紅細(xì)胞血型血清學(xué)技術(shù)綜述

劉玥　馮震

【中圖分類(lèi)號(hào)】R392.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）02-0798-01

血 型是人類(lèi)血液的主要特征之一，表達(dá)了血液各種成分的遺傳多態(tài)性。人類(lèi)紅細(xì)胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奧地利維也納大學(xué)的Kar Landsteiner發(fā)現(xiàn)人類(lèi)第一個(gè)血型——ABO血型后，迄今發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)已接近30個(gè)，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。

1 紅細(xì)胞血型鑒定

1.1 ABO血型鑒定

1.1.1原理

根據(jù)紅細(xì)胞上和血清（或血漿）中有或無(wú)A抗原或/和 B抗原及其抗體，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正定型是用已知抗-A或抗-B定型試劑來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型紅細(xì)胞和B型紅細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗-A或/和抗-B。應(yīng)用篩選紅細(xì)胞檢測(cè)鑒定標(biāo)本的血清中是否存在不規(guī)則抗體，如果存在，應(yīng)用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定，以確定抗體的特異性。

1.1.2 結(jié)果判讀

細(xì)胞均勻無(wú)凝集者為陰性（-），細(xì)胞有凝集者或反應(yīng)中紅細(xì)胞溶血者為陽(yáng)性（+）。

1.2.1 原理

Rh血型系統(tǒng)是繼ABO血型系統(tǒng)之后又一重要的血型系統(tǒng)，與ABO血型系統(tǒng)不同的是，在沒(méi)有相應(yīng)的抗原免疫的情況下，一般不會(huì)產(chǎn)生Rh抗體[1] 。紅細(xì)胞表面存在正常D抗原，則該細(xì)胞與抗D（IgM）試劑發(fā)生直接凝集，與抗D（IgG ）試劑發(fā)生間接凝集，該細(xì)胞Rh血型為陽(yáng)性；若紅細(xì)胞表面D抗原位點(diǎn)數(shù)減少或抗原結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變異，則該細(xì)胞與抗D（IgM）試劑不發(fā)生直接凝集，與抗D（IgG ）試劑發(fā)生間接凝集，該細(xì)胞Rh血型為D弱反應(yīng)型；紅細(xì)胞無(wú)論在間接凝集試驗(yàn)還是在直接凝集試驗(yàn)中發(fā)生凝集都應(yīng)為RhD陽(yáng)性。若不存在D抗原，則該細(xì)胞無(wú)論在間接凝集試驗(yàn)還是在直接凝集試驗(yàn)中均不發(fā)生凝集，該細(xì)胞Rh血型為陰性。

用抗C、抗c、抗E、抗e這4種Rh定型試劑通過(guò)血凝試驗(yàn)來(lái)檢查紅細(xì)胞上是否存在相應(yīng)抗原。

用篩選紅細(xì)胞檢測(cè)RhD陰性確證血清中是否存在不規(guī)則抗體，如果存在用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定，以確定抗體的特異性。

1.2.2 結(jié)果判讀

細(xì)胞均勻無(wú)凝集者為陰性（-），細(xì)胞有凝集者或反應(yīng)中紅細(xì)胞溶血者為陽(yáng)性（+）。

1.3 血型鑒定操作時(shí)注意事項(xiàng)

1.3.1 所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。

1.3.2加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。

1.3.3雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。

1.3.4幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

1.3.5玻片法反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。

1.3.6正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報(bào)告。

2 交叉配血實(shí)驗(yàn)

2.1原理

交叉配血試驗(yàn)主要是檢查受血者血清/紅細(xì)胞與供血者紅細(xì)胞/血清之間的相容性。受血者血清對(duì)供血者紅細(xì)胞即主側(cè)配血，是測(cè)定受血者血清中有無(wú)針對(duì)供血者紅細(xì)胞的抗體；受血者紅細(xì)胞對(duì)供血者血清即次側(cè)配血，是測(cè)定供血者血清中有無(wú)針對(duì)受血者紅細(xì)胞的抗體。應(yīng)用篩選紅細(xì)胞檢測(cè)受血者血清中是否存在不規(guī)則抗體，如果存在，須用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性鑒定。

2.1.1鹽水介質(zhì)法

IgM類(lèi)血型抗體可與對(duì)應(yīng)的紅細(xì)胞在室溫鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)，通過(guò)離心觀(guān)察主、次側(cè)有無(wú)凝集現(xiàn)象。主、次側(cè)均無(wú)凝集反應(yīng)表示配血相合；任何一側(cè)凝集或兩側(cè)均凝集為配血不合。

