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    前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9的相關(guān)研究進(jìn)展

    2015-10-21 18:15:39毛承譽(yù)卜軍
    關(guān)鍵詞:基因表達(dá)炎癥反應(yīng)氧化應(yīng)激

    毛承譽(yù) 卜軍

    【摘要】前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)基因是前蛋白轉(zhuǎn)化酶中的一種,與膽固醇代謝息息相關(guān)的基因,是影響心腦血管疾病的重要因子,近年來關(guān)于PCSK9的研究逐漸增多,其生物學(xué)效應(yīng)及在疾病中的作用日益受到關(guān)注。目前諸多研究證實(shí)PCSK9參與多種機(jī)體重要的功能,主要包括調(diào)節(jié)膽固醇代謝,促進(jìn)肝臟再生,影響神經(jīng)細(xì)胞凋亡,參與炎癥反應(yīng)等。本文就PCSK9在組織及器官上的表達(dá)和作用以及其與炎癥反應(yīng)和心肌梗死的關(guān)系做一綜述。

    【關(guān)鍵詞】PCSK9;基因表達(dá);氧化應(yīng)激;炎癥反應(yīng);心肌梗死

    【中圖分類號】R541.4;R589.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095-6681.2015.10..04

    PCSK9屬于前蛋白轉(zhuǎn)化酶家族,全身的大部分器官組織中都存在PCSK9[1]。近年來大量關(guān)于PCSK9的研究發(fā)現(xiàn)其主要的生物學(xué)功能是參與膽固醇代謝,調(diào)節(jié)血脂水平,其中PCSK9功能缺失型和功能獲得型突變與膽固醇血癥的發(fā)生密切相關(guān)。此外,還發(fā)現(xiàn)PCSK9在器官發(fā)育、細(xì)胞凋亡以及炎癥過程中有著重要意義[2-3]。

    1 PCSK9在器官及組織上的表達(dá)及功能

    1.1 PCSK9在肝臟上的表達(dá)及功能

    雖然PCSK9在全身的大部分器官組織中都存在,如肝腎腦脾及空回腸,只有肝臟中的PCSK9可分泌入血[4]。早期已有研究表明,人體肝臟中PCSK9含量最高,成年人肝臟中PCSK9水平與胎兒肝臟中的相比,后者更高,PCSK9的表達(dá)在肝臟生長發(fā)育時(shí)更加明顯,由此判斷在肝臟的再生過程中PCSK9發(fā)揮著一定的作用[5]。亦有研究發(fā)現(xiàn)在肝臟部分切除條件下,以PCSK9基因敲除的小鼠為實(shí)驗(yàn)組,正常小鼠為對照組,結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠的衰老率和死亡率明顯高于對照組;兩組小鼠免疫細(xì)胞比較,實(shí)驗(yàn)組增殖細(xì)胞核抗原出現(xiàn)時(shí)間明顯晚于對照組,且表達(dá)量也低于對照組;并且在對照組小鼠的肝臟周邊有壞死現(xiàn)象發(fā)生,該研究結(jié)論說明,正常小鼠肝臟細(xì)胞的再生能力較PCSK9基因敲除小鼠的強(qiáng)[6]。Petar等在近期發(fā)表的一項(xiàng)研究表明,PCSK9在肝臟上亞細(xì)胞群中的表達(dá)也各有不同,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、蛋白印記、亞細(xì)胞分離、免疫熒光等方法發(fā)現(xiàn)PCSK9-mRNA在肝癌FAO-1細(xì)胞系中表達(dá)最高,該類細(xì)胞中的低密度脂蛋白受體(LDL receptor,LDLR)表達(dá)也較高。而PCSK9的表達(dá)在產(chǎn)生載脂蛋白B(apolipoprotein B100,APOB)的細(xì)胞群中偏高,其次PCSK9在胎兒肝臟中的表達(dá)水平也具有較高水平,而PCSK9的表達(dá)受膽固醇水平的影響最大[7]。然而,至今,PCSK9作用于肝細(xì)胞表面導(dǎo)致LDLR降解的具體機(jī)制尚不完全明確。有關(guān)于人肝癌細(xì)胞來源的HepG2細(xì)胞的研究,提示淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體(APLP2)可能在介導(dǎo)PCSK9-LDLR復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體的過程中發(fā)揮重要的作用[8]。因此,目前有諸多PCSK9抑制劑在調(diào)節(jié)血脂代謝方面的研究,表面其能有效降低高膽固醇血癥的發(fā)生,可能成為高效的新一代降脂藥。

