結(jié)直腸癌組織中Nob1基因的表達及臨床意義

馬小杰　韓振國*

（1 山西醫(yī)科大學研究生學院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西醫(yī)科大學附屬山西大醫(yī)院 普通外科，山西 太原 030000）

結(jié)直腸癌組織中Nob1基因的表達及臨床意義

馬小杰1韓振國2*

（1 山西醫(yī)科大學研究生學院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西醫(yī)科大學附屬山西大醫(yī)院 普通外科，山西 太原 030000）

目的 研究Nob1的表達與結(jié)直腸癌的相關(guān)性，從臨床分期、分化程度等角度分析結(jié)直腸癌中Nob1的表達情況。方法 運用免疫組織化學染色方法觀察和分析60例結(jié)直腸癌組織Nob1的表達情況與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 按結(jié)直腸癌的Duck分期，各分期的陽性率分別為75.0%，72.7%，70.6%，77.8%，χ2值為0.178，P值為0.981，即與Duck分期無統(tǒng)計學意義；按結(jié)直腸癌分化程度分組，高、中、低陽性率分別為41.7%，76.7%，88.9%，χ2值為7.756，P值為0.021，即與分化程度有統(tǒng)計學意義。結(jié)論 Nob1蛋白的表達水平在結(jié)直腸癌組織中上調(diào)，與癌組織細胞的分化程度有關(guān)。

Nob1基因；結(jié)直腸癌；免疫組化

結(jié)直腸癌是一種消化系統(tǒng)中較為常見的惡性腫瘤，從病因分析可知半數(shù)以上來自腺瘤癌變。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，同時存在的分子事件基因表達被大家逐漸認識，直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個步驟、多階段、多基因參與的遺傳型疾病。近年來的研究表明，腫瘤的發(fā)生與發(fā)展不僅決定于腫瘤細胞的增殖，而且與腫瘤細胞的凋亡密切相關(guān)［1-3］。

Nob1基因是最近新發(fā)現(xiàn)的一個基因，其主要編碼的是一個多功能的蛋白質(zhì)，參與并調(diào)節(jié)核糖體40 S小亞基組裝、26 S蛋白酶體合成與裝配以及細胞周期的調(diào)節(jié)。因此，若Nob1的表達發(fā)生變化則會通過影響核糖體和蛋白酶體在細胞中的作用而影響蛋白質(zhì)的合成與降解，從而引起腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移［4-5］。因此本次研究應用免疫組化技術(shù)檢測結(jié)直腸正常組織與癌組織中Nob1基因的表達情況，從而探討結(jié)直腸癌組織中Nob1的表達臨床意義。

1　資料與方法

1.1病例資料：收集山西大醫(yī)院2012年7月至2013年9月結(jié)直腸癌手術(shù)切除并資料完整60例病理診斷為結(jié)直腸癌的石蠟包埋標本，并確認術(shù)前未經(jīng)放化療治療。其中男34例，女26例，平均年齡63歲（43～78歲），腫瘤部位：結(jié)腸29例，直腸31例。Duck分期：A期12例，B期22例，C期17例，D期9例。大腸腺癌分化程度（WHO）：高分化12例，中分化30例，低分化18例。

1.2實驗主要試劑：免疫組化染色顯色試劑（北京中杉金橋）。

1.3方法免疫組織化學染色（SP法）：一抗1∶200稀釋，磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗做陰性對照。結(jié)果判定：以組織細胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性。每張切片在顯微鏡（×400）下取五個不同的區(qū)域，每個區(qū)域選取約200個細胞，根據(jù)每個視野中的陽性細胞所占比例與其顯色強度兩指標的乘積作為該視野的得分。評分標準為：陽性細胞比例：＜25%（0分），25%～50%（1分），51%～75%（2分），＞75%（3分）；顯色強度：未著色（0分）、淺黃色（1分）、棕黃色（2分）、棕褐色（3分）。每張切片隨即取5個視野。分為0～2分（-），3～5分（+），6-8分（++），＞8分（+++）。分析Nob1與癌組織病理特征相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計學處理：采用SPSS16.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。免疫組織化學染色（SP法）采用χ2檢驗，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié) 果

