玄參多糖抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

鄒　霞　易　萍　曹　江

（湖南省腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 長(zhǎng)沙 410006）

玄參多糖抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

鄒霞易萍曹江

（湖南省腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 長(zhǎng)沙 410006）

目的 玄參多糖抗食管癌Eca-109腫瘤、肉瘤S180腫瘤的作用。方法 小鼠接種Eca-109實(shí)體瘤或S180腹水瘤24 h后隨機(jī)分組，灌胃給予不同劑量玄參多糖［（200、400、800 mg/（kg?d）］。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，計(jì)算玄參多糖對(duì)小鼠Eca-109實(shí)體瘤生長(zhǎng)的抑制率，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，以及S180腹水型荷瘤小鼠的存活時(shí)間。結(jié)果 與環(huán)磷酰胺組比較，給予玄參多糖灌胃的荷瘤小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著增加；低、中、高劑量的玄參多糖對(duì)Eca-109實(shí)體瘤的抑瘤率分別是18.59%、26.13%、36.17%。玄參多糖各劑量組均可顯著延長(zhǎng)S180腹水型荷瘤小鼠的存活時(shí)間，其中中、高劑量組尤為明顯。結(jié)論 玄參多糖表現(xiàn)出一定的抑制腫瘤作用和保護(hù)機(jī)體免疫器官。

玄參多糖；抗腫瘤作用；實(shí)驗(yàn)研究

玄參（Radix Scrophulariae）為雙子葉植物玄參科玄參的干燥根，是我國(guó)傳統(tǒng)的中草藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱涼血，瀉火解毒，滋陰的功效。其有效成分為生物堿、糖類(lèi)、甾醇、氨基酸、脂肪酸、微量揮發(fā)油、胡蘿卜素等，具有抗炎、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、抗疲勞等作用。藥效學(xué)研究中，多從其有效成分生物堿入手，治療炎癥相關(guān)疾病，但其他有效成分研究甚少。結(jié)合當(dāng)前藥物有效成分研究策略，中藥多糖類(lèi)的有效成分多表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性［1］，故擬以玄參多糖作為研究對(duì)象來(lái)探討其抗腫瘤效應(yīng)，并初步研究其用機(jī)制，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1藥物與試劑。玄參多糖：參照文獻(xiàn)制備部分純化玄參多糖，在陰涼干燥處保存。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水充分溶解，供灌胃使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。環(huán)磷酰胺（CTX），用生理鹽水配成所需濃度。石油醚，乙醇均為分析純。

1.1.2腫瘤細(xì)胞株：人食管癌細(xì)胞Eca-109、肉瘤S180細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞中心，以腹水型傳代保種，臨用時(shí)抽取Eca-109和S180腹水，以滅菌生理鹽水稀釋備用。

1.3受試動(dòng)物：清潔級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，雄性，由中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)條件：溫度20～25 ℃，日溫差≤3 ℃，濕度：40%～70%，光照12 h明暗交替。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1提取玄參多糖：玄參烘干、粉碎后，用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量玄參粉末，參照參考文獻(xiàn)［2-3］。制定玄參多糖基本提取條件為：按料液比1∶40（玄參質(zhì)量∶蒸餾水體積=g∶mL）加入蒸餾水，在溫度50 ℃、功率250 W下超聲提取50min，提取3次后，合并濾液、離心、去上清、濃縮，得到的粗多糖溶液用Sevag法脫蛋白7次，除去游離蛋白質(zhì)，透析袋對(duì)自來(lái)水透析48 h，再經(jīng)蒸餾水透析24 h，除去無(wú)機(jī)鹽、單糖等小分子物質(zhì)，后用70%乙醇，醇沉24 h。在高速離心機(jī)上以3000 r/min將上述醇沉物離心20min后得到沉淀，依次用丙酮、乙醚洗滌，干燥，得到半精品玄參多糖。

1.2.2體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)：在滅菌條件下，分別取傳代小鼠食管癌Eca-109實(shí)體瘤瘤液以生理鹽水1∶4稀釋?zhuān)恐?.3mL注入小鼠右腋皮下。接種后24 h，50只動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組，玄參多糖藥物組（其中按灌胃劑量200、400、800［（mg/（kg?d）］，分別設(shè)低、中、高3劑量組），每組10只。陰性對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組30 mg/kg，腹腔隔日注射1次，同時(shí)灌胃蒸餾水。動(dòng)物灌胃體積為20 mL/kg體質(zhì)量，每天1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后24 h，頸椎脫臼處死動(dòng)物，小心剝離瘤組織、胸腺及脾臟，分別稱(chēng)重，并計(jì)算抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)，進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。腫瘤生長(zhǎng)抑制率（%）=（對(duì)照組平均瘤重-治療組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重×100%。胸腺指數(shù)=胸腺體質(zhì)量（mg）/小鼠體質(zhì)量×10。脾指數(shù)=脾體質(zhì)量（mg）/小鼠體質(zhì)量×10。

1.2.3玄參多糖對(duì)S180腹水瘤小鼠生存時(shí)間期的影響：具體分組和給藥同上。然后在接種腫瘤之日算起，每天觀察1次，并記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，其中以各鼠生存天數(shù)計(jì)算每組平均生存時(shí)間。