    1.2 PCSK9在神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)及功能

    PCSK9影響神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。PCSK9主要編碼神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化酶1(NARC-1)蛋白,而NARC-1可以直接影響到神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。有學(xué)者研究PCSK9在神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制,提示造成神經(jīng)細(xì)胞凋亡的主要因素與PCSK9對體內(nèi)載脂蛋白E受體水平的影響有關(guān),因此,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常小鼠相比,PCSK9基因敲除小鼠的顆粒神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率較低。此外,在其余器官組織中的研究表明,PCSK9并不僅僅影響神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,對于其他細(xì)胞的損傷凋亡亦有一定的作用。有關(guān)PCSK9在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)通路中的研究,提示PCSK9對RNA具有干擾作用,上調(diào)可使凋亡蛋白量增加,下調(diào)可使凋亡蛋白量減少,并造成內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷、凋亡[9]。

    PCSK9在神經(jīng)組織內(nèi)發(fā)揮的作用與肝臟不同。目前關(guān)于PCSK9在腦組織中的研究主要集中在體外實(shí)驗(yàn)或動(dòng)物試驗(yàn),在人體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)較少。在腦組織中PCSK9不同于肝臟,不與LDLR受體結(jié)合。在小鼠的發(fā)育期及成年期腦組織中,PCSK9與LDLR共同表達(dá),但是在PCSK9基因敲除的小鼠腦組織中,LDLR水平與未敲除PCSK9基因的野生型小鼠相似。由此說明,PCSK9基因?qū)π∈竽X組織中的LDLR影響極小。與肝臟的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用不同的是,PCSK9可以下調(diào)缺血性腦卒中小鼠的LDLR水平。小鼠小腦中多表達(dá)PCSK9、極低密度脂蛋白、載脂蛋白E受體,但僅有較少的LDLR,或者不表達(dá)LDLR。小鼠腦組織中PCSK9與極低密度脂蛋白、載脂蛋白E受體協(xié)同作用,調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育,中樞神經(jīng)系統(tǒng)PCSK9的作用底物不明確,但是范圍較為廣泛[10]。

    1.3 PCSK9在其他器官及組織的表達(dá)及功能

    大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,動(dòng)物機(jī)體腦組織中的PCSK9結(jié)合的細(xì)胞膜受體與肝臟的不同,因此表達(dá)作用不同。腦組織中PCSK9具有變化性,PCSK9的表達(dá)于胚胎時(shí)期具有短時(shí)間的高表達(dá)特點(diǎn)。胚胎時(shí)期在13.5天時(shí),端腦中PCSK9的表達(dá)最高,而小腦中PCSK9表達(dá)最高時(shí)期則是在胚胎時(shí)期的17.5天至出生后的19天。PCSK9基因敲除小鼠胰島中LDLR的表達(dá)明顯高于正常小鼠,前者不但出現(xiàn)葡萄糖不耐受、血糖增高的現(xiàn)象,而且其胰島形態(tài)發(fā)生異常,如:早期凋亡、出現(xiàn)炎癥、發(fā)生畸形等,這些現(xiàn)象可說明PCSK9對維持胰島正常功能具有重要意義[11]。

    2 PCSK9與氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)的關(guān)系

    PCSK9與血管炎癥之間存在著一定的聯(lián)系。大量研究表明,常見的心血管疾病,如:高血壓、高血脂、糖尿病等以及吸煙均可導(dǎo)致炎癥的發(fā)生,其中高血脂可使全身發(fā)生炎癥反應(yīng)。有研究人員通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),證實(shí)動(dòng)物常常食用脂肪含量較高的食物,可導(dǎo)致體內(nèi)IL-1、IL-6、TNF-α的表達(dá)增加[12-13],且明顯高于正常飲食的動(dòng)物。而PCSK9對肝細(xì)胞LDLR具有降解作用,同時(shí)可降低血漿中LDL清除率,導(dǎo)致血脂水平不斷升高,從而間接引發(fā)炎癥反應(yīng)[14]。

