• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    天冬總皂苷的超聲提取工藝優(yōu)化

    2015-10-22 03:22:53丁麗娜陳東林周英信
    關(guān)鍵詞:菝葜總皂苷皂苷

    劉 亮,丁麗娜,陳東林,馮 華,周英信

    (1.遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州,遵義 563002; 2.遵義市藥品檢驗所,貴州,遵義 563000)

    天冬總皂苷的超聲提取工藝優(yōu)化

    *劉亮1,丁麗娜1,陳東林1,馮華2,周英信1

    (1.遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州,遵義 563002; 2.遵義市藥品檢驗所,貴州,遵義563000)

    目的探討天冬總皂苷含量的測定方法,優(yōu)化超聲提取工藝。方法以菝葜皂苷元為對照品,采用紫外分光光度法測定總皂苷的含量,用單因素實驗和正交實驗優(yōu)化超聲提取工藝。結(jié)果菝葜皂苷元質(zhì)量濃度在5.2~52 μg/mL之間線性關(guān)系良好(r = 0.9994),總皂苷平均回收率達到98.83%(RSD = 1.88%)。最佳超聲提取工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。結(jié)論總皂苷含量測定方法簡單、易行、準確,超聲提取工藝高效、快捷,易于推廣。

    天冬;總皂苷;超聲提取

    天冬為百合科植物天門冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]的塊根,是一種臨床常用中藥,具有養(yǎng)陰清熱,潤肺滋腎的功效,臨床上多用于治陰虛發(fā)熱、咳嗽吐血、肺癰、咽喉腫痛、消渴、便秘等病癥。通過文獻查閱,筆者發(fā)現(xiàn)天冬中含有多種甾體皂苷類、糖類、氨基酸類、還含有甾醇類、強心苷類及豐富的維生素等成分[1-2],其中甾體皂苷是天冬中所含有的一類重要活性成分,該類成分的藥理學研究目前主要有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗血小板凝聚等方面[3-4]。目前對其多糖、氨基酸提取工藝方面研究較少[5-6],對皂苷提取工藝研究更少[7],難以進行深入開發(fā)。本實驗以總皂苷含量為指標,對天冬超聲提取工藝進行優(yōu)化,以期為制定天冬藥材質(zhì)量標準和進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料與儀器

    天冬藥材采集于貴州遵義,經(jīng)遵義醫(yī)藥高等??茖W校張學愈副教授鑒定為百合科植物天門冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]的塊根;菝葜皂苷元對照品購于上海圻明生物科技有限公司(批號:126-19-2);所用水為高純水,其它試劑均為分析純。

    JBT/C-YCL400T/3P(D) 型超聲波藥品處理機(濟寧金百特工程機械有限公司);Aquelix 5型實驗室高純水系統(tǒng)(重慶市金富科技發(fā)展有限公司);UV2501紫外分光光度計(日本島津公司);Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司);FY130型藥物粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司);FA2004B型電子天平(上海越平科學儀器有限公司)。

    1.2實驗方法

    1.2.1天冬總皂苷的含量測定

    1.2.1.1供試品溶液的制備

    稱取天冬藥材粗粉5 g,置于100 mL具塞錐形瓶中,加入一定量的乙醇溶液,超聲提?。?8 kHz,150 W),過濾,濾液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中加水稀釋至刻度,搖勻。準確吸取10 mL于分液漏斗中,用水飽合正丁醇分3次萃取,每次15 mL,正丁醇萃取液再用正丁醇飽和的水20 mL萃取后,減壓回收正丁醇至干,殘渣用甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中,作為供試品溶液。

    1.2.1.2對照品溶液的制備

    精密稱取菝葜皂苷元對照品7.8 mg,置于25 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

    1.2.1.3測定波長的確定

    分別精密吸取對照品溶液0.3 mL、供試品溶液1.2 mL置于15 mL具塞試管中,揮干甲醇,再分別加入5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL,搖勻,密塞,60 ℃水浴顯色15 min,取出后立即用冰水冷卻5 min,再加入5 mL冰醋酸稀釋,搖勻,靜置10 min,在400~800 nm進行掃描,選擇最大吸收波長為測定波長[8]。

