厚樸皮、葉、花水提物鎮(zhèn)痛作用的比較研究

鄭麗娟，余曉珊，梁生林，黃玉雙，黃宜財

（井岡山大學醫(yī)學院，江西，吉安　343009）

厚樸皮、葉、花水提物鎮(zhèn)痛作用的比較研究

鄭麗娟，余曉珊，*梁生林，黃玉雙，黃宜財

（井岡山大學醫(yī)學院，江西，吉安343009）

目的探討并比較厚樸皮、葉、花的鎮(zhèn)痛作用。方法采用熱板法、醋酸扭體法致痛，觀察高、低劑量厚樸皮、葉、花水提物的鎮(zhèn)痛作用。結果厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物高、低劑量對熱板法所致小鼠痛閾值無影響，與蒸餾水對照組和自身給藥前比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物高、低劑量對醋酸所致扭體反應數(shù)均有明顯抑制作用，與蒸餾水對照組比較差異顯著（P ＜ 0.01），厚樸根皮、枝皮、葉、花水提物高、低劑量組與厚樸干皮相對應劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。結論厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物均具有鎮(zhèn)痛作用，且厚樸根皮、枝皮、葉、花可以代替厚樸干皮用于鎮(zhèn)痛。

厚樸皮、葉、花；水提物；鎮(zhèn)痛；比較

厚樸為木蘭科植物，厚樸（ Magnolia officinalis Rehd.et Wils.） 或凹葉厚樸（ Magnolia officinalis Rehd.et wils.var.biloba Rehd.et Wils.） 的干燥干皮、根皮和枝皮，厚樸性溫，味苦辛，入脾、胃、肺、腸經(jīng)，具燥濕消痰、下氣除滿之功效，用于濕滯傷中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，厚樸具有促胃腸動力［2-6］、鎮(zhèn)痛［7-9］、抗?jié)儯?0-12］、抗菌［13-15］、抗氧化［16-18］、抗抑郁［19］、抗腫瘤［20］、抗血栓及抗凝血［21］、鎮(zhèn)咳［22］、祛痰［23］等作用。長期以來由于厚樸資源的過度消耗，導致厚樸資源日益減少，因此尋找新藥源、擴大厚樸藥用部位迫在眉睫。通過查閱文獻資料，尚未見厚樸葉和花鎮(zhèn)痛作用的研究報道。本研究采用熱板法、扭體法疼痛模型，對厚樸葉和花水提物是否具有鎮(zhèn)痛作用，其鎮(zhèn)痛作用與厚樸干皮之間是否有無差異進行了研究，旨在為尋找新藥源、擴大厚樸藥用部位提供實驗依據(jù)。

1　材料

1.1實驗動物

昆明種小鼠，清潔級，體質量18～22 g，雌雄兼有，288只，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2011-0003。

1.2藥品與試劑

厚樸皮、葉、花2013年8月購于井岡山，樹齡30年，經(jīng)井岡山大學醫(yī)學院藥學室鑒定為木蘭科植物厚樸 Magnolia officinalis Rehd.et Wils.；鹽酸嗎啡注射液，東北制藥集團公司沈陽第一制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格：10 mg/mL ，批號：080701-2；阿司匹林片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司（進口分裝），規(guī)格：0.1 g/片，批號：BJ04931；36%醋酸，上海松江佘山化工廠生產(chǎn)。

1.3主要儀器

HSS-1B型恒溫浴槽，成都儀器廠生產(chǎn)；秒表。

2　方法

2.1藥物配制

2.1.1厚樸皮、葉、花水提物的制備

分別稱取厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花普通粉末150 g，用蒸餾水浸泡0.5 h，加10倍量蒸餾水（第一次多加2倍量），用文火煎煮3次，第1次1 h，第2、3次各0.5 h，合并3次煎出液，靜置過濾去渣，濃縮為100 mL，即濃度為1.5 g/mL備用，以此作為高劑量組的給藥濃度，再用蒸餾水配制低劑量組的給藥濃度0.5 g/mL）。

