高效液相色譜法同時測定橙味飲料中的多種類添加劑

李必全 高靜 易志堅 柴勇 張雪梅

摘 要 利用高效液相色譜儀建立分析橙味飲料中多種類水溶性食品添加劑的檢測方法。色譜條件為：X-bringe C18柱（250×4.6 mm，2.5 μm）。流動相：甲醇-0.02 mol/L乙酸銨水溶液，柱溫：25℃，流速1.0 mL/min，進樣量：10 μL，檢測器：紫外檢測器，檢測波長：254 nm。在優(yōu)化的條件下對橙味飲料中的防腐劑、色素、甜味劑等多種類添加劑進行分離檢測，分析時間22 min。各組分分離完全，測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達到0.999，回收率78%～98%。結(jié)論：該方法簡單、靈敏、重現(xiàn)性好，適用于常見橙味飲料中多種色素等添加劑的質(zhì)量檢測。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜；橙味飲料；添加劑；檢測方法

中圖分類號：O657.7+2 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）28-055-03

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20151110.1015.044.html 網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015/11/10 10：15：00

為了增加食品的外觀和口感，食品中往往添加一些合成食品色素。在橙味飲料生產(chǎn)過程中，亦會用濃縮橙汁添加維生素C、甜味劑糖精鈉、防腐劑山梨酸鉀和苯甲酸鈉以及日落黃、檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅等色素。這些物質(zhì)多含氮（N=N）官能團及芳香環(huán)結(jié)構(gòu)，而某些物質(zhì)的降解產(chǎn)物甚至比初始物質(zhì)本身的毒性更大，人工色素的肆意添加對人體健康極為有害[1-2]。因此，對橙味飲料中的添加劑進行監(jiān)測極有必要。目前，對食品、飲料中添加劑含量的分析測定多采用高效液相色譜儀 [3-5]，但涉及多種類的報道較少。本研究探討了橙汁中的多種類添加劑成分含量測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

Waters 2695系統(tǒng)高效液相色譜儀，empower色譜工作站，UV檢測器；Sunfire C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm，美國waters公司）。

1.2 試藥

維生素C（購自中國藥品生物制品檢定所）、糖精鈉、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、檸檬黃、胭脂紅、日落黃（國家標(biāo)準物質(zhì)研究中心）標(biāo)準物質(zhì)；0.02 mol/L乙酸銨水溶液（優(yōu)級純），甲醇（色譜純），水為超純水。

1.3 色譜條件

用流動相初始比例配制單個標(biāo)準溶液，對其進行波長掃描，選擇各組分都有較高吸收時的254 nm處作為測定波長，以混合標(biāo)準溶液優(yōu)化色譜條件最終確定如下色譜條件。

色譜柱：C18柱250×4.6 mm，2.5 μm。流動相：甲醇、0.02 mol/L乙酸銨水溶液；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；線性梯度洗脫：0～5 min，5%～35%的甲醇和95%～65%的0.02 mol/L乙酸銨水溶液；5～12 min，35%～98%甲醇和65%～2%的乙酸銨水溶液，平衡10 min。進樣量：10 μL；檢測器：紫外檢測器，波長254 nm。優(yōu)化后色譜條件的色譜圖見圖1。

1.4 樣品前處理

重慶市場購買的橙汁飲料（重慶百事天府飲料有限公司制造的美年達橙味汽水），取樣品5.0 g（精確至0.01 g），裝入25 mL的離心管中離心，如仍呈渾濁狀，加入適量聚酰胺進行吸附后再離心。取上清液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，待用。

1.5 對照品溶液的制備

分別稱取維生素C、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、糖精鈉、檸檬黃、日落黃、胭脂紅標(biāo)準物質(zhì)適量，用流動相初始比例配制成50 mg/L的混合標(biāo)準儲備溶液。