    1.2.1.4標準曲線的繪制

    分別精密移取菝葜皂苷元對照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于15 mL具塞試管內(nèi),揮干甲醇,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定其吸光度。以吸光度(A)為縱坐標,質(zhì)量濃度(C)為橫坐標,繪制標準曲線。

    1.2.2 超聲提取單因素實驗設(shè)計

    影響天冬皂苷超聲提取的因素很多,如提取功率、提取溫度、提取時間、溶劑濃度、溶劑倍量等。在查閱文獻[9-14]的基礎(chǔ)上,本實驗以乙醇作為提取溶劑,選取乙醇濃度(40%、50%、60%、70%、80%、90%) 、料液比( 1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 g/mL) 、提取溫度( 30、40、50、60、70、80℃)和提取時間( 10、20、30、40、50、60 min) 4因素6水平進行實驗,考察不同因素對天冬皂苷提取含量的影響,并篩選各因素的3個最佳水平。

    1.2.3超聲提取正交實驗設(shè)計

    根據(jù)單因素實驗結(jié)果,稱取天冬藥材粗粉,按L9(34)正交因素水平表進行實驗(表1),以優(yōu)化天冬皂苷的提取條件。應(yīng)用最佳的超聲提取工藝測定天冬中的皂苷,重復(fù)3次,以驗證本工藝的準確性。

    表1 正交實驗因素水平表Table 1 The factors and levels for the orthogonal design

    2 結(jié)果

    2.1 總皂苷含量測定

    2.1.1測定波長

    掃描圖譜顯示對照品在455 nm處有較大吸收峰(圖1),而樣品在455 nm處有最大吸收峰(圖2),故選擇455 nm為測定波長。

    圖1 對照品溶液吸收曲線Fig.1 Absorption curve of standard solution

    圖2 供試品溶液吸收曲線Fig.2 Absorption curve of test solution

    2.1.2 標準曲線的繪制

    由標準曲線(圖3)計算出回歸曲線方程為A = 0.01169C+0.03056,r = 0.9994。表明對照品菝葜皂苷元質(zhì)量濃度在5.2~52 μg/mL與吸光度呈良好線性關(guān)系。

    圖3 菝葜皂苷元的標準曲線Fig.3 Standard curve of sarsasapogenin

    2.1.3總皂苷含量測定方法學考察

    2.1.3.1精密度實驗

    精密吸取對照液0.8 mL,共6份,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,結(jié)果RSD為0.50%,表明方法的精密度良好。

    2.1.3.2穩(wěn)定性實驗

    分別精密吸取對照品溶液0.3 mL、供試品溶液0.6 mL,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處分別在0、10、20、30、60、90、120 min測定吸光度,結(jié)果表明對照液及供試液顯色后在120 min內(nèi)穩(wěn)定,RSD分別為1.02%,1.42%。

    2.1.3.3重復(fù)性實驗

    精密稱取同一批樣品5 g,共6份,按1.2.1.1及1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,并計算含量,結(jié)果平均含量為0.90 %,RSD為0.73 %,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.1.3.4加標回收率實驗

    精密吸取已知含量的樣品溶液0.6 mL于具塞試管中,共6份,分別加入對照品溶液0.3 mL,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,計算加標回收率。結(jié)果總皂苷平均回收率為98.83%,RSD為1.88%。

    2.2超聲提取單因素實驗結(jié)果

    2.2.1乙醇濃度的影響

    由圖4可知(提取溫度60℃、時間30 min、料液比1:20),乙醇濃度在40%~90% 范圍內(nèi),天冬皂苷的提取量隨乙醇濃度的增加呈先增加后減少的趨勢。根據(jù)相似相容原理,隨著乙醇濃度的增加,當其極性越接近于天冬皂苷的極性時,有利于提取,當乙醇濃度增加到50 % 時,皂苷提取量即達到最高。其中以40%~60% 的乙醇溶液提取的皂苷含量相對較高,因此選擇乙醇濃度40 %、50 %、60 %作為正交實驗的3水平。