2.1.2嗎啡溶液

用蒸餾水配成0.002 g/mL濃度。

2.1.3阿司匹林溶液

用蒸餾水配成0.05 g/mL濃度。

2.2厚樸皮、葉、花水提物的鎮(zhèn)痛實驗

2.2.1熱板法［24-25］

將小鼠置于（55 ± 0.1） ℃鎮(zhèn)痛槽內(nèi)，用秒表記錄小鼠從放入鎮(zhèn)痛槽至出現(xiàn)舔后足反應所需時間（s）作為痛閾的指標，用此法篩選出痛閾值在5～30 s的雌性清潔級昆明小鼠144只供實驗用。取篩選合格的雌性小鼠144只，按體質量隨機分為12組，每組12只，即蒸餾水對照組，鹽酸嗎啡溶液（0.02 g/kg）組，厚樸干皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸根皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸枝皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸葉水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸花水提物高、低劑量組（15、5 g/kg）。將每只小鼠正常痛閾值各測2次，每次間隔5 min，取其平均值為給藥前正常痛閾值。給藥除鹽酸嗎啡溶液組皮下注射2天外，其余各組均灌胃給藥，給藥容量均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。末次給藥后30、60、90、120 min各測小鼠痛閾值，如果用藥后放入鎮(zhèn)痛槽內(nèi)60 s仍無反應，即將小鼠取出，以免時間太長把腳燙傷，其痛閾值按60 s計算。

2.2.2醋酸扭體法［24］

昆明種小鼠144只，雌雄各半，按體質量和性別隨機分為12組，每組12只，即蒸餾水對照組，阿司匹林組（0.5 g/kg），厚樸干皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸根皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸枝皮水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸葉水提物高、低劑量組（15、5 g/kg），厚樸花水提物高、低劑量組（15、5 g/kg）。小鼠均灌胃給藥，給藥容量均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。末次給藥后1 h，各鼠均腹腔注射0.6 %醋酸0.2 mL/只（醋酸溶液臨用前配制）。記錄各組小鼠腹腔注射醋酸后15 min內(nèi)扭體反應（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢）次數(shù)，并計算抑制率。抑制率（%）= （對照組扭體反應數(shù)-給藥組扭體反應數(shù)） / 對照組扭體反應數(shù)×100%。

2.4統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計學軟件SPSS10.0對各組所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，其結果以均數(shù)±標準差±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。

3　結果

3.1厚樸皮、葉、花水提物對熱板法所致小鼠痛閾值的影響

與蒸餾水對照組比較，給藥前各組痛閾值差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；嗎啡溶液（0.02 g/kg）組，給藥后30、60、90、120 min與蒸餾水對照組比較差異極顯著（P ＜ 0.01）；厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物高、低（15、5 g/kg）劑量組，給藥后30、60、90、120 min與蒸餾水對照組比較無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。

與自身給藥前比較，蒸餾水對照組差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；嗎啡溶液（0.02 g/kg）組，給藥后30、60、90、120 min與給藥前比較差異均顯著（P ＜ 0.01）；厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物高、低（15、5 g/kg）劑量組，給藥后30、60、90、120 min與給藥前比較無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。結果見表1。

表1　厚樸皮、葉、花水提物對熱板法所致小鼠痛閾值的影響（±s， n = 12）Table 1 Effects of Magnoliae officinalis bark， leaf， flower water extract on the threshold of mice in Hot plate

表1　厚樸皮、葉、花水提物對熱板法所致小鼠痛閾值的影響（±s， n = 12）Table 1 Effects of Magnoliae officinalis bark， leaf， flower water extract on the threshold of mice in Hot plate