    Feingold等以小鼠為研究對象,試驗(yàn)中小鼠體內(nèi)注入內(nèi)毒素,以刺激炎癥反應(yīng)的發(fā)生,結(jié)果發(fā)現(xiàn) 小鼠體內(nèi)LDLR水平下降,而LDLR mRNA 水平未出現(xiàn)任何變化. 通過進(jìn)一步的檢測表明,當(dāng)小鼠體內(nèi)注入內(nèi)毒素后,其肝細(xì)胞內(nèi)PCSK9 mRNA的表達(dá)增加,且隨著時(shí)間的推移,其增加更明顯,毒素注入4 h增加2.5倍,注入時(shí)間達(dá)38 h增加12.5倍,而腎臟PCSK9 mRNA水平也發(fā)生了變化,增加了3倍[15]。常見可引起炎癥的物質(zhì)中,除了內(nèi)毒素,還有松節(jié)油、酵母聚糖等,這些物質(zhì)均對肝臟PCSK9的表達(dá)具有促進(jìn)作用[16-17]。

    在此基礎(chǔ)上,有研究通過比較基線水平及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的炎癥條件下的凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體1(Lectin-like ox-LDL receptor-1,LOX1)和PCSK9表達(dá)水平,其結(jié)果顯示,在LPS誘導(dǎo)的炎癥狀態(tài)下,在血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞上,PCSK9及LOX-1的表達(dá)較基線水平明顯增高,且呈LPS濃度依賴型,而平滑肌細(xì)胞增高的程度高于血管內(nèi)皮細(xì)胞。此外通過siRNA敲除的PCSK9細(xì)胞中,其LOX-1的功能和表達(dá)也有相應(yīng)下降,反之亦然。而LOX-1基因敲除的細(xì)胞也呈現(xiàn)出較低表達(dá)的PCSK9水平,反之亦然。由此可見,炎癥會(huì)增強(qiáng)LOX-1及PCSK9的表達(dá),而lOX-1及PCSK9之間也存在相互影響[18]。

    有研究表明[19],OX-LDL可促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的發(fā)生,而此時(shí)PCSK9的表達(dá)明顯增多,且相應(yīng)的腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1等炎癥因子分泌增多,后通過PCSK9干擾RNS使得PCSK9表達(dá)沉默后,降低了炎癥因子的合成及分泌,從而抑制了炎癥反應(yīng)。還有研究[20]提示PCSK9能降解抗炎、抗凋亡作用的ApoE受體2??梢?,炎癥反應(yīng)的發(fā)生與PCSK9具有一定的聯(lián)系,但炎癥反應(yīng)本身即是一個(gè)極其復(fù)雜的病理過程,其具體的作用機(jī)制還未完全地被闡明,受到了臨床研究者的關(guān)注,因此還需進(jìn)行更多的相關(guān)研究,以進(jìn)一步明確。

    2.4 PCSK9與心肌梗死

    心肌梗死屬于一種嚴(yán)重類型的冠狀動(dòng)脈疾病,其發(fā)病率較高且逐年增加,具有發(fā)病急、病情重、病死率高的特點(diǎn),嚴(yán)重威脅人類健康。關(guān)于心肌梗死候選基因研究的理論基礎(chǔ)確定為其部分基因由于編碼的蛋白質(zhì)增加,從而導(dǎo)致心肌梗死的發(fā)病[21]。研究表明心肌梗死患者體內(nèi)伴有SREBP-2活化現(xiàn)象,該轉(zhuǎn)錄因子于6 h、12 h時(shí)明顯上升,這一發(fā)現(xiàn)說明心肌梗死對SREBP-2的表達(dá)具有上調(diào)的作用;HNF1-α因子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)時(shí)間早于SREBP-2,而HNF1-α可調(diào)控PCSK9 mRNA的表達(dá);于12 h后,PCSK9水平變化主要來自SREBP-2的影響。上述現(xiàn)象說明,SREBP-2、HNF1-α二者均對PCSK9的表達(dá)具有調(diào)控作用,且前者發(fā)揮調(diào)控作用的時(shí)間[22]早于后者。