    2.2.2料液比的影響

    圖4 乙醇濃度對總皂苷含量的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on the extraction of total saponins

    由圖5可知(提取溫度60 ℃、時間30 min、乙醇濃度50 %),當料液比為1:15(g/mL)以上后總皂苷提取量基本無變化,說明提取已達到平衡狀態(tài)。從提取率和成本等方面考慮,乙醇的用量不宜過大,因此選取料液比為1:10、1:15、1:20(g/mL)作為正交實驗的3水平。

    圖5 料液比對總皂苷含量的影響Fig.5 Effect of solid-to-liquid ratio on the extraction of total saponins

    2.2.3 提取溫度的影響

    由圖6可知(提取時間30 min、料液比1:15、乙醇濃度50%),提取溫度在30~50 ℃范圍內(nèi),皂苷提取量隨溫度的升高而明顯增加;在50~80 ℃范圍內(nèi),皂苷提取量逐漸下降,說明溫度過低或過高均不利用皂苷的提取。因此選擇40 ℃、50 ℃、60 ℃作為正交實驗的3水平。

    圖6 提取溫度對總皂苷含量的影響Fig.6 Effect of temperature on extraction content of total saponins

    2.2.4 提取時間的影響

    由圖7可知(提取溫度50 ℃、料液比1:15、乙醇濃度50%),在15~20 min范圍內(nèi),皂苷提取量隨時間的延長而顯著增加;當提取時間超過20 min之后,提取含量極緩慢下降,說明提取已達到平衡狀態(tài)。因此選擇10、20、30 min作為正交實驗的3水平。

    圖7 提取時間對總皂苷含量的影響Fig.7 Effect of time on extraction content of total saponins

    2.3 超聲提取正交實驗

    根據(jù)單因素實驗結(jié)果,可以基本確定天冬皂苷超聲提取時乙醇濃度、料液比、提取時間和提取溫度的合理范圍,在此基礎(chǔ)上設(shè)計正交實驗,以確定其超聲提取的最佳工藝。正交實驗結(jié)果及分析見表2和表3。

    表2 正交實驗結(jié)果Table 2 Results of reciprocal orthogonal test

    表3 方差分析Table 3 Variance analyses

    由表2 、表3 可見,乙醇濃度對實驗結(jié)果具有顯著性影響(P < 0.05),影響因素主次順序為D >B > C > A,最優(yōu)工藝為A3B2C3D2,即超聲提取的最佳工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。按照正交實驗得出的最佳提取工藝做3次重復(fù)實驗,天冬總皂苷含量平均值為0.94 %,RSD 為0.52 %。

    3 討論

    皂苷分子結(jié)構(gòu)中無共軛雙鍵,在紫外可見光區(qū)無特征性吸收峰,可以利用顯色反應(yīng)后在可見光范圍產(chǎn)生特征性吸收峰。根據(jù)前期文獻的研究,結(jié)合紫外法的顯色特點,實驗以菝葜皂苷元為對照品,采用香草醛-高氯酸法顯色,對天冬中總皂苷的含量測定進行了方法學考察,顯色過程中應(yīng)嚴格控制溫度和時間。

