• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    天冬總皂苷的超聲提取工藝優(yōu)化

    2015-10-22 03:22:53丁麗娜陳東林周英信
    關(guān)鍵詞:菝葜總皂苷皂苷

    劉 亮,丁麗娜,陳東林,馮 華,周英信

    (1.遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州,遵義 563002; 2.遵義市藥品檢驗所,貴州,遵義 563000)

    天冬總皂苷的超聲提取工藝優(yōu)化

    *劉亮1,丁麗娜1,陳東林1,馮華2,周英信1

    (1.遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州,遵義 563002; 2.遵義市藥品檢驗所,貴州,遵義563000)

    目的探討天冬總皂苷含量的測定方法,優(yōu)化超聲提取工藝。方法以菝葜皂苷元為對照品,采用紫外分光光度法測定總皂苷的含量,用單因素實驗和正交實驗優(yōu)化超聲提取工藝。結(jié)果菝葜皂苷元質(zhì)量濃度在5.2~52 μg/mL之間線性關(guān)系良好(r = 0.9994),總皂苷平均回收率達到98.83%(RSD = 1.88%)。最佳超聲提取工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。結(jié)論總皂苷含量測定方法簡單、易行、準確,超聲提取工藝高效、快捷,易于推廣。

    天冬;總皂苷;超聲提取

    天冬為百合科植物天門冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]的塊根,是一種臨床常用中藥,具有養(yǎng)陰清熱,潤肺滋腎的功效,臨床上多用于治陰虛發(fā)熱、咳嗽吐血、肺癰、咽喉腫痛、消渴、便秘等病癥。通過文獻查閱,筆者發(fā)現(xiàn)天冬中含有多種甾體皂苷類、糖類、氨基酸類、還含有甾醇類、強心苷類及豐富的維生素等成分[1-2],其中甾體皂苷是天冬中所含有的一類重要活性成分,該類成分的藥理學研究目前主要有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗血小板凝聚等方面[3-4]。目前對其多糖、氨基酸提取工藝方面研究較少[5-6],對皂苷提取工藝研究更少[7],難以進行深入開發(fā)。本實驗以總皂苷含量為指標,對天冬超聲提取工藝進行優(yōu)化,以期為制定天冬藥材質(zhì)量標準和進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料與儀器

    天冬藥材采集于貴州遵義,經(jīng)遵義醫(yī)藥高等??茖W校張學愈副教授鑒定為百合科植物天門冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]的塊根;菝葜皂苷元對照品購于上海圻明生物科技有限公司(批號:126-19-2);所用水為高純水,其它試劑均為分析純。

    JBT/C-YCL400T/3P(D) 型超聲波藥品處理機(濟寧金百特工程機械有限公司);Aquelix 5型實驗室高純水系統(tǒng)(重慶市金富科技發(fā)展有限公司);UV2501紫外分光光度計(日本島津公司);Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司);FY130型藥物粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司);FA2004B型電子天平(上海越平科學儀器有限公司)。

    1.2實驗方法

    1.2.1天冬總皂苷的含量測定

    1.2.1.1供試品溶液的制備

    稱取天冬藥材粗粉5 g,置于100 mL具塞錐形瓶中,加入一定量的乙醇溶液,超聲提?。?8 kHz,150 W),過濾,濾液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中加水稀釋至刻度,搖勻。準確吸取10 mL于分液漏斗中,用水飽合正丁醇分3次萃取,每次15 mL,正丁醇萃取液再用正丁醇飽和的水20 mL萃取后,減壓回收正丁醇至干,殘渣用甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中,作為供試品溶液。

    1.2.1.2對照品溶液的制備

    精密稱取菝葜皂苷元對照品7.8 mg,置于25 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

    1.2.1.3測定波長的確定

    分別精密吸取對照品溶液0.3 mL、供試品溶液1.2 mL置于15 mL具塞試管中,揮干甲醇,再分別加入5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL,搖勻,密塞,60 ℃水浴顯色15 min,取出后立即用冰水冷卻5 min,再加入5 mL冰醋酸稀釋,搖勻,靜置10 min,在400~800 nm進行掃描,選擇最大吸收波長為測定波長[8]。