1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1對(duì)小鼠移植性Eca-109腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用：見(jiàn)表1。從表1可知，各組動(dòng)物的初始體質(zhì)量沒(méi)有明顯差異，經(jīng)接種移植瘤和給藥后，環(huán)磷酰胺組、玄參低和中劑量組一定程度上能顯著抑制小鼠Eca-109腫瘤生長(zhǎng)（P＜0.05），而玄參高劑量組能極顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)（P＜0.01），均表現(xiàn)出一定的抑瘤率。

表1　對(duì)小鼠移植性Eca-109腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用

2.2對(duì)Eca-109荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響：見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取樣后測(cè)得Eca-109荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯示：玄參各給藥組對(duì)小鼠指數(shù)和脾指數(shù)均高于空白對(duì)照組，表明其對(duì)腫瘤小鼠的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的抑制作用；但環(huán)磷酰胺組，雖然對(duì)小鼠生長(zhǎng)有一定保護(hù)作用，但要弱于玄參，提示臨床中中醫(yī)藥治療腫瘤具有一定的優(yōu)勢(shì)。

表2 對(duì)Eca-109荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響

2.3對(duì)S180型腹水瘤小鼠生存時(shí)間的影響：見(jiàn)表3。表3表明，各藥組均較空白對(duì)照組能明顯延長(zhǎng)S180型腹水瘤小鼠生存時(shí)間，其中以環(huán)磷酰胺組和玄參高劑量組為突出。

3　討 論

當(dāng)前，隨著大眾飲食習(xí)慣和易感因素的多現(xiàn)，食管癌的發(fā)病率呈逐年增加之勢(shì)，對(duì)其防治也日益凸顯其重要性。在腫瘤臨床治療中，主要應(yīng)用仍然是傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類(lèi)化療藥物。該類(lèi)藥物在發(fā)揮療效的同時(shí)，對(duì)機(jī)體的不良反應(yīng)明顯，尤其是對(duì)免疫力有較大的破壞。而許多臨床醫(yī)師長(zhǎng)期以來(lái)一直國(guó)內(nèi)中醫(yī)藥治療腫瘤的必要補(bǔ)充手段。但是由于中藥具有成分復(fù)雜、作用靶點(diǎn)多、療效不穩(wěn)定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)難以控制等特點(diǎn)，再加上有效成分難以提取分離的問(wèn)題，制約了中藥有效成分和藥效的篩選。

本實(shí)驗(yàn)從玄參有效成分玄參多糖為研究對(duì)象，通過(guò)小鼠體內(nèi)腫瘤實(shí)驗(yàn)來(lái)探討其對(duì)腫瘤的治療作用。研究結(jié)果顯示玄參多糖有較好的抑制腫瘤生長(zhǎng)、保護(hù)免疫器官、延長(zhǎng)腫瘤小鼠的生存時(shí)間，故其有一定的抗腫瘤活性和提高機(jī)體免疫力作用。此外還有文獻(xiàn)報(bào)道，其尚有對(duì)羥基自由基、超氧陰離子自由基以及亞硝酸鹽具有不同程度的清除能力［4］。因此，作者準(zhǔn)備采用體外實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)方法、蛋白組學(xué)、細(xì)胞學(xué)等技術(shù)手段，進(jìn)行深入的研究，進(jìn)一步探討其抗腫瘤的機(jī)制。

［1］ 王軍，于震，李更生，等.地黃昔A對(duì)“陰虛”及免疫功能低下小鼠的藥理作用［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2002，37（1）：20-22.

［2］ 肖晏嬰，陳平，王琿，等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選玄參多糖的提取工藝［J］.武漢工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，27（2）：16-18.

［3］ 宋健.玄參多糖對(duì)游泳小鼠力竭時(shí)間及糖儲(chǔ)備的影響［J］.食品科學(xué)，2009，30（15）：217-219.

［4］ 陳莉華，廖微，肖斌，等.玄參多糖體外清除自由基和抗氧化作用的研究［J］.食品工業(yè)科技，2013，7：86-89.

Study on Anti-tumor Effect of Radix Scrophulariae

ZOU Xia， YI Ping， CAO Jiang
（Department of Pharmacy， Hunan Cancer Hospital， Changsha 410006， China）

Objective To analyse the anti-turnout activity of Radix Scrophulariae on Eca-109， S180 tumor mice. Methods Eca-109， S180 tumor mice were adminis-tered orally with 200， 400， 800 mg/（kg/d） dosage of Radix Scrophulariae， then the tumor inhibitionrate， life time， thymus index， spleen index were measured at the end of experiment. Results Radix Scrophulariae can increase Eca-109 tumor mice the thymus index and spleen index of Eca-109 tumor mice，and the tumor inhibition rate was18.59%， 26.13%， 36.17%， respectively. In addition to， Radix Scrophulariae can also prolong life time of S180tumor mice. Conclusion This stydy meanings Radix Scrophulariae have anti-tumor effect and protect immune organs.

Radix Scrophulariae； Anti-tumor activity； Experiment study

表3　對(duì)S180型腹水瘤小鼠生存時(shí)間的影響

R285.5

B

1671-8194（2015）10-0069-02