如何探究促進“彩葉草”生根的生長素濃度例談

王春梅

摘要：植物組培技術在當今社會已得到了廣泛的推廣和使用，初中生物教材也涉及這方面的知識，為使學生深入了解植物培養(yǎng)技術，特開設植物培養(yǎng)實驗。本文就是按照植物培養(yǎng)實驗的一般流程來介紹彩葉草的組織培養(yǎng)技術，包括彩葉草培養(yǎng)基的配制、彩葉草外植體的采集、外植體的消毒、彩葉草的接種、彩葉草的培養(yǎng)、煉苗、移植和移栽等過程。在這一操作過程中，培養(yǎng)學生嚴謹?shù)目茖W態(tài)度和基本操作技能，全面提升學生的生物學素養(yǎng)。

關鍵詞：彩葉草 組織培養(yǎng) 消毒和滅菌 科學態(tài)度 生物學素養(yǎng)

一、探究原理

植物細胞脫離了原來所在的植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時，處于無菌環(huán)境，在一定的營養(yǎng)物質、激素和其他外界條件的作用下，就有可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。

二、實驗用品

植物組織培養(yǎng)母液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，彩葉草，量筒，微量可調移液器，組培瓶，高壓滅菌鍋，超凈工作臺，酒精燈，解剖剪，解剖刀，接種盤，光照培養(yǎng)架等，彩葉草若干。

三、探究目的

掌握無菌操作技術，煉苗、移栽等技術，學習彩葉草組織培養(yǎng)的基本方法和步驟，培養(yǎng)學生養(yǎng)成嚴謹?shù)目茖W態(tài)度和不斷進取的探索精神。

四、實驗準備

配制四種營養(yǎng)母液和0.5mg/mL NAA；高壓滅菌消毒接種器械、接種器皿和蒸餾水、濾紙、燒杯等，紫外燈消毒工作服；酒精燈擦拭超凈工作臺并紫外燈消毒30min。

五、實驗步驟

1.MS彩葉草培養(yǎng)基的配制：取母液1200mL，母液 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各20mL，蒸餾水1400mL，與四種母液混在2000mL的燒杯中；用電子天平稱量瓊脂13g、蔗糖60g放入燒杯中，放在磁力攪拌器上進行攪拌，攪拌均勻后加熱至融化，倒入燒杯中加蒸餾水至2000mL，用10%的NaOH溶液調節(jié)pH值到6.0，分成5等分，標號為A、B、C、D、E五個燒杯中，A燒杯不加任何激素，B燒杯加100uL NAA，C燒杯加200uL NAA，D燒杯加300uL NAA，E燒杯加400uL NAA，然后每個燒杯的培養(yǎng)基平均分裝到30個組培瓶中。

2.彩葉草莖段接種：打開已消過毒的超凈工作臺，選擇小風為臺面風，用75%的酒精擦拭雙手，點燃酒精燈放在接種盤附近，先用酒精對接種器械、接種器皿進行消毒，然后灼燒接種器械和接種器皿，待涼之后取剛剛消毒過的彩葉草的莖段，大約2cm左右為宜，按照植物的生長極性，將其插入培養(yǎng)基中，對瓶口和瓶蓋進行消毒，立即擰緊接種瓶蓋。

3.彩葉草生根培養(yǎng)：把接種后的組培瓶放在培養(yǎng)室的光照培養(yǎng)架上，培養(yǎng)溫度控制在22-25℃，每日至少光照12h。發(fā)現(xiàn)莖段培養(yǎng)7天后開始有根生長，再過7天左右根長長2cm左右。

4.探究結果統(tǒng)計：A盤有0瓶生根；B盤有10瓶生根；C盤有25瓶生根；D瓶有15瓶生根；E瓶有7瓶生根。

5.結果分析：促進彩葉草生根的比較適宜的生長素濃度大約是200uL，要想知道彩葉草最適生長素濃度，還要進一步做實驗，在200uL濃度左右再取值，重復上述實驗，這樣操作得出的結論會更科學。

6.彩葉草的移植：當組培苗在組培瓶中的根長到2-3cm左右時，就可以進行煉苗了，在自然條件下先閉瓶煉苗3天再開瓶煉苗3天，煉苗后洗凈瓊脂移植到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，以促使生出更多的根，此期間給予適宜的溫度和濕度，時間大約1個月左右。

7.彩葉草的移栽：由于多孔培養(yǎng)板上含有滅過菌的珍珠巖和草炭土（比例為1：3），很好地促進了根系的生長，當苗高4-5cm且生長健壯時移栽到花盆或大田中。

六、組培苗污染現(xiàn)象、分析及處理

整個實驗的任何一個階段都有可能出現(xiàn)污染現(xiàn)象，在彩葉草的組織培養(yǎng)中由于我們采用彩葉草的莖為外植體，莖段雖然已經經過了消毒處理，但是也有污染的可能。在培養(yǎng)莖的第三天有幾處紅色的小點，這屬于細菌污染；五天后出現(xiàn)白色或墨綠色絨毛絮狀物，這屬于真菌污染。有時候在同一瓶內既有細菌污染又有真菌污染，無論哪一種污染都將導致組培實驗的失敗，凡出現(xiàn)污染的組培苗或外植體一般都不能再用。我們采用的清除方法有：第一種是將污染的組培苗連組培瓶進行高壓滅菌消毒，然后將封口膜打開把內部的組培苗和培養(yǎng)基一起倒掉，再把瓶子刷洗干凈備用；第二種：如果被菌感染的組培苗不想經過高壓滅菌消毒，對于細菌污染，則可以直接倒掉，對于真菌污染，由于真菌中的霉菌是用孢子進行繁殖的，則需要拿到離組培室較遠的地方倒掉，要不然的話，霉菌產生的孢子會污染組培室中其他的無菌苗，但是這樣的組培瓶在下次使用之前必須經過高壓滅菌消毒處理。

七、總結

植物組織培養(yǎng)實驗是當今生物實驗教學的前沿科學，對生產生活具有十分重要的指導意義，對培養(yǎng)學生嚴謹?shù)目茖W態(tài)度，探究生命科學的奧秘，提高學生操作技能和合作學習能力等方面，都具有十分重要的現(xiàn)實意義。教師應按照新課程標準的要求，積極探索實驗教學新思路，為學生創(chuàng)作自主探究和合作學習的平臺，全面達成生物教學目標，綜合提升學生的生物學素養(yǎng)。

參考文獻：

[1]吳中軍.6-BA和NAA對誘導彩葉草芽和生根的影響[J].北方園藝，2009（10）.

[2]鐘泰林，石柏林，錢奇霞.幾種草本花卉繁育試驗[J].浙江農林大學學報，2003（1）.

（責編 趙建榮）