    近期由渥太華大學(xué)及埃默里大學(xué)發(fā)表的兩項(xiàng)回顧性研究(OHGS及EmCB研究)顯示,在OHGS研究中,共納入3273例符合條件的冠心病患者,其中1371例存在急性心?;蛐墓2∈罚?99例心梗病史,572例急性心肌梗死),心梗組中有94例(6.8%)(45例急性心梗及49例心梗病史)未行他汀治療。結(jié)果表明,45例未行他汀治療的急性心肌梗死患者組中血漿PCSK9水平(363.56±140 ng/mL)明顯高于398例無心梗相關(guān)冠心病組(302.06±91.3 ng/mL,p=0.004)。而在49例心梗病史患者組中,其PCSK9水平(315.96±107.5 ng/mL)與無心梗相關(guān)病史的冠心病組患者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.977)。而相同的研究結(jié)論在EmCB研究中也得以體現(xiàn)[23-24],可見,PCSK9水平在急性心梗病程中是有明顯升高的,但PCSK9水平升高是在急性心梗發(fā)生前抑或是作為心梗事件的結(jié)果目前尚無進(jìn)一步研究。

    到2003年,第三個(gè)高膽固醇血癥相關(guān)基因被發(fā)現(xiàn),即PCSK9。這就使得PCSK9與心肌梗死的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān),明確PCSK9在心肌梗死中的重要作用。后期關(guān)于PCSK9在心肌梗死發(fā)生發(fā)展中的大量研究,提示缺乏PCSK9能明顯延緩心肌梗死的發(fā)生,過量的PCSK9則加速心肌梗死的進(jìn)展。具體機(jī)制考慮為肝臟中的PCSK9參與膽固醇代謝,在肝細(xì)胞表面降解低密度脂蛋白受體,進(jìn)而減少其與LDL-C的結(jié)合,導(dǎo)致血液中LDL-C水平升高,誘發(fā)心肌梗死。而且PCSK9還可通過其他途徑促進(jìn)心肌梗死的發(fā)生,如與血管炎癥之間也存在著一定的聯(lián)系。尤其是抑制PCSK9的表達(dá)能明顯降低機(jī)體LDL-C水平,減少高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生,從而降低心肌梗死的發(fā)病率。因此,應(yīng)該結(jié)合近年來國內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道,提高對PCSK9的全面認(rèn)識,這對明確心肌梗死的發(fā)生機(jī)制,全新了解心肌梗死具有重要意義,為臨床治療開辟了一條新道路。

    3 結(jié) 語

    機(jī)體中膽固醇代謝的調(diào)節(jié)、肝臟再生、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞的凋亡均與PCSK9有關(guān),其對多種疾病的發(fā)病機(jī)制具有不同程度的影響。目前,人們認(rèn)為導(dǎo)致膽固醇代謝發(fā)生異常有三大因素,而PCSK9表達(dá)異常為其中之一。因此,探討、了解PCSK9的突變情況、分泌特點(diǎn)、所參與的生化代謝過程,對患心腦血管的風(fēng)險(xiǎn),其嚴(yán)重程度以及引發(fā)膽固醇代謝發(fā)生異常的因素的評估具有重要意義。研究并制備抑制PCSK9藥物可能成為今后預(yù)防、治療高血脂、高膽固醇、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的主要方向,以此提高檢測及治療的成功率。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 李文龍,裴衛(wèi)東.人類枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶9基因影響膽固醇代謝的研究進(jìn)展[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,28(6):629-632.

    [2] Kosenko T,Golder M,Leblond G,et al.Low density lipoproteinbinds to proprotein convertase subtilisin/kexin type-9(PCSK9) in human plasma and inhibits PCSK9-mediated low density lipoprotein re-ceptor degradation[J].J Biol Chem,2013,288(12):8279-8288.

    [3] Desai,N.R,Giugliano,R.P,Zhou,J.et al.AMG 145,a monoclonal antibody against PCSK9,facilitates achievement of national cholesterol education program-adult treatment panel III low-density lipoprotein cholesterol goals among high-risk patients: An analysis from the LAPLACE-TIMI 57 trial(LDL-C assessment with PCSK9 monoclonaL antibody inhibition combined with statin thErapy-thrombolysis in myocardial infarction 57)[J].Journal of the American College of Cardiology,2014,63(5):430-433.

    [4] Luna Saavedra YG,Zhang J,Seidah NG. PCSK9 prosegment chimera as novel inhibitors of LDLR degradation[J].PLoS One,2013,8(8):113.