2 方法學(xué)考察

2.1 標(biāo)準曲線的確定

將本文“1.5”節(jié)的標(biāo)準儲備液分別稀釋0， 1， 2， 5， 10， 20倍，高效液相分析。在 2.5～50 mg/L濃度范圍內(nèi)，以標(biāo)準溶液的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，其相應(yīng)的色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線。結(jié)果顯示，各組分濃度均與其各自對應(yīng)的峰面積線性關(guān)系良好（R2 >0.999），各種合成色素的線性方程相關(guān)系數(shù)和各組分的檢出限參考值[6-8]（R，S/N=3）見表1、表2。

2.2 方法的穩(wěn)定性實驗

以10 mg/L濃度的混合標(biāo)準溶液進行6次日內(nèi)和5次日間測定，分別對7種添加劑標(biāo)準物質(zhì)作定性（保留時間）定量（峰面積）統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：7種添加劑保留時間的日內(nèi)RSD（相對標(biāo)準偏差）為0.8%，日間RSD為1.2%；峰面積的日內(nèi)RSD為1.0%，日間RSD為1.4%，顯示該儀器方法的定性定量穩(wěn)定性能滿足分析要求。

2.3 精密度實驗

以10 mg/L的濃度混合標(biāo)準溶液連續(xù)進樣6次，得到峰面積的RSD值為1.2%，表明儀器精密度良好。

2.4 回收率實驗

稱取橙汁飲料樣品10 g，加入50.0 mg/L混合標(biāo)樣2.0 mL，渦旋混勻，加入乙酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH，用流動相初始比例定容至20.0 mL，用0.2 μm的微孔濾膜過濾，進行液相色譜分析。計算各組分的平均回收率，其回收率均在78.0%～98.2%，符合相關(guān)標(biāo)準檢測方法70%～120%標(biāo)準的要求，結(jié)果見表1。

2.5 定性分析

將標(biāo)樣配成含量已知的初始流動相溶液，用以上色譜條件進行檢測得到圖1，再將飲料樣品在此色譜條件下分析，得到圖2。比較標(biāo)準樣品及飲料樣品的色譜圖及樣品的峰的相對保留時間值，對樣品相對保留時間相同的色譜峰進行定性鑒定。標(biāo)準樣品出峰順序依次為：維生素C、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、糖精鈉、檸檬黃、日落黃、胭脂紅。

2.6 定量分析

在相同的色譜條件下，將樣品待測液分別進行色譜分析（見圖2）。根據(jù)液相色譜中峰面積與樣品中標(biāo)準物質(zhì)的含量關(guān)系進行線性回歸，通過計算相關(guān)系數(shù)，檢出樣品中物質(zhì)的含量。

3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明，本方法縮短了檢測周期，提高了工作效率，降低了測試成本。經(jīng)過對實際樣品的測試，證實方法行之有效，可用于橙味飲料中的維生素C、糖精鈉、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、檸檬黃、日落黃、胭脂紅等主要添加劑同時進行檢測。本方法可靠，成本低，具有快速分離組分多、分析效率高的優(yōu)點，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻：

[1] Francisca Ivani de Andrade， Maria Izabel Florindo Guedes， ?caro Gusm?o Pinto Vieira， et al. Determination of synthetic food dyes in commercial soft drinks by TLC and ion-pair HPLC[J]. Food Chemistry， 2014，157：193.

[2] Fabio Gosetti， Ugo Chi μminatto， Eleonora Mazzucco， et al. Ultra-high-performance liquid chromatography/tandem high-resolution mass spectrometry analysis of sixteen red beverages containing carminic acid： Identi?cation of degradation products by using principal component analysis[J]. Discriminant Analysis， 2015，167：454.

[3] 邵亮亮，李紅艷，陳萬勤，等.反相高效液相色譜法同時測定果蔬汁飲料中的11種酚酸化合物[J].分析試驗室，2013，32（11）：75-79.

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[6] GB/T 5009.35-1996.食品中色素的測定[S].

[7] GB/T 23495-2009.食品中苯甲酸鈉、山梨酸鉀、糖精鈉的測定[S].

[8] GB 2760-2011.食品中添加劑含量限量規(guī)定[S].

（責(zé)任編輯：丁志祥）