對氨基苯甲酰胺中對氨基苯甲酸含量的測定

王豐莉 聶和俊 熊永科 陳偉強(qiáng)

摘 要：運(yùn)用薄層色譜、紫外光譜、紅外光譜對對氨基苯甲酰胺中對氨基苯甲酸進(jìn)行定性確認(rèn)。通過條件試驗(yàn)確定HPLC最佳分離條件，用乙酸銨調(diào)節(jié)緩沖體系，用20%（V/V）的甲醇作為流動相，外標(biāo)法定量。對氨基苯甲酸含量在0%～0.28%之間具有線性關(guān)系。驗(yàn)證試驗(yàn)表明方法簡單、可行?？蓾M足對氨基苯甲酰胺中對氨基苯甲酸含量的測定。

關(guān) 鍵 詞：對氨基苯甲酰胺;對氨基苯甲酸;高效液相色譜

中圖分類號：O 657 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 1671-0460（2015）06-1435-03

Determination of 4-Aminobenzoic Acid in p-Amino-Benzamide

WANG Feng-li，NIE He-jun，XIONG Yong-ke，CHEN Wei-qiang

（Lily Group Co.，Ltd.， Zhejiang Hangzhou 311228，China）

Abstract： TLC＼UV＼IR were used to prove the existence of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide. The separating conditions were decided by condition tests. The pH of mobile phase was adjusted by ammonium acetate， mobile phase was methanol 20%（V/V）. Quantitative content was determined by external standard method. The results show that 4-aminobenzoic acid （0%～0.28%） in p-amino-benzamide can be determined by this method. The method is simple， rapid， accurate and can meet the requirement for determination of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide.

Key words： P-amino-benzamide; 4-aminobenzoic acid; HPLC

對氨基苯甲酰胺（DB-70）即紅色基DB-70，（以下以DB-70表示）是重要的有機(jī)顏料中間體，是顏料紅170的主要原材料[1]。DB-70通常以對硝基苯甲酸為原料，經(jīng)過酰氯化、氨解、還原反應(yīng)制成[2]。對氨基苯甲酸易在氨解過程產(chǎn)生，它能夠與DB-70一起重氮化，與偶合組分偶合生成有色物質(zhì)，對顏料的純度、顏色性能甚至應(yīng)用性能等產(chǎn)生影響。并且其本身為雙官能團(tuán)化合物，也可以與芳胺類偶合，生成偶氮染料[3]和偶氮顏料[4]。因此測定其中對氨基苯甲酸的含量對生產(chǎn)應(yīng)用具有重要意義。

DB-70中對氨基苯甲酸含量通常用薄層色譜法測定。該法萃取及分離時間較長，顯色需經(jīng)過重氮化、偶合反應(yīng)，容易產(chǎn)生有毒氮氧類氣體;并且使用高濃度的酸，產(chǎn)生酸霧，對測試環(huán)境及操作者造成不良影響。依靠斑點(diǎn)的大小及顏色的深淺判定含量，量化準(zhǔn)確度較差。

化妝品中的對氨基苯甲酸類物質(zhì)色譜法測定已有報道[5]。本文把高效液相色譜法應(yīng)用于DB-70中對氨基苯甲酸的測定，用外標(biāo)法進(jìn)行定量。測試快速、結(jié)果準(zhǔn)確，過程安全，環(huán)保。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑

DB-70（工業(yè)樣品）;對氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品;甲醇（色譜純）;乙酸銨、異丙醇、甲苯、氨水、亞硝酸鈉、鹽酸、N-（1-萘基）-二氯乙二胺均為分析純試劑;GF254薄層硅膠板（制備板）。

1.1.2 儀器

三用紫外分析儀（ZF-2）;真空泵（AP-9925）;超聲波清洗器（KUDOS）;紅外光譜儀（PE SPECTRU TWO）;高效液相色譜儀（LC-20AD，DAD 檢測器，ODS C18柱， 5 μm×4.6 mm×250 mm）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 定性試驗(yàn)

用TLC方法把DB-70中主雜質(zhì)進(jìn)行分離，通過顯色找出待測雜質(zhì)位置。用硅膠制備板分離出對氨基苯甲酸，制取試驗(yàn)溶液。同樣方法配制對氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

對試驗(yàn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用HPLC和IR測試。通過HPLC出峰位置，及對應(yīng)位置峰提取的UV圖，以及IR圖來確定試驗(yàn)溶液的成分。

1.2.2 定量試驗(yàn)

通過條件試驗(yàn)優(yōu)化流動相組成，選取最佳分離條件。

稱取0.5 g樣品，用甲醇溶解并定容到50 mL，作為樣品溶液。在選定的HPLC分離條件進(jìn)行測定。以對氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，用外標(biāo)法，用峰面積計算其含量。

2 結(jié)果和討論

2.1 譜圖定性分析

2.1.1 HPLC圖（圖1）

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液HPLC圖

Fig.1 HPLC spectrum of standard sample

圖2中，試驗(yàn)溶液在～4.1 min出峰（其中～6.2 min的微量峰為DB-70），與圖1中對氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品出峰位置吻合。