隨機抽取手術(shù)切除60例結(jié)直腸癌組織切片，并對其進行免疫組化檢驗。檢測結(jié)果為：11例（+++），19例（++），14例（+），16例（-），陽性表達率為73.3%。Duck分期：A期陽性9例，陽性率為75.0%；B期16例，陽性率為72.7%；C期12例，陽性率為70.6%；D期7例，陽性率為77.8%，P＞0.05，無統(tǒng)計學差異。結(jié)直腸腺癌分化程度（WHO）：高分化5例，陽性率為41.7%；中分化23例，陽性率為76.7%，低分化16例，陽性率為88.9%。應用χ2檢驗分析Nob1在結(jié)直腸癌表達情況與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果為：Nob1蛋白的表達水平與結(jié)直腸癌的Duck分期無明顯統(tǒng)計學意義，與分化程度有統(tǒng)計學意義（表1）。

表1　Nob1在結(jié)直腸癌表達情況與臨床病理特征

3　討 論

Nob1基因編碼的是一個多功能的蛋白質(zhì)，該蛋白的N端含有一個PIN結(jié)構(gòu)域，C端含有一個ZNRD1結(jié)構(gòu)域。Nob1通過泛素-蛋白酶體途徑（ubiquity-proteasome pathway，UPP）參與細胞調(diào)節(jié)，而UPP是細胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解一條重要途徑，由泛素Ub、泛素活化酶E1、泛素結(jié)合酶E2s、泛素-蛋白鏈接酶E3s、26S蛋白酶體和泛素解離酶等組成。Nob1蛋白通過促進26S蛋白酶體成熟，可以高效的選擇性的降解細胞內(nèi)某些具有生物活性的蛋白分子，特別是一些短壽的參與調(diào)節(jié)細胞周期的蛋白分子，以及已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的癌基因和抑癌基因所表達的產(chǎn)物等，因而可以起到控制細胞的生長及凋亡、抑制腫瘤細胞生長、擴散的作用，所以Nob1基因在癌組織發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。此外，Nob1還可以通過促進核糖體18S rRNA成熟而影響蛋白質(zhì)的合成，以及可能通過ZNRD1結(jié)構(gòu)域而參與調(diào)節(jié)細胞周期［6］。

目前已發(fā)現(xiàn)的核內(nèi)原癌基因有c-myc、p53、E1A等，這些基因所表達的蛋白分子已經(jīng)被證明是通過泛素化途徑降解的?；贜ob1在泛素依賴的蛋白水解過程中的重要作用，可以預測Nob1可能參與某些原癌蛋白的降解，并與腫瘤的發(fā)生具有一定關(guān)系。根據(jù)最新國外研究結(jié)果顯示：如果運用RNA干擾技術(shù)在HEY和SKOV3使卵巢癌組織細胞上的Nob1基因有效沉默，則能降低卵巢癌組織細胞的增殖能力，并使癌細胞阻滯在G1期。因此，Nob1可能是一個原癌基因，其表達的上調(diào)可能促進了卵巢癌等腫瘤的惡性增殖［7-9］。

本研究應用免疫組織化學染色檢測60例Nob1在結(jié)直腸癌表達情況與臨床病理特征的關(guān)系時同時發(fā)現(xiàn)，在癌組織陽性率很高且與結(jié)直腸癌組織的分化程度呈正相關(guān)，提示Nob1隨著結(jié)直腸癌組織的生長而表達也在增強。因此，Nob1在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能是一個重要的基因，有望成為結(jié)直腸癌的新腫瘤標志物，但關(guān)于其具體的機制需要進一步的研究。

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1671-8194（2015）10-0160-02

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