    1.2.1.4標準曲線的繪制

    分別精密移取菝葜皂苷元對照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于15 mL具塞試管內(nèi),揮干甲醇,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定其吸光度。以吸光度(A)為縱坐標,質(zhì)量濃度(C)為橫坐標,繪制標準曲線。

    1.2.2 超聲提取單因素實驗設(shè)計

    影響天冬皂苷超聲提取的因素很多,如提取功率、提取溫度、提取時間、溶劑濃度、溶劑倍量等。在查閱文獻[9-14]的基礎(chǔ)上,本實驗以乙醇作為提取溶劑,選取乙醇濃度(40%、50%、60%、70%、80%、90%) 、料液比( 1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 g/mL) 、提取溫度( 30、40、50、60、70、80℃)和提取時間( 10、20、30、40、50、60 min) 4因素6水平進行實驗,考察不同因素對天冬皂苷提取含量的影響,并篩選各因素的3個最佳水平。

    1.2.3超聲提取正交實驗設(shè)計

    根據(jù)單因素實驗結(jié)果,稱取天冬藥材粗粉,按L9(34)正交因素水平表進行實驗(表1),以優(yōu)化天冬皂苷的提取條件。應(yīng)用最佳的超聲提取工藝測定天冬中的皂苷,重復(fù)3次,以驗證本工藝的準確性。

    表1 正交實驗因素水平表Table 1 The factors and levels for the orthogonal design

    2 結(jié)果

    2.1 總皂苷含量測定

    2.1.1測定波長

    掃描圖譜顯示對照品在455 nm處有較大吸收峰(圖1),而樣品在455 nm處有最大吸收峰(圖2),故選擇455 nm為測定波長。

    圖1 對照品溶液吸收曲線Fig.1 Absorption curve of standard solution

    圖2 供試品溶液吸收曲線Fig.2 Absorption curve of test solution

    2.1.2 標準曲線的繪制

    由標準曲線(圖3)計算出回歸曲線方程為A = 0.01169C+0.03056,r = 0.9994。表明對照品菝葜皂苷元質(zhì)量濃度在5.2~52 μg/mL與吸光度呈良好線性關(guān)系。

    圖3 菝葜皂苷元的標準曲線Fig.3 Standard curve of sarsasapogenin

    2.1.3總皂苷含量測定方法學考察

    2.1.3.1精密度實驗

    精密吸取對照液0.8 mL,共6份,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,結(jié)果RSD為0.50%,表明方法的精密度良好。

    2.1.3.2穩(wěn)定性實驗

    分別精密吸取對照品溶液0.3 mL、供試品溶液0.6 mL,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處分別在0、10、20、30、60、90、120 min測定吸光度,結(jié)果表明對照液及供試液顯色后在120 min內(nèi)穩(wěn)定,RSD分別為1.02%,1.42%。

    2.1.3.3重復(fù)性實驗

    精密稱取同一批樣品5 g,共6份,按1.2.1.1及1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,并計算含量,結(jié)果平均含量為0.90 %,RSD為0.73 %,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.1.3.4加標回收率實驗

    精密吸取已知含量的樣品溶液0.6 mL于具塞試管中,共6份,分別加入對照品溶液0.3 mL,按1.2.1.3項下的操作方法顯色,于455 nm處測定吸光度,計算加標回收率。結(jié)果總皂苷平均回收率為98.83%,RSD為1.88%。

    2.2超聲提取單因素實驗結(jié)果

    2.2.1乙醇濃度的影響

    由圖4可知(提取溫度60℃、時間30 min、料液比1:20),乙醇濃度在40%~90% 范圍內(nèi),天冬皂苷的提取量隨乙醇濃度的增加呈先增加后減少的趨勢。根據(jù)相似相容原理,隨著乙醇濃度的增加,當其極性越接近于天冬皂苷的極性時,有利于提取,當乙醇濃度增加到50 % 時,皂苷提取量即達到最高。其中以40%~60% 的乙醇溶液提取的皂苷含量相對較高,因此選擇乙醇濃度40 %、50 %、60 %作為正交實驗的3水平。

