］；（2S，3S）-蕨素C（16）［］；R-蕨素R（17）［13］；S-蕨素R（18）［13］；2，6，16-貝殼杉烷三醇（19）［14］；2，15-二醇16-雙鍵-貝殼杉烯（20）［14］；Creticoside（21）；β-谷甾醇（22）；齊墩果酸（23）?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1　各化合物結(jié)構(gòu)圖

3　討論

本試驗(yàn)中對(duì)大葉井口邊草的成分進(jìn)行了提取和分離，得倍半萜8個(gè)、二萜7個(gè)、黃酮4個(gè)、三萜3個(gè)和生物堿1個(gè)，化合物共23個(gè)，其中化合物10為首次在該植物中分離得到。本試驗(yàn)的目的是為了從蕨類植物中研究開發(fā)出一些有效的抗病毒成分，后期同實(shí)驗(yàn)室的研究人員對(duì)大葉井口邊草中提取的倍半萜和二萜進(jìn)行了抗艾滋病毒活性檢測(cè)，但均無相關(guān)活性。究其原因，初步推斷大葉井口邊草中的主要抗菌活性應(yīng)是其中的生物堿，但生物堿特別容易變化。在試驗(yàn)中很多時(shí)候看到生物堿快分離純了，可一經(jīng)提取放置，馬上就出現(xiàn)多點(diǎn)，無法提純。今后再做蕨類植物大葉井口邊草提取分離工作時(shí)，一定注意改進(jìn)試驗(yàn)條件，盡量穩(wěn)定其生物堿并加以提純，才會(huì)有更多的突破和發(fā)現(xiàn)。

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Study on Chem ical Com ponents of Pteris Cretica

Zhu Yanling1，2，Yang Yan2，Song Liudong3，Zhao Qinshi1
（1.Kunming Research Institute of Plant，Chinese Academy of Sciences，Kunming，Yunnan，China 650201；2.Haiyuan College of Kunming Medical Uni
versity，Kunming，Yunnan，China 650106；3.Kunming Medical University，Kunming，Yunnan，China 650500）

Objective To extract some anti-HIV virus chemical components from Pteris cretica.M ethods The silica gel column chromatography，gel column chromatography，reversed-phase column chromatography and high performance liquid chromatography were adopted to separate the ethyl acetate extractants of Pteris cretic.Results 23 chemical compounds including 8 sesquiterpenes，7 diterpenes，4 flavonoids，3 triterpenes and 1 alkaloid were obtained by the extraction and separation.Conclusion The extracted chemical compounds 10 separated from Pteris cretica are for the first time.Then the diterpenes and sesquiterpenes separated and extracted by the experiment are performed the anti-HIV activity test.But the results show no anti-HIV activity.

Pteris cretica；component；flavone；diterpene；riterpene

R284.1；R282.71

A

1006-4931（2015）16-0033-03

朱艷玲（1982-），女，云南宣威人，碩士研究生，助教，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)，（電子信箱）lingzi829@yeah.net；宋流東（1966-），男，湖南新田人，碩士研究生，教授，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)，本文通訊作者，（電子信箱）sldong66@163.com。

2015-02-05；

2015-04-22）

*云南省政府聯(lián)合基金項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：U0932602。