    [5] Seidah N G,Benjannet S,Wickham L,et a1.The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1(NARC-1):liver regeneration and neuronal differentiation[J].Proe Natl Acad Sci U S A,2003,100(3):928-933.

    [6] Zaid A,Roubtsova A,Essalmani R,et a1.Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(PCSK9):hepatocyte-specific low-density lipoprotein receptor degradation and critical role in mouse liver regeneration[J].Hepatology,2008,48(2):646-654.

    [7] Grozdanov PN,Petkov PM,Karagyozov LK,Dabeva MD.Expression and localization of PCSK9 in rat hepatic cells.Biochem Cell Biol.2006 Feb,84(1):80-92.

    [8] Butkinaree C,Canuel M,Essalmani R,et a1.Amyloid precursor-like protein 2 and sortilin do not regulate the PCSK9 convertase-mediated low density lipoprotein receptor degradation but interact with each other[J].Biol Chem,2015,17:180.

    [9] Poirier S,Prat A,Marcinkiewicz E,et a1.Implication of the proprotein convertase NARC-1/PCSK9 in the development of the nervous system[J].Neurochem,2006,98(3):838.

    [10] Lambert G,Charlton F,Rye K A,et al. Molecular basis of PCSK9 function[J].Atherosclerosis,2009,203(1):1-7.

    [11] Fattori E,Cappelletti M,Lo Surdo P,et al.Immunization against pro-protein convertase subtilisin-like/kexin type 9 lowers plasma LDL-Cholesterol levels in mice [J].J Lipid Res,2012,53(8):1654-1661.

    [12] 張亞軍,王 茹,P.R.Mabounda Kounga等.不同濃度低氧暴露對慢性疲勞綜合征建模小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β水平的影響[J].中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志,2013,32(6):507-513.

    [13] 侍 陽,宋慶偉,于生才,等.肝癌模型大鼠肝硬化期IL-1β、IL-6、TNF-α的水平變化及作用機(jī)制[J].中國老年學(xué)雜志,2013,33(22):5663-5665.

    [14] Grozdanov PN,Petkov PM, Karagyozov LK, et al.Expression and localization of PCSK9 in rat hepatic cells[J].Biochem Cell Biol,2006,84(1):80-92.

    [15] Feingold K R,Moser A H,Shigenaga J K,et al.Inflammationstimulates the expression of PCSK9[J].Biochem Biophys ResCommun,2008,374(2):341-344.

    [16] Feingold K R,Moser A H,Shigenaga J K,et al.Inflammationstimulates the expression of PCSK9[J].Biochem Biophys ResCommun,2008,374(2):341-344.

    [17] 劉錄山,謝 閔,姜志勝,等.pcsk9 siRNA 對oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡的影響.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展[J],2009,36(3):323-330.

    [18] Ding Z,Liu S,Wang X,Deng X,F(xiàn)an Y,Shahanawaz J,Shmookler Reis RJ,Varughese KI,Sawamura T,Mehta JL.Cross-talk between LOX-1 and PCSK9 in vascular tissues[J].Cardiovasc Res,2015,19.

    [19] Cohen J,Pertsemlidis A,Kotowski IK,et al.Low LDL cholesterol in individuals of African descent resulting from frequent nonsense mutationsin PCSK9.Nat Genet,2005,37:161-165.

    [20] 郭 雯,付真真,崔 琴,等.前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9在絕經(jīng)前后女性中的差異[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2013,29(1):46-49.

    [21] 劉 俊.急性心肌梗死及短期應(yīng)用降脂藥對PCSK9的影響[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2013.

    [22] Zhang Y, Liu J, Li S,et al.Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 expression is transiently up-regulated in the acute period of myocardial infarction in rat[J].BMC Cardiovasc Disord,2014,17(14):192.

    [23] Stewart AFR,Dandona S,Chen L,et al.(2009) Kinesin family member 6 variant Trp719Arg does not associate with angiographically defined coronary artery disease in the Ottawa Heart Genomics Study[J].J Am Coll Cardiol,2014,53:1471-1472.

    [24] Chan K,Patel RS,Newcombe P,et al.(2013)Association between the chromosome 9p21 locus and angiographic coronary artery disease burden:a collaborative meta-analysis[J].Am Coll Cardiol,2014,61:957-970.

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