    2.2.2料液比的影響

    圖4 乙醇濃度對總皂苷含量的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on the extraction of total saponins

    由圖5可知(提取溫度60 ℃、時間30 min、乙醇濃度50 %),當料液比為1:15(g/mL)以上后總皂苷提取量基本無變化,說明提取已達到平衡狀態(tài)。從提取率和成本等方面考慮,乙醇的用量不宜過大,因此選取料液比為1:10、1:15、1:20(g/mL)作為正交實驗的3水平。

    圖5 料液比對總皂苷含量的影響Fig.5 Effect of solid-to-liquid ratio on the extraction of total saponins

    2.2.3 提取溫度的影響

    由圖6可知(提取時間30 min、料液比1:15、乙醇濃度50%),提取溫度在30~50 ℃范圍內(nèi),皂苷提取量隨溫度的升高而明顯增加;在50~80 ℃范圍內(nèi),皂苷提取量逐漸下降,說明溫度過低或過高均不利用皂苷的提取。因此選擇40 ℃、50 ℃、60 ℃作為正交實驗的3水平。

    圖6 提取溫度對總皂苷含量的影響Fig.6 Effect of temperature on extraction content of total saponins

    2.2.4 提取時間的影響

    由圖7可知(提取溫度50 ℃、料液比1:15、乙醇濃度50%),在15~20 min范圍內(nèi),皂苷提取量隨時間的延長而顯著增加;當提取時間超過20 min之后,提取含量極緩慢下降,說明提取已達到平衡狀態(tài)。因此選擇10、20、30 min作為正交實驗的3水平。

    圖7 提取時間對總皂苷含量的影響Fig.7 Effect of time on extraction content of total saponins

    2.3 超聲提取正交實驗

    根據(jù)單因素實驗結(jié)果,可以基本確定天冬皂苷超聲提取時乙醇濃度、料液比、提取時間和提取溫度的合理范圍,在此基礎(chǔ)上設(shè)計正交實驗,以確定其超聲提取的最佳工藝。正交實驗結(jié)果及分析見表2和表3。

    表2 正交實驗結(jié)果Table 2 Results of reciprocal orthogonal test

    表3 方差分析Table 3 Variance analyses

    由表2 、表3 可見,乙醇濃度對實驗結(jié)果具有顯著性影響(P < 0.05),影響因素主次順序為D >B > C > A,最優(yōu)工藝為A3B2C3D2,即超聲提取的最佳工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。按照正交實驗得出的最佳提取工藝做3次重復(fù)實驗,天冬總皂苷含量平均值為0.94 %,RSD 為0.52 %。

    3 討論

    皂苷分子結(jié)構(gòu)中無共軛雙鍵,在紫外可見光區(qū)無特征性吸收峰,可以利用顯色反應(yīng)后在可見光范圍產(chǎn)生特征性吸收峰。根據(jù)前期文獻的研究,結(jié)合紫外法的顯色特點,實驗以菝葜皂苷元為對照品,采用香草醛-高氯酸法顯色,對天冬中總皂苷的含量測定進行了方法學考察,顯色過程中應(yīng)嚴格控制溫度和時間。

