江南星蕨與深綠卷柏多糖和脂溶性物質(zhì)的提取及其抗菌活性研究

吳海斌等

摘要[目的]研究江南星蕨與深綠卷柏多糖和脂溶性物質(zhì)的提取及其抗菌活性。[方法]采用水提醇沉法和索氏抽提法分別對(duì)江南星蕨和深綠卷柏多糖和脂溶性物質(zhì)進(jìn)行提取，并用圓形紙片法和MIC測定法對(duì)其抗菌活性進(jìn)行了檢測。[結(jié)果]江南星蕨與深綠卷柏多糖含量有差別，其多糖提取物表現(xiàn)出不同程度的抗菌活性，其對(duì)酵母菌的抗菌活性最強(qiáng)，抑菌圈分別達(dá)18和22 mm；而兩者所提取的脂溶性物質(zhì)對(duì)5種受試菌均無抗菌效果。[結(jié)論]江南星蕨和深綠卷柏多糖可作為功能性多糖加以開發(fā)。

關(guān)鍵詞江南星蕨；深綠卷柏；多糖；脂溶性物質(zhì)；提取；抗菌活性

中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2015）21-085-02

江南星蕨（Microsorum fortunei（T.Moore）Ching）系水龍骨科蕨類植物，全草入藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、涼血止血、消腫止痛功效，可治療黃疸、痢疾、尿路感染、白帶、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、吐血、便血、跌打損傷、毒蛇咬傷等癥[1]。江南星蕨乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物具有很強(qiáng)的抗氧化能力[2]。深綠卷柏（Selaginella doederleinii Hieron.）為蕨類植物門卷柏科植物，其性味甘、微苦、澀，性涼，有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、活血化淤之功效，常用于治療咽喉腫痛、肺熱咳嗽、乳腺炎、濕熱黃疸、風(fēng)濕痹痛、外傷出血[3]。深綠卷柏具有抗腫瘤藥理活性[4]。但這2種蕨類植物在抗菌方面的研究卻未見報(bào)道，為此，筆者對(duì)江南星蕨和深綠卷柏中多糖和脂類的提取及其抗菌活性進(jìn)行了研究，以期為進(jìn)一步開發(fā)利用藥用蕨類資源提供基礎(chǔ)資料。

1材料與方法

1.1材料

試材為江南星蕨與深綠卷柏的全株，采自福建省寧德市蕉城區(qū)后山。受試菌包括2種真菌和3種細(xì)菌，真菌有產(chǎn)黃青霉Penicillium chrysogenum Thom和啤酒酵母Saccharomyces carlsbergensis Hansen，細(xì)菌有革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis Cohn、滕黃八疊球菌Sarcina lutea Schroeter和革蘭氏陰性菌大腸桿菌Escherichia coli Castellani et Chalmers。菌種來自寧德師范學(xué)院生物系微生物實(shí)驗(yàn)室。

1.2方法

1.2.1材料的處理。

采集蕨類植物的全株，進(jìn)行種類鑒定后，將2種蕨類洗凈于陰涼處自然晾干，用剪刀將其剪成較小的植物碎片，再用植物粉碎機(jī)粉碎成40目，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2多糖的提取和含量測定。

取江南星蕨和深綠卷柏2種蕨類粉末各100 g，加入1 000 ml水，于100 ℃水浴下加熱1 h，再經(jīng)70～80 ℃水浴加熱1～2 h過濾，棄去殘?jiān)∩锨逡海?0 ℃水浴下將上清液濃縮至20～30 ml，加3倍體積無水乙醇，離心取沉淀，用3%三氯乙酸溶解沉淀，離心去沉淀，在40～50 ℃水浴條件下將上清液蒸干至恒重，得到多糖并稱其質(zhì)量。多糖含量的測定采用硫酸苯酚法，按照參考文獻(xiàn)[5]的方法進(jìn)行。

1.2.3脂溶性物質(zhì)的提取和含量測定。

脂溶性物質(zhì)的提取采用石油醚（分析純，沸程為60～90 ℃）進(jìn)行索氏抽提，稱取2種蕨類粉末各25 g，按照參考文獻(xiàn)[6]的方法進(jìn)行提取18 h，得到的脂溶性物質(zhì)通過真空旋轉(zhuǎn)蒸餾儀去除溶劑，稱重。

1.2.4抗菌活性的檢測與MIC的測定。

將多糖提取物配成質(zhì)量溶度為0.25 g/ml的水溶液，脂溶性物質(zhì)則配成0.25 g/ml的石油醚溶液，同時(shí)分別以蒸餾水和石油醚為空白對(duì)照，用于抑菌試驗(yàn)，抑菌試驗(yàn)采用圓形紙片法，按照參考文獻(xiàn)[7]的方法來進(jìn)行。

MIC的測定也采用圓形紙片法，將多糖溶液稀釋成30.0、15.0、7.5、5.0、2.5 mg/ml的梯度濃度用于抑菌，以未見抑菌圈的最高濃度為最小抑菌濃度（MIC）。

2結(jié)果與分析

2.1江南星蕨與深綠卷柏提取物的提取率及其含量

江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類的多糖提取結(jié)果（表1）表明，不同種的蕨類植物，其多糖提取率存在明顯差別，江南星蕨與深綠卷柏的多糖提取率分別為13.79%和18.70%，深綠卷柏的多糖提取率略高于江南星蕨；

根據(jù)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.007 8X+0.247 6（R2=0.991 3），測定得到江南星蕨與深綠卷柏的多糖含量分別為12.729%和10.232%，江南星蕨的多糖含量略高于深綠卷柏。

脂溶性物質(zhì)的提取中發(fā)現(xiàn)江南星蕨的提取率為8.4%，而深綠卷柏的脂類提取率為4.4%，由此可見，江南星蕨的脂溶性物質(zhì)提取率明顯高于深綠卷柏。

比較這2種物質(zhì)的提取率發(fā)現(xiàn)多糖的提取率高于脂類提取率，可見江南星蕨與深綠卷柏這2種蕨類多糖的含量高于脂類，其中深綠卷柏這2種物質(zhì)的含量差距更大，可見蕨類植物物質(zhì)的含量與其環(huán)境是相關(guān)的，光線越少其多糖含量會(huì)增加，而脂類物質(zhì)相對(duì)減少。

2.2江南星蕨與深綠卷柏提取物的抗菌活性

從江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類植物多糖的抑菌圈大小（表2）可以看出，當(dāng)多糖的質(zhì)量溶度為0.25 mg/ml時(shí)，江南星蕨與深綠卷柏的抑菌效果較好，抑菌圈的直徑均在6～22 mm。深綠卷柏多糖的抗菌活性強(qiáng)于江南星蕨，而江南星蕨則呈現(xiàn)出對(duì)5種受試菌均有抗菌活性，說明江南星蕨具有廣譜抗菌性。另外，江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類對(duì)啤酒酵母的抑制效果最好，其抑菌圈分別為18和22 mm，從菌類的敏感性來看，啤酒酵母對(duì)江南星蕨與深綠卷柏多糖較為敏感。江南星蕨多糖提取物對(duì)革蘭氏陰性菌的抗菌活性強(qiáng)于抗革蘭氏陽性菌。江南星蕨與深綠卷柏的脂溶性提取物對(duì)5種受試菌均沒有抑制活性，另外空白對(duì)照也沒有抑菌活性。