    超聲提取方法的原理是利用超聲波的機械作用、空化作用等達到植物細胞的破碎,加速有效成分的溶出、擴散,具有省時、節(jié)能、操作簡便等優(yōu)點。從理論上考慮,提取時間越長、溫度越高,總皂苷得率應(yīng)越高,但單因素實驗結(jié)果不支持該觀點,可能是因為提取時間過長、溫度過高、超聲強化作用增加了雜質(zhì)的溶出,從而導(dǎo)致總皂苷溶解量減少??傇碥盏募兓壤闷湓诤〈贾腥芙舛容^大的性質(zhì)進行萃取,進而用水萃取除去水溶性的雜質(zhì),可以得到純化的總皂苷。由于皂苷具有很強的發(fā)泡性,故在濃縮過程中應(yīng)時刻注意,避免濃縮液沖出,影響實驗結(jié)果的準確性。本實驗通過單因素實驗及正交實驗優(yōu)選天冬超聲提取工藝,單因素實驗分別考察了乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度對皂苷提取效果的影響,根據(jù)單因素實驗結(jié)果,選擇4因素3水平進行正交實驗,研究結(jié)果表明只有乙醇濃度對總皂苷的含量有顯著性影響,影響因素主次順序為D > B > C > A,最佳工藝為A3B2C3D2,即超聲提取的最佳工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。實驗之初對天冬總皂苷回流提取法進行了研究,回流提取工藝為提取時間1.5 h、乙醇倍數(shù)8倍、乙醇濃度70%、提取次數(shù)3次,含量可達到1.12%,略高于超聲法,但超聲法提取快速高效的優(yōu)勢是回流法無法比擬的。依照超聲法最佳提取工藝做3次重復(fù)實驗,天冬總皂苷提取含量平均值0.94 %(已對此數(shù)據(jù)進行核實,確為天冬總皂苷的含量,與參考文獻7比較要低些,但顯色方法及測量波長不一樣,所以總皂苷的含量就不一樣),RSD為0.52 %。驗證實驗證實,優(yōu)化后的工藝路線穩(wěn)定可行,操作簡便,節(jié)省時間和溶劑,可為天冬的生產(chǎn)應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)和參考。

    [1] 王紅然.二冬膏的化學成分及抗氧化活性研究[D].長春: 吉林農(nóng)業(yè)大學, 2008.

    [2] 沈陽, 陳海生, 王瓊.天冬化學成分的研究[J].第二軍醫(yī)大學學報, 2007, 28(11): 1241-1244.

    [3] 李艷菊, 李琴山, 劉 洋.貴州產(chǎn)天冬水提液對氧自由基的作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2011,39(28): 17230-17231.

    [4] 李琴山, 劉 洋, 李艷菊.天冬總皂苷對衰老腎臟抗氧化作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥, 2011, 22(9): 2121-2122.

    [5] 劉亮, 劉英波, 周英信, 等.天冬中總氨基酸的水提取工藝研究[J].甘肅中醫(yī)學院學報, 2013, 30(1): 59-60.[6] 王明艷, 魯加峰, 王曉順, 等.響應(yīng)面法優(yōu)化天冬多糖的提取條件[J].食品科學, 2010, 31(6): 91-95.

    [7] 杜芳權(quán), 顏繼忠.超聲提取天冬多糖和總皂苷工藝研究[J].科技資訊, 2011, 9(21): 96-97.

    [8] 曾建軍, 周兵, 姚靈,等.劍葉金雞菊植株不同器官總黃酮和總皂甙含量的測定[J].井岡山大學學報:自然科學版, 2011, 32(2): 50-53.

    [9] 孟憲軍, 潘璇, 李天來, 等.超聲提取長白楤木嫩芽中皂苷的工藝優(yōu)化[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2010, 36(8): 190-193.

    [10] 劉健劍, 何計國.超聲提取米邦塔仙人掌總皂苷的工藝優(yōu)化[J].食品科學, 2010, 31(16): 38-41.

    [11] 易運紅, 吳功慶, 王蓮婧, 等.金櫻根總皂苷的超聲提取工藝研究[J].食品工業(yè)科技, 2011, 32(5): 270-272.

    [12] 李開泉, 曾曉敏.枸骨葉中熊果酸的提取工藝研究[J].井岡山大學學報:自然科學版, 2012, 33(6): 21-23.

    [13] 揭晶, 趙越, 王皓.Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化蘆筍總皂苷超聲提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志, 2014,20(8): 8-11.

    [14] 楊健, 苗芳, 趙偉, 等.正交設(shè)計優(yōu)選鐵筷子甾體皂苷成分的超聲提取工藝[J].西北農(nóng)業(yè)學報, 2007, 16(2): 90-93.

    ULTRASONIC EXTRACTION OPTIMIZATION OF TOTAL SAPONINS FROM ASPARAGUS COCHINCHINENSIS (LOUR.) MERR.