    超聲提取方法的原理是利用超聲波的機械作用、空化作用等達到植物細胞的破碎,加速有效成分的溶出、擴散,具有省時、節(jié)能、操作簡便等優(yōu)點。從理論上考慮,提取時間越長、溫度越高,總皂苷得率應(yīng)越高,但單因素實驗結(jié)果不支持該觀點,可能是因為提取時間過長、溫度過高、超聲強化作用增加了雜質(zhì)的溶出,從而導(dǎo)致總皂苷溶解量減少??傇碥盏募兓壤闷湓诤〈贾腥芙舛容^大的性質(zhì)進行萃取,進而用水萃取除去水溶性的雜質(zhì),可以得到純化的總皂苷。由于皂苷具有很強的發(fā)泡性,故在濃縮過程中應(yīng)時刻注意,避免濃縮液沖出,影響實驗結(jié)果的準確性。本實驗通過單因素實驗及正交實驗優(yōu)選天冬超聲提取工藝,單因素實驗分別考察了乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度對皂苷提取效果的影響,根據(jù)單因素實驗結(jié)果,選擇4因素3水平進行正交實驗,研究結(jié)果表明只有乙醇濃度對總皂苷的含量有顯著性影響,影響因素主次順序為D > B > C > A,最佳工藝為A3B2C3D2,即超聲提取的最佳工藝為乙醇濃度50%、料液比1:20(g/mL)、提取溫度60 ℃、提取時間20 min。實驗之初對天冬總皂苷回流提取法進行了研究,回流提取工藝為提取時間1.5 h、乙醇倍數(shù)8倍、乙醇濃度70%、提取次數(shù)3次,含量可達到1.12%,略高于超聲法,但超聲法提取快速高效的優(yōu)勢是回流法無法比擬的。依照超聲法最佳提取工藝做3次重復(fù)實驗,天冬總皂苷提取含量平均值0.94 %(已對此數(shù)據(jù)進行核實,確為天冬總皂苷的含量,與參考文獻7比較要低些,但顯色方法及測量波長不一樣,所以總皂苷的含量就不一樣),RSD為0.52 %。驗證實驗證實,優(yōu)化后的工藝路線穩(wěn)定可行,操作簡便,節(jié)省時間和溶劑,可為天冬的生產(chǎn)應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)和參考。

    [1] 王紅然.二冬膏的化學成分及抗氧化活性研究[D].長春: 吉林農(nóng)業(yè)大學, 2008.

    [2] 沈陽, 陳海生, 王瓊.天冬化學成分的研究[J].第二軍醫(yī)大學學報, 2007, 28(11): 1241-1244.

    [3] 李艷菊, 李琴山, 劉 洋.貴州產(chǎn)天冬水提液對氧自由基的作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2011,39(28): 17230-17231.

    [4] 李琴山, 劉 洋, 李艷菊.天冬總皂苷對衰老腎臟抗氧化作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥, 2011, 22(9): 2121-2122.

    [5] 劉亮, 劉英波, 周英信, 等.天冬中總氨基酸的水提取工藝研究[J].甘肅中醫(yī)學院學報, 2013, 30(1): 59-60.[6] 王明艷, 魯加峰, 王曉順, 等.響應(yīng)面法優(yōu)化天冬多糖的提取條件[J].食品科學, 2010, 31(6): 91-95.

    [7] 杜芳權(quán), 顏繼忠.超聲提取天冬多糖和總皂苷工藝研究[J].科技資訊, 2011, 9(21): 96-97.

    [8] 曾建軍, 周兵, 姚靈,等.劍葉金雞菊植株不同器官總黃酮和總皂甙含量的測定[J].井岡山大學學報:自然科學版, 2011, 32(2): 50-53.

    [9] 孟憲軍, 潘璇, 李天來, 等.超聲提取長白楤木嫩芽中皂苷的工藝優(yōu)化[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 2010, 36(8): 190-193.

    [10] 劉健劍, 何計國.超聲提取米邦塔仙人掌總皂苷的工藝優(yōu)化[J].食品科學, 2010, 31(16): 38-41.

    [11] 易運紅, 吳功慶, 王蓮婧, 等.金櫻根總皂苷的超聲提取工藝研究[J].食品工業(yè)科技, 2011, 32(5): 270-272.

    [12] 李開泉, 曾曉敏.枸骨葉中熊果酸的提取工藝研究[J].井岡山大學學報:自然科學版, 2012, 33(6): 21-23.

    [13] 揭晶, 趙越, 王皓.Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化蘆筍總皂苷超聲提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志, 2014,20(8): 8-11.

