依達(dá)拉奉注射液中有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究

孫　瑩*　姜　波　林大?！O全樂

（1 長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，吉林 長(zhǎng)春 130031；2 長(zhǎng)春海悅藥業(yè)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130021）

依達(dá)拉奉注射液中有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究

孫瑩1*姜波2林大專1孫全樂1

（1 長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，吉林 長(zhǎng)春 130031；2 長(zhǎng)春海悅藥業(yè)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130021）

目的 建立依達(dá)拉奉注射液中有關(guān)物質(zhì)的控制方法。方法 采用高效液相色譜法，通過篩選色譜條件確定有關(guān)物質(zhì)方法i和有關(guān)物質(zhì)方法ii。結(jié)果 在篩選出的色譜條件下雜質(zhì)能有效檢出并與依達(dá)拉奉峰完全分離。結(jié)論 該方法可作為有效控制依達(dá)拉奉注射液中雜質(zhì)的方法。

依達(dá)拉奉注射液；高效液相色譜法；有關(guān)物質(zhì)

依達(dá)拉奉注射液是日本三菱東京制藥株式會(huì)社開發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)用藥，于2001年在日本首次上市。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)相繼報(bào)道其有關(guān)物質(zhì)的研究［1-3］，主要采用HPLC法控制。但國(guó)內(nèi)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的色譜條件并不完善，不能有效檢出本品的有關(guān)物質(zhì)。本項(xiàng)研究依據(jù)日本最新公布的依達(dá)拉奉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合本品合成工藝，對(duì)可能產(chǎn)生的雜質(zhì)及制劑的降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，篩選適合的色譜條件，為建立真正能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1主要儀器：島津LC-15C，二極管陣列檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm）；有關(guān)物質(zhì)（i），C18柱（島津Wondasil，長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，填料粒徑5μm）；有關(guān)物質(zhì)（ii），C18柱（島津Wondasil，長(zhǎng)150 mm，內(nèi)徑4.6 mm，填料粒徑5μm）；微電腦光照培養(yǎng)箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司，SPR-250B-G）；數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ-300DA）。

1.2主要試藥：甲醇（Fisher Scientific，色譜級(jí)）；冰醋酸（西隴化工股份有限公司，AR）；氨水（北京化工廠，AR）；鹽酸（西隴化工股份有限公司，AR）；過氧化氫（北京化工廠，AR）；氫氧化鈉（北京化工廠，AR）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件篩選：文獻(xiàn)報(bào)道本品氧化破壞雜質(zhì)較多［3］，故用氧化破壞后的同一份樣品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，色譜條件（表1）的篩選，由圖譜可知，國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ有關(guān)物質(zhì)峰形較差，有關(guān)物質(zhì)檢出較少，國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Ⅳ依達(dá)拉奉主峰前面雜質(zhì)分離較差，日本標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)峰形較好，與主峰分離度也符合要求，所以選擇日本方法。

2.2方法：按照日本標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。取某藥廠依達(dá)拉奉注射液（批號(hào)為20120301）作為供試液；精密量取1mL置50mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1mL置20mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，結(jié)果有關(guān)物質(zhì)i單個(gè)雜質(zhì)為0.02%；有關(guān)物質(zhì)ii相對(duì)保留時(shí)間0.3雜質(zhì)為0.03%；相對(duì)保留時(shí)間0.4雜質(zhì)為0.01%；其他單個(gè)雜質(zhì)最大為0.01%，均符合規(guī)定要求。

2.3方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1專屬性

2.3.1.1未破壞樣品：取供試品溶液、對(duì)照溶液、陰性溶液、溶劑，按有關(guān)物質(zhì)方法測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.3.1.2光照破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，置強(qiáng)烈日光下照射16 h，結(jié)果見表3。

2.3.1.3高溫破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，置98 ℃水浴中加熱6 h，取出，放冷，再用流動(dòng)相定容至刻度，結(jié)果見表4。

2.3.1.4酸破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L鹽酸1.5mL，置98 ℃水浴中加熱5 h，取出，放冷，再加1mol/L氫氧化鈉1.5mL中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，結(jié)果見表5。

2.3.1.5堿破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，置98 ℃水浴中加熱5 h，取出，放冷，再加1mol/L鹽酸1.5mL中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，結(jié)果見表6。

2.3.1.6氧化破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1%過氧化氫1mL，置60 ℃水浴中加熱1.5 h，取出，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，結(jié)果見表7。

表1　國(guó)內(nèi)外不同標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)檢查色譜條件

表2　未破壞樣品測(cè)定結(jié)果

表3　光照破壞樣品測(cè)定結(jié)果

表4　高溫破壞樣品測(cè)定結(jié)果

表5　酸破壞樣品測(cè)定結(jié)果

表6　堿破壞樣品測(cè)定結(jié)果

表7　氧化破壞樣品測(cè)定結(jié)果

2.3.2檢測(cè)限：取供試品用流動(dòng)相逐步稀釋，精密量取10μL注入液相色譜儀，樣品的主峰高為基線噪音的3倍，計(jì)算檢測(cè)限，有關(guān)物質(zhì)方法i檢測(cè)限為0.04 ng，有關(guān)物質(zhì)方法ii檢測(cè)限為0.05 ng。