圖2 試驗(yàn)溶液HPLC 圖

Fig.2 HPLC spectrum of sample

2.1.2 UV 吸收結(jié)果

分別提取圖1、圖2及圖3中～4.1 min處峰對應(yīng)的UV圖，其紫外吸收相同，最大吸收波長均為265 nm。斑點(diǎn)位置的雜質(zhì)與對氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品的紫外吸收一致。

2.1.3 IR測試結(jié)果

用液膜法，在4 000 ～450 cm-1對試驗(yàn)溶液進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，特征峰位置（cm-1）：3 460;3 390;3 360;1 660～1 575;1 355;1 180;845，與對氨基苯甲酸特征峰匹配。

綜合2.1.1、2.1.2、2.1.3，可以判定DB-70中主雜質(zhì)為對氨基苯甲酸。

2.2 DB-70中對氨基苯甲酸含量的測定

圖3為車間生產(chǎn)的DB-70工業(yè)品的HPLC圖。對氨基苯甲酸含量以～4.1 min峰的峰面積，用外標(biāo)法測定。

圖3 DB-70的HPLC圖

Fig.3 HPLC spectrum of p-amino-benzamide

2.2.1 色譜條件的選擇

在現(xiàn)有儀器條件，通過對流動相的選擇優(yōu)化分離條件。

考慮到DB-70及對氨基苯甲酸結(jié)構(gòu)中含有路易斯酸堿基團(tuán)，向流動相中加入緩沖鹽調(diào)節(jié)其pH值，使被測物質(zhì)以單一的形態(tài)存在于體系中。本研究中選擇乙酸銨進(jìn)行調(diào)節(jié)。

在C18反相色譜中，流動相中有機(jī)成分比例對大多數(shù)待測組分的保留行為影響較大。30%（V/V）甲醇作流動相，DB-70與對氨基苯甲酸重疊。而10%（V/V）甲醇體系中，分離效果較好，但出峰較慢，甚至部分其它雜質(zhì)成分不能洗出?？紤]分離效果及操作時間，選定20%（V/V）比例的有機(jī)相組成。

UV圖顯示，該體系中對氨基苯甲酸的最大吸收波長為265 nm，DB-70的最大吸收波長271 nm，綜合其它雜質(zhì)成分的紫外吸收特性，選定270 nm作為定量的波長。

最終確定測試的色譜條件為：

柱溫箱：35 ℃

流速：0.8 mL/min

流動相：（甲醇：0.2%乙酸銨溶液=20：80，V/V）

HPLC圖提取波長：270 nm。

2.2.2 測量范圍的確定

以對氨基苯甲酸的線性范圍作為測量范圍選擇的依據(jù)。

圖4中，對氨基苯甲酸含量在0～2 800 mg/kg，即不超過0.28%范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999 1，有很好的線性關(guān)系，能滿足工業(yè)DB-70中對氨基苯甲酸含量測定的需求。

圖4 對氨基苯甲酸線性范圍

Fig.4 Linear range of 4-aminobenzoic acid

注釋：TLC評級是通過薄層分離顯色后，以對照品批次的雜斑點(diǎn)顏色為參考，樣品批次的雜斑點(diǎn)與之相比較，根據(jù)顏色深淺評定為不同的等級，顏色越深級別越高。

2.2.3 可行性試驗(yàn)

同時對5個不同生產(chǎn)批次和1個對照品批次的的DB-70樣品中對氨基苯甲酸進(jìn)行薄層顯色評級和本法測定含量進(jìn)行比較（表1）。

表1中TLC評級與測出的對氨基苯甲酸含量高低相對應(yīng)，說明該法測定可行。

3 結(jié)束語

通過標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照，借助UV、HPLC、IR手段確定待測組分為對氨基苯甲酸。用乙酸銨調(diào)節(jié)流動相的pH值，以20%（V/V）的甲醇作流動相，能夠使DB-70中的雜質(zhì)完好分離。用峰面積進(jìn)行定量，可以快速準(zhǔn)確的測定其中對氨基苯甲酸的含量，該法也可推廣運(yùn)用于DB-70中其它雜質(zhì)成分的測定。

本研究中使用的HPLC使用的DAD檢測器，可以用UV檢測器，固定檢測波長進(jìn)行測定。測試中使用的其它試劑、儀器等也比較大眾化，宜于測定方法的推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1] 周春隆，穆振義.有機(jī)顏料化學(xué)與工藝學(xué)[M].修訂版.北京：中國石化出版社，2002：335.

[2] 喻素娟， 欒永勤，周飛舟，等.對氨基苯甲酰胺合成方法研究[J].化工時刊，1998，12（7）：19-20.

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[4] Keys B A ， Ouderirk J T. PCT Int. Appl： WO，8910385[P].

[5] 張可冬，李慧勇，譚建華，等.高效液相色譜法測定化妝品中9種對氨基苯甲酸及其酯類防曬劑[J].分析試驗(yàn)室，2014，33（9）：1108-1113.