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    發(fā)酵型海帶酒的研制及其抗氧化性的研究

    2015-10-21 17:09:26陳美齡金芳園鄧尚貴
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年34期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵酒抗氧化性海帶

    陳美齡 金芳園 鄧尚貴

    摘要[目的]研制發(fā)酵型海帶酒,提高海帶的綜合利用率。[方法] 以海帶提取液為研究對(duì)象,用3種發(fā)酵劑及其兩兩混合對(duì)海帶提取液進(jìn)行發(fā)酵制酒,采用定量描述分析(QDA)對(duì)海帶酒進(jìn)行感官評(píng)定,篩選出最優(yōu)發(fā)酵劑,然后通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)海帶提取液工藝進(jìn)行優(yōu)化,最后測(cè)定發(fā)酵酒的抗氧化性。[結(jié)果]試驗(yàn)表明,海帶本身攜帶的自然菌群對(duì)發(fā)酵酒的品質(zhì)沒(méi)有顯著的影響;最佳發(fā)酵劑為混合菌(安琪提供的釀酒曲和葡萄酒果酒專用酵母SY)。海帶提取液的最佳工藝參數(shù)為提取溫度90 ℃、浸泡時(shí)間3 h、料液比1∶20 g/ml。6種不同的菌種后發(fā)酵25 d的發(fā)酵酒的抗氧化性都較高。[結(jié)論] 研究可提高海帶的附加值,為海帶資源的開發(fā)利用開辟新的途徑。

    關(guān)鍵詞海帶;發(fā)酵酒;酵母菌;抗氧化性

    中圖分類號(hào)S986.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611(2015)34-078-03

    海帶作為一種天然傳統(tǒng)食品,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高。海帶中的碳水化合物含量高于普通蔬菜好幾倍,其中的海帶多糖含量較高,目前己發(fā)現(xiàn)褐藻糖膠、褐藻淀粉及巖藻聚糖硫酸酯3種多糖。海帶中纖維、蛋白含量也很高,且必需氨基酸的模式符合聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)標(biāo)準(zhǔn)模式。海帶同時(shí)也含有豐富的礦物質(zhì)和維生素,且脂肪酸為不飽和脂肪酸居多。

    海帶不僅有著豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而且藥用價(jià)值也較高。近年來(lái),海藻中的次生代謝物質(zhì),如萜類、甾醇類、大環(huán)內(nèi)酯類和酚類等已成為研究的熱點(diǎn),特別是多酚類物質(zhì)因其所具有的抗氧化特性而備受矚目[1-3]。最近幾年,科學(xué)家們研究發(fā)現(xiàn),對(duì)于癌癥的治療和預(yù)防,海帶也有著重要的作用[4]。

    但我國(guó)對(duì)海帶資源的開發(fā)利用還非常有限。海帶酒是海帶的一種深加工產(chǎn)品,可提高海帶的附加值,為海帶資源的利用開辟新途徑。海帶發(fā)酵酒的研究已有少數(shù)中文報(bào)道,外文還未見報(bào)道。劉秀河等報(bào)道了海帶汁的提取、酶解、酸解條件及發(fā)酵的最佳工藝研究[5];王克明報(bào)道了多元混菌固定化發(fā)酵海藻保健酒的制備工藝優(yōu)化的研究[6];田寶蘭報(bào)道了海帶酒制作工藝、海帶酒在發(fā)酵過(guò)程中功能性成分含量的變化及海帶酒的澄清及穩(wěn)定性的研究[7]。

    筆者以海帶提取液為研究對(duì)象,用3種發(fā)酵劑及其兩兩混合對(duì)海帶提取液進(jìn)行發(fā)酵制酒,并對(duì)不同菌種發(fā)酵的海帶酒進(jìn)行抗氧化性的初步研究。

    1材料與方法

    1.1材料

    海帶干貨和蔗糖,浙江舟山華之友超市提供,陰涼干燥處保存;

    由安琪酵母股份有限公司提供的發(fā)酵菌,

    ①釀酒曲配料為:酵母、根霉α淀粉酶、葡糖淀粉酶、植物酶;

    ②甜酒曲配料為:根霉菌、米粉;

    ③葡萄酒果酒專用酵母SY 配料為:酵母、乳化劑;

    其他化學(xué)試劑均為分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    主要儀器:

    HH4型電熱恒溫水浴鍋,常州國(guó)華電器有限公司;

    BS110S電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;

    UV2800紫外可見分光光度計(jì),尤尼柯(上海)儀器有限公司;

    LD2X40BI型立式電熱壓力蒸汽滅菌器,上海申安醫(yī)療器械廠;

    HWS270恒溫恒濕培養(yǎng)箱,寧波東北儀器有限公司;