    [14] 楊健, 苗芳, 趙偉, 等.正交設(shè)計優(yōu)選鐵筷子甾體皂苷成分的超聲提取工藝[J].西北農(nóng)業(yè)學報, 2007, 16(2): 90-93.

    ULTRASONIC EXTRACTION OPTIMIZATION OF TOTAL SAPONINS FROM ASPARAGUS COCHINCHINENSIS (LOUR.) MERR.

    *LIU Liang1, DING Li-na1, CHEN Dong-lin1, FENG Hua2, ZHOU Ying-xin1

    (1.Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Zunyi, Guizhou 563002, China;2.Zunyi Institute for Drug Control, Zunyi, Guizhou 563000, China)

    Objective: To develop a method for determining the content of total saponins in Asparagus cochinchinensis and optimize its ultrasonic extraction process.Methods: Sarsasapogenin as the control sample,the content of total saponins was determined by ultraviolet spectrophotometry.Optimization of the ultrasonic extraction process of total saponins was performed using single factor and orthogonal array design methods.Results: The calibration curve of the sarsasapogenin was linear (r = 0.9994) in the range of 5.2~52 μg/mL with average spike recovery of 98.83% (RSD = 1.88%).The optimum ultrasonic extraction conditions were found to be: ethanol concentration of 50%, solid-to-liquid ratio of 1:20, extraction temperature of 60℃, ultrasonic extraction duration of 20 minutes.Conclusion: The developed method for total saponins determination is simple, feasible and accurate.The optimized extraction process is efficient and quick, and easy to popularize.

    Asparagus cochinchinensis; total saponins; ultrasonic extraction

    R284.2

    ADOI:10.3969/j.issn.1674-8085.2015.02.020

    1674-8085(2015)02-0081-06

    2015-01-09;修改日期:2015-03-01

    遵義市科技局、遵義醫(yī)藥高等??茖W校聯(lián)合科技計劃項目(遵市科合社字【2013】24號);遵義市匯川區(qū)科技計劃項目。作者簡介:*劉亮(1981-),男,重慶萬州人,副教授,主要從事中藥、民族藥化學成分及質(zhì)量研究(E-mail:jikman1@163.com);

    丁麗娜(1981-),女,貴州遵義人,講師,主要從事天然藥物化學成分及質(zhì)量研究(E-mail:lifewaterdln0681@qq.com);

    陳東林(1961-),女,貴州遵義人,教授,主要從事蔬菜化肥、農(nóng)藥含量(E-mail:1064618089@qq.com);

    馮華(1978-),男,貴州遵義人,主管藥師,主要從事新藥研究及藥品檢驗(E-mail:fenghua781014@yahoo.com.cn);

    周英信(1962-),男,貴州遵義人,教授,主要從事脾胃病證治研究(E-mail:E-mail:1487476788@qq.com).