2.4耐用性

2.4.1溶液穩(wěn)定性

2.4.1.1有關(guān)物質(zhì)方法i溶液穩(wěn)定性：取供試品溶液和對(duì)照溶液，在10 h內(nèi)于不同的時(shí)間進(jìn)樣，考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果對(duì)照溶液峰面積 RSD為0.12%；雜質(zhì)峰面積RSD為1.0%；主峰面積RSD為0.22%，雜質(zhì)數(shù)1個(gè)。表明有關(guān)物質(zhì)方法i穩(wěn)定性良好。

2.4.1.2有關(guān)物質(zhì)方法ii溶液穩(wěn)定性：取供試品溶液和對(duì)照溶液，在12 h內(nèi)于不同的時(shí)間進(jìn)樣，考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果對(duì)照溶液峰面積 RSD為1.1%；雜質(zhì)峰面積RSD為1.7%；主峰面積RSD為0.12%，雜質(zhì)數(shù)5個(gè)。表明有關(guān)物質(zhì)方法ii穩(wěn)定性良好。

2.4.2色譜條件變化對(duì)有關(guān)物質(zhì)的影響：按有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，每個(gè)條件各測(cè)試1次，考察不同色譜柱、流速變化、柱溫、pH值等的變化，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，有關(guān)物質(zhì)方法i色譜條件發(fā)生變化時(shí)，雜質(zhì)數(shù)都是1個(gè)，總雜質(zhì)量都為0.02%，對(duì)測(cè)定結(jié)果沒有影響。有關(guān)物質(zhì)方法ii，當(dāng)pH值變化時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，即pH=5.5時(shí)，雜質(zhì)數(shù)5個(gè)，總雜質(zhì)量為0.05%，pH=5.3時(shí)，雜質(zhì)數(shù)4個(gè)，總雜質(zhì)量為0.09%；pH=5.7時(shí)，雜質(zhì)數(shù)5個(gè)，總雜質(zhì)量為0.07%。不同色譜柱、流速變化、柱溫對(duì)測(cè)定結(jié)果均沒有影響，即雜質(zhì)數(shù)都是5個(gè)，總雜質(zhì)量都為0.06%。

3　結(jié) 論

上述試驗(yàn)結(jié)果表明依達(dá)拉奉注射液主要降解途徑是高溫與氧化，為了防止依達(dá)拉奉氧化，在制劑中加入抗氧劑并全程充氮；通過破壞試驗(yàn)并參考日本依達(dá)拉峰注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確定有關(guān)物質(zhì)方法i色譜圖運(yùn)行時(shí)間為主成分峰保留時(shí)間的7倍，有關(guān)物質(zhì)方法ii調(diào)整依達(dá)拉奉保留時(shí)間約11min，色譜圖運(yùn)行時(shí)間為主成分峰保留時(shí)間的2.5倍；破壞出的雜質(zhì)基本上在240 nm附近有最大吸收，所以檢測(cè)波長(zhǎng)選擇240 nm；依達(dá)拉奉與雜質(zhì)能得到較好的分離，并能檢測(cè)出破壞試驗(yàn)中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，說明方法專屬性強(qiáng)，可用于依達(dá)拉奉注射液的有關(guān)物質(zhì)的檢查。

4　討 論

4.1有關(guān)物質(zhì)方法i氧化破壞時(shí)雜質(zhì)較多，當(dāng)流速為1.0mL/min，tR=6min時(shí)，有關(guān)物質(zhì)分離的不是很好，當(dāng)流速為0.8mL/min，tR=7min時(shí)，氧化破壞有關(guān)物質(zhì)分離的較好；有關(guān)物質(zhì)方法ii當(dāng)流速為1.5mL/min，tR=9min時(shí)，堿破壞時(shí)有關(guān)物質(zhì)分離的不是很好，當(dāng)調(diào)整流速使tR=11min時(shí)，堿破壞時(shí)有關(guān)物質(zhì)分離的很好。

4.2依達(dá)拉奉注射液在光照條件下比較穩(wěn)定，5000lx光照7 d，有兩個(gè)新的雜質(zhì)產(chǎn)生，新產(chǎn)生雜質(zhì)的量為0.01%，在強(qiáng)烈日光下照射16 h，有兩個(gè)新的雜質(zhì)產(chǎn)生，新產(chǎn)生雜質(zhì)的量為0.02%，均比較小。

4.3依達(dá)拉奉注射液通過高溫破壞，產(chǎn)生新的雜質(zhì)，最大雜質(zhì)達(dá)到4.10%。

4.4依達(dá)拉奉注射液在酸破壞條件相對(duì)穩(wěn)定，通過酸破壞，雖有新的雜質(zhì)產(chǎn)生，但雜質(zhì)均較小。

［1］ 古鐵波，陳貴平.高效液相色譜法測(cè)定依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉及有關(guān)物質(zhì)的含量［J］.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（21）：61-65.

［2］ 湯海燕，朱正怡.高效液相色譜法測(cè)定依達(dá)拉奉注射液的含量及其有關(guān)物質(zhì)［J］.海峽醫(yī)藥，2010，22（5）：77-78.

［3］ 趙珍珍，黨小佛.RP-HPLC法測(cè)定依達(dá)拉奉的含量和有關(guān)物質(zhì)［J］沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，29（5）：359-363.

R927.2

B

1671-8194（2015）10-0066-02

吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：545）