    *LIU Liang1, DING Li-na1, CHEN Dong-lin1, FENG Hua2, ZHOU Ying-xin1

    (1.Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Zunyi, Guizhou 563002, China;2.Zunyi Institute for Drug Control, Zunyi, Guizhou 563000, China)

    Objective: To develop a method for determining the content of total saponins in Asparagus cochinchinensis and optimize its ultrasonic extraction process.Methods: Sarsasapogenin as the control sample,the content of total saponins was determined by ultraviolet spectrophotometry.Optimization of the ultrasonic extraction process of total saponins was performed using single factor and orthogonal array design methods.Results: The calibration curve of the sarsasapogenin was linear (r = 0.9994) in the range of 5.2~52 μg/mL with average spike recovery of 98.83% (RSD = 1.88%).The optimum ultrasonic extraction conditions were found to be: ethanol concentration of 50%, solid-to-liquid ratio of 1:20, extraction temperature of 60℃, ultrasonic extraction duration of 20 minutes.Conclusion: The developed method for total saponins determination is simple, feasible and accurate.The optimized extraction process is efficient and quick, and easy to popularize.

    Asparagus cochinchinensis; total saponins; ultrasonic extraction

    R284.2

    ADOI:10.3969/j.issn.1674-8085.2015.02.020

    1674-8085(2015)02-0081-06

    2015-01-09;修改日期:2015-03-01

    遵義市科技局、遵義醫(yī)藥高等??茖W校聯(lián)合科技計劃項目(遵市科合社字【2013】24號);遵義市匯川區(qū)科技計劃項目。作者簡介:*劉亮(1981-),男,重慶萬州人,副教授,主要從事中藥、民族藥化學成分及質(zhì)量研究(E-mail:jikman1@163.com);

    丁麗娜(1981-),女,貴州遵義人,講師,主要從事天然藥物化學成分及質(zhì)量研究(E-mail:lifewaterdln0681@qq.com);

    陳東林(1961-),女,貴州遵義人,教授,主要從事蔬菜化肥、農(nóng)藥含量(E-mail:1064618089@qq.com);

    馮華(1978-),男,貴州遵義人,主管藥師,主要從事新藥研究及藥品檢驗(E-mail:fenghua781014@yahoo.com.cn);

    周英信(1962-),男,貴州遵義人,教授,主要從事脾胃病證治研究(E-mail:E-mail:1487476788@qq.com).

