哈爾濱市主栽花楸果實主成分測定分析

張妍妍　李靜　盧慧穎等

摘要 [目的] 對哈爾濱市主栽花楸果實主成分進(jìn)行測定分析。[方法]以哈爾濱市主栽的5個花楸種源的花楸果實作為研究材料，對它們進(jìn)行了可溶性糖、總黃酮、蘆丁等次生代謝產(chǎn)物含量的測定。[結(jié)果]5個花楸種源中的歐洲花楸US05果實中可溶性總糖、總黃酮和蘆丁含量均顯著高于其他種源，分別達(dá)到6.389%、1.564 1%和6.986 744 μg/ml。[結(jié)論]篩選出歐洲花楸US05為適于哈爾濱地區(qū)栽培的藥用花楸種源。

關(guān)鍵詞 花楸果實；可溶性糖；總黃酮；蘆丁；測定分析

中圖分類號 S722.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）20-204-02

Abstract [Objective] The composition of the main planting Sorbus pohuashanesis fruit in Harbin was determined and analyzed. [Method] Choosing five provenances of Sorbus pohuashanesis fruit which main cultivated in Harbin as material，their secondary metabolites such as soluble sugar， total flavonoids， rutin were determined .[Result]The results showed that content of secondary metabolites such as soluble sugar， total flavonoids of Sorbus aucuparia L. US05 fruit have reached a significant level between these provenances， respectively reached 6.389%， 1.564 1%， 6.986 744 μg/ml. [Conclusion]Sorbus aucuparia L. US05 could thus be screened filter out the provenance of medicinal plant which was suitable for cultivation in Harbin.

Key words Fruit of Sorbus pohuashanesis； Soluble sugar； Total flavonoids； Rutin； Determination and analysis

花楸（Sorbus spp.）為薔薇科花楸屬落葉小喬木，該樹種春季觀葉、夏季觀花、秋冬觀果，是城市園林綠化的優(yōu)良樹種；同時該樹種具有結(jié)果早、產(chǎn)量高、適應(yīng)性強(qiáng)，且富含黃酮類等化合物的特點(diǎn)，是一個集園林綠化、食用、藥用等價值于一身的珍貴灌木漿果樹種[1-2]。黃酮類化合物對人類健康有重要作用，其對體內(nèi)自由基有明顯的清除作用，并可抑制細(xì)胞的調(diào)亡，是治療心血管疾病藥物的主要成分，由于黃酮類化合物具有廣譜的藥理活性和較低毒性，是目前人們比較關(guān)注的一類化合物，已成為國內(nèi)外天然藥物開發(fā)利用研究的熱點(diǎn)[3]。該研究通過對哈爾濱市主要栽植的5個花楸種源的花楸果實進(jìn)行主要成分分析，定向篩選適于哈爾濱地區(qū)栽培的藥用花楸種源。

1 材料與方法

1.1 供試材料及試驗地概況

供試材料為目前作為哈爾濱市城市綠化樹種進(jìn)行栽植的，選自高寒地區(qū)的5個種源的花楸植株，樹木年齡均為3年，具體的種源地見表1。

試驗地位于哈爾濱市松北區(qū)哈爾濱市林業(yè)科學(xué)院院內(nèi)，地理坐標(biāo)為125°42′～130°10′E，44°04′～46°40′N，海拔146 m。地勢平坦，土層深厚，特別是含有豐富的礦質(zhì)元素及有機(jī)質(zhì)，土壤類型為黑鈣土，土壤pH為6.6。氣候類型為溫帶半濕潤季風(fēng)性氣候，夏季炎熱多雨，冬季則嚴(yán)寒漫長，結(jié)冰期達(dá)5個月。當(dāng)?shù)啬昶骄鶜鉁卦?.6 ℃，最低月平均氣溫達(dá)-19.4 ℃（1月），最高月平均氣溫為22.9 ℃（7月），年平均降雨量為523 mm，相對濕度為78%，≥10 ℃年積溫2 700 ℃，無霜期是135 d，最深凍土層達(dá)1.8 m。

1.2 試驗方法

1.2.1 花楸果實可溶性糖的測定。

（1）試劑配制。100 μg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：取100 mg分析純無水葡萄糖，精密稱量，用蒸餾水溶解后定容至100 ml，使用時再稀釋10倍，即獲得100 μg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

蒽酮試劑配制：稱取1.0 g蒽酮，用80%濃硫酸溶解后定容至1 000 ml。

（2）樣品提取。稱取剪碎混勻的新鮮果實各1.0 g，放入大試管中，加入15 ml蒸餾水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷卻，過濾入100 ml容量瓶中，用蒸餾水沖洗殘渣數(shù)次，定容至刻度。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。取6支大試管，從0～5分別編號，按表2 加入各試劑。

將各管快速混勻后，置于沸水浴中10 min ，取出后冷卻，在 620 nm 波長下，用空白調(diào)零測定光密度，縱坐標(biāo)為光密度，橫坐標(biāo)為葡萄糖量（μg）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。

（4）樣品測定。取待測樣品提取液1.0 ml加蒽酮試劑 5 ml，同以上操作顯色測定光密度，重復(fù)3次。

（5）結(jié)果計算?？扇苄蕴呛?C×VT×稀釋倍數(shù)V1×W×106×100%

式中：C為從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖量（μg）；VT為樣品提取液總體積（ml）；V1為顯色時取樣品液量（ml）；W為樣品重（g）。