    猜你喜歡
    菝葜總皂苷皂苷
    基于ITS2一級序列和二級結(jié)構(gòu)對土茯苓及混偽品的鑒別研究△
    三七總皂苷調(diào)節(jié)PDGF-BB/PDGFR-β的表達促進大鼠淺表Ⅱ°燒傷創(chuàng)面愈合
    菝葜根莖色素的提取及穩(wěn)定性研究
    中藥菝葜的化學成分及藥理作用研究進展*
    化學工程師(2020年2期)2020-01-15 05:34:38
    HPLC-MS/MS法同時測定三七花總皂苷中2種成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:04
    三七總皂苷緩釋片處方的優(yōu)化
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:10
    HPLC法測定大鼠皮膚中三七皂苷R1和人參皂苷Rb1
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:40
    三七總皂苷膠束狀態(tài)與超濾分離的相關(guān)性
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:44
    HPLC法同時測定熟三七散中13種皂苷
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:34
    黑果菝葜根莖化學成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:00
    亚洲精品日韩在线中文字幕 | 内地一区二区视频在线| 亚洲三级黄色毛片| 欧美日韩综合久久久久久| 日韩欧美 国产精品| 免费观看a级毛片全部| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久久国产成人精品二区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 边亲边吃奶的免费视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 97在线视频观看| av在线播放精品| videossex国产| 国产成人aa在线观看| 精品久久久久久成人av| 97超碰精品成人国产| 亚洲成人av在线免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 色吧在线观看| av视频在线观看入口| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品国产高清国产av| 亚洲成人久久性| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品国产成人久久av| av视频在线观看入口| 成人性生交大片免费视频hd| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品99久久久久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影| 只有这里有精品99| 精品久久国产蜜桃| 日本一二三区视频观看| 国产精品蜜桃在线观看 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 九色成人免费人妻av| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品久久久久久精品电影小说| 18禁观看日本| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜激情久久久久久久| 一本大道久久a久久精品| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲国产精品999| 满18在线观看网站| 欧美日韩视频精品一区| 我的老师免费观看完整版| xxxhd国产人妻xxx| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜激情久久久久久久| 久久ye,这里只有精品| 精品卡一卡二卡四卡免费| 熟女人妻精品中文字幕| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲成人av在线免费| 美女主播在线视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产精品国产三级国产专区5o| av在线老鸭窝| 免费av不卡在线播放| 国产黄频视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线观看免费视频网站a站| 熟女电影av网| 极品人妻少妇av视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 午夜老司机福利剧场| 国产亚洲一区二区精品| kizo精华| 久久久久久久久久久久大奶| 久久久久视频综合| 美女cb高潮喷水在线观看| 成年av动漫网址| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩三级伦理在线观看| 久久午夜福利片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品久久久久久久久亚洲| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 97在线人人人人妻| 国产高清不卡午夜福利| 极品人妻少妇av视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 少妇 在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 91精品三级在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 人人妻人人澡人人看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产亚洲一区二区精品| 国产av一区二区精品久久| 日本免费在线观看一区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 特大巨黑吊av在线直播| 五月开心婷婷网| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产精品免费大片| 亚洲精品第二区| 人妻 亚洲 视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久韩国三级中文字幕| 丝瓜视频免费看黄片| 国产在线视频一区二区| 日本午夜av视频| 亚洲国产精品专区欧美| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av中文av极速乱| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| videossex国产| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜福利,免费看| 午夜日本视频在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产 精品1| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美精品国产亚洲| 久久国内精品自在自线图片| 在线观看一区二区三区激情| 男的添女的下面高潮视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一本大道久久a久久精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 九草在线视频观看| 91久久精品电影网| 成人影院久久| 蜜桃国产av成人99| 久久久欧美国产精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久人人爽人人片av| 午夜视频国产福利| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 最近手机中文字幕大全| 99久久人妻综合| 99国产综合亚洲精品| 十分钟在线观看高清视频www| 一区二区三区免费毛片| 国产深夜福利视频在线观看| 永久网站在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| a 毛片基地| h视频一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲一区二区精品| 女人久久www免费人成看片| 欧美bdsm另类| 黄色怎么调成土黄色| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产不卡av网站在线观看| 久久久午夜欧美精品| 久久ye,这里只有精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲精品av麻豆狂野| 