    猜你喜歡
    菝葜總皂苷皂苷
    基于ITS2一級序列和二級結(jié)構(gòu)對土茯苓及混偽品的鑒別研究△
    三七總皂苷調(diào)節(jié)PDGF-BB/PDGFR-β的表達促進大鼠淺表Ⅱ°燒傷創(chuàng)面愈合
    菝葜根莖色素的提取及穩(wěn)定性研究
    中藥菝葜的化學成分及藥理作用研究進展*
    化學工程師(2020年2期)2020-01-15 05:34:38
    HPLC-MS/MS法同時測定三七花總皂苷中2種成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:04
    三七總皂苷緩釋片處方的優(yōu)化
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:10
    HPLC法測定大鼠皮膚中三七皂苷R1和人參皂苷Rb1
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:40
    三七總皂苷膠束狀態(tài)與超濾分離的相關(guān)性
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:44
    HPLC法同時測定熟三七散中13種皂苷
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:34
    黑果菝葜根莖化學成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:00
    国产欧美日韩一区二区三| 国产成人欧美在线观看| 午夜福利免费观看在线| 12—13女人毛片做爰片一| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产午夜精品论理片| 在线观看66精品国产| 国产精品一区二区性色av| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 熟女电影av网| 国产亚洲精品av在线| 亚洲午夜理论影院| 韩国av一区二区三区四区| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲美女黄片视频| 欧美性感艳星| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲综合色惰| 色播亚洲综合网| 两人在一起打扑克的视频| 欧美潮喷喷水| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产亚洲精品久久久com| 国产久久久一区二区三区| 久久精品国产亚洲av天美| 91在线观看av| 免费看a级黄色片| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧美清纯卡通| 成人美女网站在线观看视频| 一区二区三区激情视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| www.www免费av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 精品人妻偷拍中文字幕| 哪里可以看免费的av片| 禁无遮挡网站| 成人美女网站在线观看视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品av视频在线免费观看| 我要看日韩黄色一级片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中文字幕久久专区| 色哟哟哟哟哟哟| 我的女老师完整版在线观看| 免费观看的影片在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品欧美国产一区二区三| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 黄色日韩在线| 亚洲av.av天堂| 亚洲黑人精品在线| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜福利免费观看在线| 美女 人体艺术 gogo| 国内精品久久久久精免费| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲国产精品999在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 黄色女人牲交| 亚洲最大成人手机在线| 免费观看精品视频网站| 永久网站在线| 有码 亚洲区| 麻豆国产av国片精品| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲精品在线美女| 国产三级黄色录像| 亚洲成a人片在线一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产三级中文精品| 一级毛片久久久久久久久女| 免费黄网站久久成人精品 | 毛片女人毛片| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品在线观看二区| 一夜夜www| 国产精品伦人一区二区| 少妇高潮的动态图| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美在线一区亚洲| 亚洲欧美激情综合另类| 在线看三级毛片| 免费看a级黄色片| 国产精品影院久久| 国产精品av视频在线免费观看| 51午夜福利影视在线观看| 女人被狂操c到高潮| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 日韩免费av在线播放| 国产三级在线视频| 亚洲精品一区av在线观看| 国产av在哪里看| 免费看a级黄色片| 久久国产乱子伦精品免费另类| 婷婷色综合大香蕉| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲av美国av| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区二区在线观看日韩| 久久中文看片网| 久久久久久大精品| 99在线人妻在线中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 中文字幕熟女人妻在线| 我的老师免费观看完整版| 激情在线观看视频在线高清| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 老女人水多毛片| 亚洲不卡免费看| 国产成人a区在线观看| 99热6这里只有精品| 成人无遮挡网站| 免费搜索国产男女视频| 亚洲av免费在线观看| 亚洲美女黄片视频| 亚洲,欧美,日韩| 精品久久久久久久久久免费视频| xxxwww97欧美| 午夜精品在线福利| 岛国在线免费视频观看| 最后的刺客免费高清国语| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 一进一出好大好爽视频| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 成年女人永久免费观看视频| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久国产a免费观看| 最近最新免费中文字幕在线| 精品日产1卡2卡| 婷婷丁香在线五月| 听说在线观看完整版免费高清| 一进一出好大好爽视频| 日韩精品青青久久久久久| 国语自产精品视频在线第100页| 91九色精品人成在线观看| 脱女人内裤的视频| 天天一区二区日本电影三级| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单 | 精品国产三级普通话版| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产乱人伦免费视频| 日本一本二区三区精品| 色综合婷婷激情| 搡老熟女国产l中国老女人| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲av成人av| 午夜免费激情av| 亚洲欧美精品综合久久99| netflix在线观看网站| 成人国产一区最新在线观看| 国产av不卡久久| 99在线视频只有这里精品首页| 日本一本二区三区精品| 一区二区三区激情视频| 天堂动漫精品| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 一进一出好大好爽视频| 最后的刺客免费高清国语| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲午夜理论影院| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品久久久久久久久av| 