注：與蒸餾水對照組比較，aP ＜ 0.01；與自身藥前痛閾比較，bP ＜ 0.01

給藥后痛閾值（s）組　別 劑量（g/kg） 給藥前痛閾值（s） 30 min 60 min 90 min 120 min蒸餾水 - 16.37 ± 3.19 15.46 ± 5.04 16.73 ± 4.74 16.48 ± 6.89 15.60 ± 4.34嗎啡溶液 0.02 16.32 ± 5.92 54.94 ± 11.46ab48.59 ± 14.32ab47.47 ± 14.94ab49.26 ± 14.42ab厚樸干皮水提物高劑量 15 16.11 ± 2.91 15.74 ± 3.01 16.21 ± 4.47 16.51 ± 2.22 16.18 ± 3.77厚樸干皮水提物低劑量 5 16.14 ± 4.15 15.47 ± 2.91 16.49 ± 3.09 16.03 ± 3.68 16.28 ± 3.22厚樸根皮水提物高劑量 15 16.22 ± 4.06 16.23 ± 4.80 16.31 ± 2.39 16.07 ± 4.55 16.04 ± 2.41厚樸根皮水提物低劑量 5 16.11 ± 3.51 16.13 ± 2.44 15.87 ± 2.84 16.06 ± 3.46 16.51 ± 2.66厚樸枝皮水提物高劑量 15 16.47 ± 4.17 16.05 ± 1.90 15.67 ± 1.97 15.95 ± 3.67 16.29 ± 3.14厚樸枝皮水提物低劑量 5 16.38 ± 2.92 16.33 ± 4.82 16.38 ± 2.47 16.77 ± 2.13 16.43 ± 2.82厚樸葉水提物高劑量 15 15.92 ± 1.83 15.65 ± 3.89 16.07 ± 3.74 16.48 ± 5.08 15.79 ± 4.32厚樸葉水提物低劑量 5 15.83 ± 3.66 16.07 ± 3.39 16.02 ± 3.62 16.46 ± 3.61 16.05 ± 3.84厚樸花水提物高劑量 15 15.88 ± 6.65 16.21 ± 5.37 16.37 ± 4.37 16.49 ± 4.32 15.82 ± 4.81厚樸花水提物低劑量 5 15.76 ± 4.29 15.85 ± 3.90 15.95 ± 4.30 16.25 ± 4.12 15.77 ± 2.90

3.2厚樸皮、葉、花水提物對醋酸扭體法所致小鼠疼痛的影響

厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物各劑量組和嗎啡溶液組均能明顯減少醋酸刺激所致扭體反應，與蒸餾水對照組比較差異均顯著（P ＜ 0.01）；扭體抑制率與濃度存在劑量依賴關系。厚樸根皮、枝皮、葉、花水提物高、低劑量組與厚樸干皮相對應劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。結果見表2。

表2　厚樸皮、葉、花水提物對醋酸刺激所致小鼠疼痛的影響（±s， n=12）Table 2　Inhibition of Magnoliae officinalis bark， leaf， flower water extract on acetic acid writhing of mice

表2　厚樸皮、葉、花水提物對醋酸刺激所致小鼠疼痛的影響（±s， n=12）Table 2　Inhibition of Magnoliae officinalis bark， leaf， flower water extract on acetic acid writhing of mice

注：與蒸餾水對照組比較，aP ＜ 0.01；厚樸其他部位水提物組與相對應劑量厚樸干皮水提物組比較，bP ＞ 0.05

組　別 劑量（g/kg）扭體次數(shù) 抑制率（%）蒸餾水 — 36.67 ± 5.17 —阿司匹林 0.5 2.42 ± 0.99a93.40厚樸干皮水提物高劑量　15 19.33 ± 3.34a47.29厚樸干皮水提物低劑量　5 21.83 ± 5.98a40.47厚樸根皮水提物高劑量　15 22.75 ± 7.39ab37.96厚樸根皮水提物低劑量　5 23.67 ± 6.27ab35.45厚樸枝皮水提物高劑量　15 19.08 ± 5.64ab47.97厚樸枝皮水提物低劑量　5 25.67 ± 6.28ab29.99厚樸葉水提物高劑量　15 21.67 ± 5.64ab40.91厚樸葉水提物低劑量　5 26.58 ± 5.33ab27.52厚樸花水提物高劑量　15 23.00 ± 7.65ab37.28厚樸花水提物低劑量　5 24.25 ± 4.09ab33.87

4　討論

厚樸具有燥濕消痰、下氣除滿等功效，現(xiàn)代藥理研究表明厚樸具有促胃腸動力、鎮(zhèn)痛、抗?jié)?、抗菌、抗氧化等作用。由于目前中國制藥業(yè)多達200余種中西成藥是采用厚樸配方的，長期以來由于厚樸資源的過度消耗，導致厚樸資源日益減少，因此尋找新藥源、擴大藥用部位迫在眉睫。為探討厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花是否都具有鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛作用是否有無差異，本實驗采用熱板法、醋酸扭體法疼痛模型，對厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物進行了鎮(zhèn)痛作用研究，并對厚樸根皮、枝皮、葉和花水提物的鎮(zhèn)痛作用與厚樸干皮進行了比較研究。