久热久热在线精品观看| 欧美日韩综合久久久久久| 日韩大片免费观看网站| 国产 精品1| 少妇的逼水好多| 国产精品 国内视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲精品456在线播放app| 欧美+日韩+精品| 欧美日韩成人在线一区二区| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产精品蜜桃在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 一个人免费看片子| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 新久久久久国产一级毛片| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美精品国产亚洲| 热re99久久精品国产66热6| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲av综合色区一区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩欧美精品免费久久| 男人添女人高潮全过程视频| 一区二区三区精品91| 高清不卡的av网站| 老女人水多毛片| 成人毛片60女人毛片免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 成人午夜精彩视频在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在线观看免费高清a一片| 久久精品国产亚洲av天美| 国产av码专区亚洲av| 日韩中文字幕视频在线看片| 人妻系列 视频| 人妻一区二区av| 99热国产这里只有精品6| 毛片一级片免费看久久久久| 精品亚洲成国产av| 2022亚洲国产成人精品| 久久99热这里只频精品6学生| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 插逼视频在线观看| 97在线视频观看| 久久99热6这里只有精品| 日本欧美视频一区| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲精品国产色婷婷电影| 婷婷色av中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲av综合色区一区| 久久久久久久久久久免费av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜激情av网站| 日韩在线高清观看一区二区三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品国产av成人精品| 国产色婷婷99| 大香蕉久久成人网| 免费观看的影片在线观看| h视频一区二区三区| 亚洲精品,欧美精品| 日日爽夜夜爽网站| 婷婷成人精品国产| av视频免费观看在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲精品456在线播放app| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲综合色网址| 啦啦啦啦在线视频资源| 人体艺术视频欧美日本| 一级a做视频免费观看| 国产乱来视频区| 精品酒店卫生间| 一本色道久久久久久精品综合| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产成人精品福利久久| 有码 亚洲区| 韩国高清视频一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 大香蕉久久网| 欧美精品国产亚洲| 免费看av在线观看网站| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 自线自在国产av| 熟女电影av网| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费黄频网站在线观看国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 高清不卡的av网站| 老熟女久久久| 大香蕉久久成人网| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| av网站免费在线观看视频| 精品午夜福利在线看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 热re99久久国产66热| 91精品国产九色| 亚洲国产精品999| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美另类一区| 我要看黄色一级片免费的| 熟女av电影| 久久99精品国语久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 看免费成人av毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 婷婷成人精品国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 99久国产av精品国产电影| 黄色一级大片看看| 天堂8中文在线网| 久久久精品免费免费高清| 一本色道久久久久久精品综合| 高清毛片免费看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产日韩欧美视频二区| 女性生殖器流出的白浆| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美 日韩 精品 国产| 全区人妻精品视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产色婷婷99| 日韩精品有码人妻一区| 最近2019中文字幕mv第一页| 人妻一区二区av| 最近最新中文字幕免费大全7| 青春草国产在线视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 久久精品夜色国产| 日韩在线高清观看一区二区三区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 日日爽夜夜爽网站| 日韩一区二区视频免费看| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品一区www在线观看| 国产在线视频一区二区| 精品久久国产蜜桃| 国产深夜福利视频在线观看| 街头女战士在线观看网站| 一级毛片我不卡| 国产精品国产av在线观看| 精品国产一区二区久久| 少妇 在线观看| 老司机影院毛片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一个人免费看片子| 99热国产这里只有精品6| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久国产精品麻豆| 97在线视频观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久免费观看电影| 插阴视频在线观看视频| 尾随美女入室| 欧美国产精品一级二级三级| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 大香蕉久久网| 中国国产av一级| 国产日韩欧美在线精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 丰满乱子伦码专区| 乱码一卡2卡4卡精品| 中文欧美无线码| a级毛片黄视频| 亚洲av二区三区四区| 制服人妻中文乱码| 亚洲av成人精品一区久久| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美性感艳星| av专区在线播放| 亚洲综合色惰| 人妻系列 视频| 大话2 男鬼变身卡| 最后的刺客免费高清国语| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 老司机亚洲免费影院| 亚洲,欧美,日韩| 97在线视频观看| 亚洲成人一二三区av| 免费观看在线日韩| 亚洲色图综合在线观看| 午夜免费观看性视频| 亚洲国产av新网站| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 我的老师免费观看完整版| av国产久精品久网站免费入址| 中国美白少妇内射xxxbb| av又黄又爽大尺度在线免费看| 九九爱精品视频在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久久久网色| 亚洲成色77777| 成人漫画全彩无遮挡| 男女无遮挡免费网站观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 久热久热在线精品观看| 日本av免费视频播放| 国产 精品1| 