一本一本综合久久| 国产色爽女视频免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲成人免费电影在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 夜夜夜夜夜久久久久| 9191精品国产免费久久| 国产精品影院久久| 国产一区二区激情短视频| or卡值多少钱| 97热精品久久久久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品一区二区免费欧美| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| eeuss影院久久| 中文亚洲av片在线观看爽| 成人国产综合亚洲| 免费av观看视频| 国产在线男女| 久久久精品大字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产野战对白在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产淫片久久久久久久久 | 看黄色毛片网站| 一区二区三区高清视频在线| 深夜精品福利| 日韩亚洲欧美综合| 青草久久国产| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美黑人欧美精品刺激| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲精品在线观看二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 1000部很黄的大片| 精品久久久久久,| 国产精品一区二区三区四区久久| 一夜夜www| 成人鲁丝片一二三区免费| 成人一区二区视频在线观看| 波野结衣二区三区在线| 婷婷六月久久综合丁香| 国产高清有码在线观看视频| 免费观看的影片在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 直男gayav资源| 久久久色成人| 日韩有码中文字幕| www.www免费av| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日本熟妇午夜| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久色成人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 91狼人影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲av成人av| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国内精品美女久久久久久| 草草在线视频免费看| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| av国产免费在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 精品久久久久久久久久久久久| 别揉我奶头 嗯啊视频| 日韩国内少妇激情av| 亚洲 国产 在线| 最新中文字幕久久久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 听说在线观看完整版免费高清| 国产淫片久久久久久久久 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲成人精品中文字幕电影| 毛片一级片免费看久久久久 | 精品一区二区三区视频在线| 免费观看精品视频网站| 国产精品一区二区性色av| 波多野结衣高清作品| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久性生活片| 丁香六月欧美| 久久热精品热| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| .国产精品久久| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产极品精品免费视频能看的| 久久亚洲精品不卡| 午夜免费激情av| 国产精品不卡视频一区二区 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 淫妇啪啪啪对白视频| 色哟哟哟哟哟哟| 久久久久久大精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美日韩综合久久久久久 | 日本熟妇午夜| 久久欧美精品欧美久久欧美| 成人特级av手机在线观看| av女优亚洲男人天堂| 成人精品一区二区免费| 精品人妻视频免费看| 最近在线观看免费完整版| .国产精品久久| 欧美日韩乱码在线| 国产亚洲精品av在线| 天堂√8在线中文| 直男gayav资源| 深夜a级毛片| 熟女人妻精品中文字幕| 在线a可以看的网站| 一级毛片久久久久久久久女| 在线观看舔阴道视频| 亚洲熟妇熟女久久| 看免费av毛片| 男女床上黄色一级片免费看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 熟女人妻精品中文字幕| 国产高潮美女av| www.www免费av| 99久久九九国产精品国产免费| or卡值多少钱| 99久久99久久久精品蜜桃| 少妇的逼好多水| 级片在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| www.熟女人妻精品国产| avwww免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品影院久久| 午夜激情福利司机影院| 此物有八面人人有两片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲中文字幕日韩| 高清毛片免费观看视频网站| 免费av不卡在线播放| 69人妻影院| 91狼人影院| 欧美性猛交黑人性爽| 久久久精品大字幕| 免费高清视频大片| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美午夜高清在线| 又爽又黄a免费视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 一夜夜www| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品综合一区二区三区| 赤兔流量卡办理| АⅤ资源中文在线天堂| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品野战在线观看| 变态另类丝袜制服| 免费人成在线观看视频色| 男女床上黄色一级片免费看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品,欧美在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产高清激情床上av| 成人亚洲精品av一区二区| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 搡老岳熟女国产| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 嫩草影视91久久| 国产成人aa在线观看| av在线蜜桃| 欧美成狂野欧美在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 毛片一级片免费看久久久久 | 999久久久精品免费观看国产| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲色图av天堂| 久久6这里有精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 午夜福利免费观看在线| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 淫秽高清视频在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩欧美在线乱码| 亚洲av一区综合| 国产午夜精品论理片| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 男女之事视频高清在线观看| 少妇高潮的动态图| 嫩草影院入口| 日本成人三级电影网站| www.www免费av| 国产精品久久久久久久电影| 久久午夜亚洲精品久久| 国产高清视频在线播放一区| 可以在线观看的亚洲视频| 91字幕亚洲| 搡老熟女国产l中国老女人| 综合色av麻豆| 