2.1.2 酶介質(zhì)法

蛋白酶（木瓜酶、菠蘿酶、無(wú)花果酶）能破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細(xì)胞間斥力，使得紅細(xì)胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。蛋白酶可修飾紅細(xì)胞膜上的抗原，從而促進(jìn)某些血型系統(tǒng)（尤其是Rh和Kidd）的抗原抗體反應(yīng)；但會(huì)改變其他系統(tǒng)（尤其是M，N，F(xiàn)ya ，F(xiàn)yb ）抗原的構(gòu)型破壞其抗原性。酶還可能改變細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，可導(dǎo)致紅細(xì)胞的非免疫性聚集。

2.1.3 抗人球蛋白介質(zhì)法

抗人球蛋白試驗(yàn)又稱(chēng)coombs試驗(yàn)。在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細(xì)胞，而不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集，加入抗球蛋白試劑后，抗人球蛋白分子的Fab片段與包被在紅細(xì)胞上的抗體Fc段結(jié)合，從而通過(guò)抗人球蛋白分子的搭橋造成紅細(xì)胞的凝集。coombs試驗(yàn)包括“直接抗人球蛋白”和“間接抗人球蛋白”試驗(yàn)，均可使用試管法和微柱凝膠法。直抗試驗(yàn)檢測(cè)紅細(xì)胞上已包被的抗體或補(bǔ)體；間抗試驗(yàn)檢測(cè)血清或血漿中游離的不完全抗體。

2.1.4 凝聚胺法

聚凝胺是一種由四個(gè)銨聚合而成的高陽(yáng)離子聚合體。聚凝胺可使正常紅細(xì)胞聚集，而在加入檸檬酸鹽時(shí)又可使聚集的紅細(xì)胞散開(kāi)。當(dāng)紅細(xì)胞上有IgG抗體結(jié)合時(shí)，聚凝胺所造成的凝集是不可逆的。在此實(shí)驗(yàn)中，紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育，以促進(jìn)抗體結(jié)合到紅細(xì)胞上。然后加聚凝胺，離心后通過(guò)加入檸檬酸鹽使聚凝胺形成的凝集散開(kāi)。此時(shí)，由抗體介導(dǎo)的凝集在加入檸檬酸鹽后仍然維持，而無(wú)抗體致敏的紅細(xì)胞凝集則會(huì)散開(kāi)。如果需使用加入檸檬酸鹽后散開(kāi)的紅細(xì)胞做進(jìn)一步的抗球蛋白試驗(yàn)，則散開(kāi)后的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)三次洗滌。

2.1.5 微柱凝膠免疫技術(shù)

微柱凝膠試驗(yàn)（Microtubes Gel Test，MGT）是20世紀(jì)90年代先后進(jìn)入國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室并用于交叉配血的新方法。在一些先進(jìn)國(guó)家已成為常規(guī)的紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

2.1.6 結(jié)果判讀

先觀(guān)察上清液的顏色，然后再輕搖試管觀(guān)察有無(wú)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象發(fā)生； 如試管內(nèi)紅細(xì)胞呈均勻混濁無(wú)顆粒出現(xiàn)即無(wú)凝集，上清液呈正常血清狀顏色為交叉配血試驗(yàn)相合。如上清液呈紅色即有溶血現(xiàn)象，紅細(xì)胞成塊即為凝集現(xiàn)象，為交叉配血試驗(yàn)不相合。

3不規(guī)則抗體的篩選和鑒定

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體，即除抗A、抗B之外的血型抗體。若OC管呈陽(yáng)性反應(yīng)，則可能存在不規(guī)則抗體，應(yīng)用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定。若可疑為亞型標(biāo)本，增加抗A、抗B抗血清反應(yīng)量，加抗AB、抗H、抗A1試劑做正定型。用A1、A2、B、O細(xì)胞做反定型。如果以上試驗(yàn)不足以確認(rèn)亞型類(lèi)型，要加做唾液中血型物質(zhì)的測(cè)定。

4 血型抗體效價(jià)測(cè)定

凝集強(qiáng)度 效價(jià)評(píng)分4+ 123+ 102+ 81+ 5W+ 20 0抗體效價(jià)測(cè)定時(shí)一種抗體半定量的分析方法[2] 。血清經(jīng)連續(xù)倍比稀釋后與選定的紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，通常以肉眼可見(jiàn)的明顯凝集的最高血清稀釋度數(shù)值的倒數(shù)來(lái)表示效價(jià)，這個(gè)半定量的方法能提供血清中抗體的量或紅細(xì)胞上抗原的量的情況。細(xì)胞均勻無(wú)凝集者為陰性（0），細(xì)胞有凝集者或反應(yīng)中紅細(xì)胞溶血者為陽(yáng)性（+）。

參考文獻(xiàn)

[1] 車(chē)玲玲，宿軍，李敏等.RhD（-）獻(xiàn)血者中檢出IgM抗-D1例.中國(guó)輸血雜志，2012，（12）：1331-1332.

[2]韓兆東，郭立霞，汪桂霞等.臨床檢驗(yàn)學(xué).中醫(yī)古籍出版社，2013：216.