日本免费在线观看一区| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲性久久影院| 国产精品欧美亚洲77777| 午夜福利视频在线观看免费| 91国产中文字幕| 好男人视频免费观看在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 美女国产视频在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 一级爰片在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品自拍成人| 婷婷色麻豆天堂久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久鲁丝午夜福利片| 女人精品久久久久毛片| 久久久久网色| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品人妻久久久久久| 免费观看在线日韩| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产亚洲一区二区精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 热99久久久久精品小说推荐| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品熟女久久久久浪| 伦理电影大哥的女人| 欧美另类一区| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品国产一区二区久久| 丝袜在线中文字幕| 视频在线观看一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 97超碰精品成人国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 少妇 在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲av中文av极速乱| 91精品国产九色| 精品久久久久久电影网| 日本欧美视频一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 黄色配什么色好看| 插阴视频在线观看视频| 日韩一本色道免费dvd| 国产乱来视频区| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美国产精品一级二级三级| 久久鲁丝午夜福利片| 最后的刺客免费高清国语| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲av综合色区一区| 精品一区二区免费观看| 亚洲三级黄色毛片| 视频中文字幕在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 51国产日韩欧美| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩av免费高清视频| 在线播放无遮挡| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人精品久久久久久| 久久精品夜色国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 少妇精品久久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 女性被躁到高潮视频| av播播在线观看一区| 久久久久久久久久久丰满| 九色成人免费人妻av| 欧美+日韩+精品| 一区二区三区免费毛片| 日韩av不卡免费在线播放| 18禁动态无遮挡网站| 各种免费的搞黄视频| kizo精华| av国产久精品久网站免费入址| 美女大奶头黄色视频| 在线观看www视频免费| 亚洲综合色惰| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久 成人 亚洲| av.在线天堂| a级毛色黄片| 极品人妻少妇av视频| 久久这里有精品视频免费| 青青草视频在线视频观看| 欧美日韩综合久久久久久| 51国产日韩欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 亚洲国产av新网站| 午夜免费观看性视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 制服丝袜香蕉在线| 蜜桃国产av成人99| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产毛片在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av国产av综合av卡| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧洲日产国产| 女性生殖器流出的白浆| 精品人妻熟女av久视频| 国产国语露脸激情在线看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产一级毛片在线| 久久久久视频综合| 国产又色又爽无遮挡免| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲美女搞黄在线观看| 多毛熟女@视频| 久久久久久久久久久免费av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 香蕉精品网在线| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产在视频线精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美精品国产亚洲| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 简卡轻食公司| av免费观看日本| 美女中出高潮动态图| 久久精品久久精品一区二区三区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产爽快片一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲精品第二区| 国产成人91sexporn| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品成人在线| 免费少妇av软件| 一区二区三区四区激情视频| 我的老师免费观看完整版| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 久久精品国产亚洲av涩爱| 一本一本综合久久| 看非洲黑人一级黄片| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 美女国产高潮福利片在线看| 又大又黄又爽视频免费| 少妇的逼水好多| 性色avwww在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 91成人精品电影| 午夜免费鲁丝| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美 日韩 精品 国产| 一级a做视频免费观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产视频内射| 各种免费的搞黄视频| 成年人免费黄色播放视频| 水蜜桃什么品种好| 极品人妻少妇av视频| 国产毛片在线视频| 久久久久网色| 亚洲怡红院男人天堂| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品,欧美精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久精品国产a三级三级三级| 青春草亚洲视频在线观看| 国产成人精品久久久久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品一区在线观看国产| 日本免费在线观看一区| 欧美日韩亚洲高清精品| 激情五月婷婷亚洲| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲欧洲日产国产| 精品国产露脸久久av麻豆| 丝袜在线中文字幕| 免费av中文字幕在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 飞空精品影院首页| 男女国产视频网站| 在线天堂最新版资源| 成人二区视频| 97在线视频观看| 日本免费在线观看一区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 中文字幕最新亚洲高清| 男女免费视频国产| 三上悠亚av全集在线观看| 在线观看国产h片| 我的老师免费观看完整版| 久久精品国产a三级三级三级| 综合色丁香网| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 美女福利国产在线|