搡老熟女国产l中国老女人| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 伊人久久精品亚洲午夜| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 美女cb高潮喷水在线观看| 精品国产亚洲在线| 亚洲最大成人手机在线| 1000部很黄的大片| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品亚洲一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 如何舔出高潮| 丰满的人妻完整版| 国产色婷婷99| 国产精品日韩av在线免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 18禁在线播放成人免费| 亚洲最大成人中文| 色播亚洲综合网| 一级黄色大片毛片| 真人一进一出gif抽搐免费| 12—13女人毛片做爰片一| 一进一出抽搐动态| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美3d第一页| 久久这里只有精品中国| 真实男女啪啪啪动态图| 变态另类丝袜制服| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美日韩乱码在线| 国产精品1区2区在线观看.| 久久久久国内视频| 色哟哟哟哟哟哟| 一进一出抽搐动态| 精品人妻视频免费看| 中文字幕免费在线视频6| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 成人特级av手机在线观看| 午夜日韩欧美国产| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精华国产精华精| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产人妻一区二区三区在| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产视频内射| 精品国产三级普通话版| 日本一本二区三区精品| 久久久久久大精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美三级亚洲精品| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲美女黄片视频| 亚洲第一电影网av| 亚洲内射少妇av| 国产亚洲精品综合一区在线观看| а√天堂www在线а√下载| 波野结衣二区三区在线| 久久久国产成人免费| or卡值多少钱| 成年女人毛片免费观看观看9| 精华霜和精华液先用哪个| 久久伊人香网站| 亚洲,欧美精品.| 免费观看精品视频网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 波野结衣二区三区在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99热6这里只有精品| 亚洲精品成人久久久久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 午夜两性在线视频| 国产人妻一区二区三区在| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲avbb在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产三级黄色录像| 特级一级黄色大片| a在线观看视频网站| 免费在线观看影片大全网站| 国产69精品久久久久777片| 欧美bdsm另类| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 老鸭窝网址在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 午夜激情福利司机影院| 五月伊人婷婷丁香| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲18禁久久av| 中文字幕高清在线视频| 久久亚洲真实| 悠悠久久av| 亚洲一区高清亚洲精品| 宅男免费午夜| 国产伦精品一区二区三区四那| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 男女之事视频高清在线观看| 国产视频一区二区在线看| 最近在线观看免费完整版| 亚洲自拍偷在线| 亚洲第一电影网av| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久午夜福利片| 日韩人妻高清精品专区| 色av中文字幕| 深夜精品福利| 欧美+日韩+精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品一区二区三区四区久久| 中文资源天堂在线| 性色avwww在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 中出人妻视频一区二区| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 一个人看视频在线观看www免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 嫩草影视91久久| 色视频www国产| 91av网一区二区| 国产单亲对白刺激| 丁香欧美五月| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲人成网站在线播| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲av熟女| 国产色婷婷99| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 久久久成人免费电影| 久久伊人香网站| 国产精品久久久久久精品电影| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 少妇丰满av| 久久精品影院6| 日本三级黄在线观看| 亚洲av美国av| 国产av麻豆久久久久久久| 一a级毛片在线观看| 亚洲人成网站在线播| 美女黄网站色视频| 九色国产91popny在线| 国产av在哪里看| 51国产日韩欧美| 国产乱人视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产熟女xx| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线观看舔阴道视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美在线黄色| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲片人在线观看| 国产av一区在线观看免费| 宅男免费午夜| 99热精品在线国产| 88av欧美| 窝窝影院91人妻| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜久久久久精精品| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲三级黄色毛片| 综合色av麻豆| 韩国av一区二区三区四区| 一夜夜www| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产成人aa在线观看| 黄色女人牲交| 亚洲一区二区三区不卡视频| 午夜福利视频1000在线观看| 91av网一区二区| 可以在线观看毛片的网站| а√天堂www在线а√下载| 一进一出抽搐gif免费好疼| 午夜福利成人在线免费观看| 国产三级黄色录像| 日本成人三级电影网站| 两人在一起打扑克的视频| 久久久久久久久久黄片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 成人性生交大片免费视频hd| av欧美777| 国产精品人妻久久久久久| 99riav亚洲国产免费| 国产真实伦视频高清在线观看 | 日本黄大片高清| 免费看日本二区| АⅤ资源中文在线天堂| 婷婷精品国产亚洲av| 在线看三级毛片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品av视频在线免费观看| 国产熟女xx| 精品欧美国产一区二区三| 热99在线观看视频| 韩国av一区二区三区四区| 好男人在线观看高清免费视频| 国产野战对白在线观看| 免费人成在线观看视频色| 一区二区三区免费毛片| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产高清三级在线| 免费搜索国产男女视频| 婷婷精品国产亚洲av在线|