小鼠熱板實驗是通過一定強度的溫度（55 ℃）刺激小鼠足部以產(chǎn)生疼痛反應，可表現(xiàn)為跳躍、縮足或舔足反應。常以熱刺激開始至出現(xiàn)舔后足反應的時間（即潛伏期）為測痛指標［24］，并以此作為評價藥物的鎮(zhèn)痛作用。本實驗結果顯示厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物不能提高熱板法所致小鼠的痛閾值，這表明厚樸對溫度等物理因素導致的疼痛無鎮(zhèn)痛作用。熱板反應有高位中樞參與［26］，這說明厚樸水提物無中樞性鎮(zhèn)痛作用。

小鼠醋酸扭體實驗是通過醋酸刺激臟層和壁層腹膜引起深部較大面積較長時間的炎性疼痛，表現(xiàn)為扭體反應［26］，是篩選弱鎮(zhèn)痛藥的一種敏感、簡便、重復性好的方法。醋酸介導的傷害性反應可能由于腹腔pH值降低而直接刺激傳入神經(jīng)纖維和炎癥介質合成共同作用導致［27］。本實驗中，厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物均能明顯減少醋酸誘發(fā)的小鼠扭體反應，扭體抑制率與濃度存在劑量依賴關系，提示厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花對炎癥性疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用，且厚樸根皮、枝皮、葉、花水提物與厚樸干皮水提物之間比較無差異，說明厚樸根皮、枝皮、葉、花可以代替厚樸干皮用于鎮(zhèn)痛作用。

綜上所述，厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花水提物對炎性疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且厚樸根皮、枝皮、葉、花可以代替厚樸干皮用于鎮(zhèn)痛作用，可以為尋找新藥源、擴大厚樸藥用部位提供了實驗依據(jù)。

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COMPARATIVE STUDY ON THE ANALGESIC EFFECT OF WATER EXTRACTS OF MAGNOLIA OFFICINALIS BARK， LEAF AND FLOWER

ZHENG Li-juan， YU Xiao-shan，*LIANG Sheng-lin， HUANG Yu-shuang， HUANG Yi-cai

（School of Medicine， Jinggangshan University， Ji'an， Jiangxi 343009， China）

Objective: To investigate and compare the analgesic effect ofMagnolia officinalis bark， leaf， flower in mice.Methods: Using the hot-plate and acetic acid writhing method to induce pain in mice， to observe the analgesic effect of high and low doses of water extracts of M.officinalis bark， leaf and flower.Results:Water extracts of high and low doses of M.officinalis stem， root and branch bark， leaf， flower had no significant effect on the pain threshold caused by hot plate methodcompared with the distilled water control group and the data before the drugs administration （P ＞ 0.05）， but it is reversed for that by acetic acid writhing method， and there was no significant difference between the treatment of stem and others （P ＞ 0.05）.Conclusion: The results showed that water extracts of different part’s bark and organs of M.officinalis possessed the analgesic effects， root bark，branch bark and leave could replace stem bark for analgesia.

Magnolia officinalis bark； leaf； flower； water extract； analgesia； comparision

R285.5

ADOI:10.3969/j.issn.1674-8085.2015.02.017

1674-8085（2015）02-0074-04

2014-12-09；修改日期：2015-02-12

國家科技支撐計劃項目子課題項目（2012BAC11B02-6）

鄭麗娟（1980-），女，江西新干人，助理實驗師，碩士，主要從事藥物化學教學與實驗（E-mail: 690109174@qq.com）；

余曉珊（1991-），女，福建永泰人，井岡山大學醫(yī)學院藥學專業(yè)本2011級科生（E-mail: 372471848@qq.com）；

*梁生林（1962-），男，江西吉安人，教授，主要從事中草藥藥理及毒理研究（E-mail: slliang1962@163.com）；

黃玉雙（1990-），男，江西寧都人，井岡山大學醫(yī)學院藥學專業(yè)2011級本科生（E-mail: 1243998743@qq.com）；

黃宜財（1990-），男，江西寧都人，井岡山大學醫(yī)學院藥學專業(yè)2011級本科生（E-mail:532315322@qq.com）.