微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)孕婦IgG抗體效價(jià)診斷新生兒溶血病的應(yīng)用研究

陳曉軍，艾 清

（1.長(zhǎng)春市婦產(chǎn)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春 130042；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科）

微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)孕婦IgG抗體效價(jià)診斷新生兒溶血病的應(yīng)用研究

陳曉軍1，艾 清2＊

（1.長(zhǎng)春市婦產(chǎn)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春 130042；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科）

＊通訊作者

微柱凝膠法免疫檢測(cè)技術(shù)是20世紀(jì)90年代進(jìn)入我國(guó)并逐步廣泛應(yīng)用于臨床的實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目檢測(cè)。抗人球蛋白試驗(yàn)是目前對(duì)IgG抗體檢測(cè)國(guó)際公認(rèn)的最經(jīng)典、可靠的實(shí)驗(yàn)室方法。由于傳統(tǒng)的間接抗人球蛋白試驗(yàn)（試管法）操作繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺點(diǎn)，一直不能被臨床常規(guī)應(yīng)用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)比試管法抗人球蛋白試驗(yàn)敏感性高10倍左右［1］，且方法簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、結(jié)果可重復(fù)、試驗(yàn)流程標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。本文就微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)與試管法抗人球蛋白分別對(duì)225例懷孕3個(gè)月以上孕婦的血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)對(duì)象 2009年8月至2010年6月期間，懷孕3個(gè)月以上到本院進(jìn)行產(chǎn)前檢查的孕婦225例。年齡28-38周歲，ABO血型為O型的孕婦，丈夫ABO血型均為A型、B型、AB型。

1.1.2 主要試劑 微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡（長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。廣譜抗人球蛋白試劑（長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)），2-Me試劑（長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。

1.1.3 主要儀器 TD-3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)和FYQ型免疫微柱孵育器（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。光學(xué)顯微鏡（日本Olympus CX-31）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理 取試管一支，加受檢孕婦血清0.2ml及2-Me試劑0.2ml，加塞混合，置37℃水浴30min，充分破壞血清中IgM抗體，另取6支干凈試管，第1支試管加處理后血清50μl和350μl生理鹽水混勻，第2－6支試管分別加入200μl生理鹽水，從第1支試管中吸取200μl混合液加入第2支試管中混勻，再?gòu)牡?支試管中吸取200μl混合液加入第3支試管中混勻，依次倍比稀釋。第1－6支試管稀釋倍數(shù)依次為：1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。

1.2.2 采用微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)對(duì)受檢孕婦血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測(cè)：取出微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡，標(biāo)記標(biāo)本號(hào)，6孔中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的0.8%紅細(xì)胞懸液50μl，從第1－6支試管中各取50μl混合液分別加入微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡對(duì)應(yīng)的孔中，置37℃孵育箱中孵育15min后，離心5min，肉眼觀察結(jié)果。

1.2.3 采用試管法抗人球蛋白試驗(yàn)對(duì)同一受檢孕婦血清進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測(cè)：取六支標(biāo)記好的試管，六管中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的2%紅細(xì)胞懸液100μl，用生理鹽水反復(fù)洗滌4次，再對(duì)應(yīng)加入上述第1－6支試管中混勻液100μl，37℃水浴60min后，在反復(fù)洗滌4次，在六支試管中分別加入廣譜抗人球蛋白試劑各100μl，離心1min（1 000 r／min），輕輕搖動(dòng)試管，觀察血凝結(jié)果。

2 結(jié)果

結(jié)果判定：以凝集強(qiáng)度≥1＋判定為陽(yáng)性結(jié)果，凝集強(qiáng)度＜1＋判定為陰性結(jié)果。注：由于抗體效價(jià)1∶4、1∶8在診斷新生兒溶血病中的意義不明確，故本實(shí)驗(yàn)研究將抗體效價(jià)＜1∶16視為陰性［2］。

兩種方法的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。從表可見(jiàn)：微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)較試管法抗人球蛋白試驗(yàn)靈敏度高，且滴度越高，差異越明顯。

3 討論

母嬰ABO血型不合是新生兒溶血病的重要原因，對(duì)ABO血型為O型的孕婦，丈夫ABO血型為A型、B型、AB型者，在孕期進(jìn)行IgG抗體效價(jià)檢測(cè)是非常有必要的，對(duì)有異常者（目前臨床普遍認(rèn)為IgG抗體效價(jià)≥1：64有意義［2］），可以早發(fā)現(xiàn)早治療，可以有效的預(yù)防及減少由母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病的發(fā)生。

表1 225例微柱凝膠法與試管法抗人球蛋白（IgG）抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果比較

傳統(tǒng)使用的試管法抗人球蛋白試驗(yàn)操作步驟煩瑣、時(shí)間長(zhǎng)，不能標(biāo)準(zhǔn)化、人為因素干擾大等缺點(diǎn)，很難在臨床推廣應(yīng)用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)是建立在傳統(tǒng)的試管法抗人球蛋白試驗(yàn)基礎(chǔ)之上的一種新方法，在凝膠中進(jìn)行反應(yīng)，利用紅細(xì)胞的可變形性的特點(diǎn)，通過(guò)離心力作用使未經(jīng)抗人球蛋白橋聯(lián)的單個(gè)紅細(xì)胞可通過(guò)凝膠介質(zhì)的原理，用以檢測(cè)血清中的IgG抗體，并采用目測(cè)直接觀察到檢測(cè)結(jié)果。且對(duì)陰性、陽(yáng)性結(jié)果一目了然，避免了試管血凝法憑經(jīng)驗(yàn)判斷結(jié)果的錯(cuò)誤。抗人球蛋白試驗(yàn)是目前國(guó)際公認(rèn)的最可靠的不完全抗體的檢測(cè)方法，由于繁瑣的操作程序一直不能實(shí)現(xiàn)臨床常規(guī)化，微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)法徹底改變了試管法抗人球蛋白試驗(yàn)的弊端，其無(wú)需繁瑣的洗滌過(guò)程、操作方法簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好、標(biāo)本用量少（減少操作污染的同時(shí)還節(jié)省患者的紅細(xì)胞和血清，特別有利于新生兒及某些血液病標(biāo)本量很少時(shí)的檢測(cè)［3］）等優(yōu)點(diǎn)已被臨床廣泛應(yīng)用。

綜上所述，微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用于孕婦IgG抗體效價(jià)檢測(cè)是可行的。

［1］李 勇，楊貴貞.人類(lèi)紅細(xì)胞血型血清學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，1999：251.

［2］魏亞明，歐英賢.紅細(xì)胞免疫抗體檢查在輸血及產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用［J］.中國(guó)輸血雜志，2000，13（4）：266

［3］李 勇，馬學(xué)年.實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.北京：科學(xué)出版社，2006：637.

1007－4287（2012）02－0330－02

2010－11－30）