1.2.2 比色法對花楸果實總黃酮提取及其含量測定。

（1）對照品溶液的制備。取120 ℃的常壓干燥蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 0.020 0 g，精密稱量，用 30%的熱乙醇溶解，并移至 100 ml的容量瓶中，定容，制備成0.200 mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）樣品的提取。

準(zhǔn)確稱取供試花楸果實鮮樣各1 g，用70%的乙醇在超聲波中提取30 min，趁熱過濾。再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮提取液，直到所得的提取液近干為止，用 30%的乙醇溶解并移至 100 ml容量瓶中，定容，為所得的總黃酮提取液，然后從中各取出 1 ml，用30%的乙醇稀釋到 25 ml的容量瓶中，最后從中各取出1 ml用于分光光度計的測定，測定方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

準(zhǔn)確量取 0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml對照品溶液，置于 25 ml的容量瓶中，首先用 30%的乙醇將其稀釋至12.5 ml，各加 5%亞硝酸鈉 0.7 ml，搖勻，放置5 min。然后加入0.7 ml 的10%硝酸鋁，搖勻后放置6 min。最后再加入10 ml 的1 mol/L的氫氧化鈉溶液，用 30%乙醇定容至刻度，搖勻后放置10 min，在波長 510 nm 處測定吸收度，以吸收度對濃度進(jìn)行回歸，其結(jié)果用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度Y與吸光度A 的關(guān)系為 Y（g/L）=0.647 0A+0.015 6（r=0.995 5）?？傸S酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

（4）樣品總黃酮含量的計算公式。

總黃酮含量=[（Y×100×25×25）/（1×1 000）] ×100%

式中：Y為根據(jù)所測定的溶液的吸光度值，用回歸方程計算相對應(yīng)的總黃酮類化合物的物質(zhì)含量。

1.2.3 高效液相法對花楸果實蘆丁定量測定。

（1）色譜條件。

Kromasil C18（4.6 mm×250 mm）色譜柱，流動相為甲醇∶0.4%磷酸（60∶40），柱溫為室溫，流速為 0.7 ml/min，檢測波長為 368 nm。

（2）紫外波長的選擇。對照品進(jìn)行紫外波長的掃描，其在 368 nm 處有最大吸收峰，所以選取的波長為 368 nm。

（3）對照品溶液的制備。

精密稱量對照品蘆丁 2.0 mg，定容在 10 ml 的容量瓶中，制備成0.20 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（4）供試品溶液的制備。

精密稱量供試花楸果實鮮樣各1.0 g，加入石油醚 100 ml進(jìn)行索氏提取，目的是除去脂溶性色素的干擾，提取后放涼，再加入100 ml 的70%甲醇溶液，水浴提取 3 h，之后趁熱過濾，所得的提取液用70%甲醇定容至 100 ml，快速冷卻，過膜（0.45 μm 微孔濾膜），即得供試品溶液。

（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。

準(zhǔn)確吸取對照品溶液 0.10、0.20、0.30、0.60、1.0 μg。按上述的色譜條件測定，其中橫坐標(biāo)為進(jìn)樣量，縱坐標(biāo)為峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3），回歸方程為Y=48.206C+15.347（r=0.998 5）。試驗結(jié)果見表3。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

所得數(shù)據(jù)采用Excel軟件和SPSS13.0分析軟件進(jìn)行方差分析及多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 可溶性總糖測定結(jié)果

可溶性總糖測定結(jié)果表明，歐洲花楸US-05可溶性糖含量最高，為6.389%，即每100 g歐洲花楸果實中含有6.389 g的可溶性糖。百花花楸3號可溶性糖含量最低，每100 g果實中僅含有2.167 g的可溶性糖，顯著低于其他4個花楸種源（BH1 6.022%，BH2 5.431%，BH4 5.329%）。由此，篩選出果實可溶性糖含量最高的種源為歐洲花楸US-05。

2.2 總黃酮含量測定結(jié)果

供試花楸果實總黃酮含量測定結(jié)果見表4，可以看出，歐洲花楸US-05的總黃酮含量最高，為1.564 1%，顯著高于其他4個種源，比總黃酮含量最低的百花花楸3號多出1.298 3個百分點(diǎn)。因此，篩選出果實總黃酮含量最高的種源為歐洲花楸US05。

2.3 蘆丁含量測定結(jié)果

供試花楸果實蘆丁含量測定結(jié)果見表5，可以看出，歐洲花楸US-05的蘆丁含量最高，為6.986 744 μg/ml，顯著高于其他4個種源，蘆丁含量最低的是百花花楸4號，為1.993 590 μg/ml。因此，篩選出蘆丁含量最高的為歐洲花楸US-05果實。

3 小結(jié)

對花楸果實可溶性糖、總黃酮和蘆丁3種次生代謝產(chǎn)物含量進(jìn)行了測定，結(jié)果表明：歐洲花楸US-05可溶性總糖、總黃酮和蘆丁含量均顯著高于其他種源，分別達(dá)到6.389%、1.564 1%和6.986 744 μg/ml；百花花楸3號，可溶性總糖含量和總黃酮含量均顯著低于其他種源，為2.167%和0.265 8%，篩選出歐洲花楸US-05為黃酮類物質(zhì)最佳提取種質(zhì)種源，最適于哈爾濱地區(qū)栽培的藥用花楸種源。

參考文獻(xiàn)

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