    UPKII60L超純水機(jī),成都優(yōu)普超純科技有限公司。

    1.2方法

    1.2.1海帶酒的發(fā)酵制備。

    發(fā)酵菌株是發(fā)酵酒釀造的重要因素,對(duì)酒的感官特性有很大的影響。因此,選擇優(yōu)良的發(fā)酵劑是海帶酒發(fā)酵的重要環(huán)節(jié)。海帶本身攜帶的自然菌群也會(huì)參與發(fā)酵過(guò)程,為了考察海帶本身攜帶的自然菌群對(duì)海帶發(fā)酵酒的影響,該試驗(yàn)分別以滅菌后的海帶提取液和不滅菌的海帶提取液為原料,接種6種發(fā)酵劑進(jìn)行海帶酒的制備,并對(duì)其成品海帶酒進(jìn)行感官評(píng)定,分析海帶本身攜帶的自然菌群對(duì)海帶酒的影響,并篩選出最優(yōu)的發(fā)酵劑。

    1.2.1.1海帶提取液的制備。干制海帶→剪碎→不徹底清洗(干制海帶表面的白色附著物的有效成分為甘露醇,徹底清洗后會(huì)使其流失)→加水浸泡(1∶25 g/ml)→搗碎機(jī)再次搗碎→加水至1 000 ml→90 ℃水浴鍋水浴4 h(期間要不斷攪拌)。

    1.2.1.2發(fā)酵。將200 ml海帶提取液倒入250 ml的錐形瓶中,在高壓滅菌鍋中121 ℃,20 min滅菌,冷卻到室溫后分別接種6組發(fā)酵劑,每組3個(gè)平行,依次為果酒曲、甜酒曲、釀酒曲、甜酒曲和釀酒曲的混合菌種、果酒曲和釀酒曲的混合菌種、甜酒曲和果酒曲的混和菌種,然后依次加入5%的蔗糖提供外源碳源,放置于 37 ℃的生化培養(yǎng)箱中進(jìn)行主發(fā)酵。主發(fā)酵5 d結(jié)束后放置于4 ℃冰箱進(jìn)行后發(fā)酵。此次試驗(yàn)后發(fā)酵15 d后對(duì)其進(jìn)行感官評(píng)定(將3個(gè)平行組同時(shí)倒入一個(gè)容器中,混勻)。用不滅菌的海帶提取液為原料進(jìn)行相同的操作。

    1.2.2感官評(píng)定試驗(yàn)方法。

    1.2.2.1感官評(píng)定方法。

    由經(jīng)過(guò)感官品評(píng)訓(xùn)練的12名品評(píng)員組成評(píng)定小組,對(duì)海帶發(fā)酵酒的感官特性指標(biāo)逐項(xiàng)進(jìn)行打分。全部品評(píng)員評(píng)價(jià)結(jié)束后,收集每個(gè)品評(píng)員的評(píng)價(jià)結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,采用QDA圖表示[8]。

    1.2.2.2評(píng)分標(biāo)尺的建立。

    數(shù)字標(biāo)尺可以在感官檢驗(yàn)中量化品評(píng)結(jié)果,包括運(yùn)用在感官、態(tài)度、喜好性等感官評(píng)價(jià)中。該試驗(yàn)采用9點(diǎn)的數(shù)字標(biāo)度為評(píng)分標(biāo)尺,由1、2、3、4、5、6、7、8、9這9個(gè)數(shù)字把感官特性的強(qiáng)度由弱到強(qiáng)劃分,以此建立海帶發(fā)酵酒的感官分析評(píng)分尺度表。

    1.2.2.3描述詞匯表的建立。

    感官品評(píng)員對(duì)各自的海帶酒樣品進(jìn)行品評(píng),然后記錄并討論出能反映海帶發(fā)酵酒產(chǎn)品的色澤、澄清度、酒味、海帶味、甜味、風(fēng)格感官特性的6個(gè)詞匯作為定量描述分析法的描述詞匯,并給出詞匯的定義。其中第6個(gè)詞匯的品評(píng)結(jié)果很大程度上受到前5個(gè)詞匯結(jié)果的影響。

    1.2.3海帶提取液參數(shù)優(yōu)化正交試驗(yàn)。

    海帶提取液是影響海帶發(fā)酵酒品質(zhì)的一個(gè)關(guān)鍵因素,故在這個(gè)試驗(yàn)中主要是對(duì)海帶提取液的工藝參數(shù)的優(yōu)化。

    正交試驗(yàn):在選出最佳發(fā)酵劑的前提下,優(yōu)化原料海帶提取液的提取工藝參數(shù),以感官評(píng)定的結(jié)果為指標(biāo),確定最佳料液比、浸提時(shí)間及水浴溫度。其因素與水平見表1。

    表1海帶提取液提取的因素與水平

    水平因素浸提溫度(A)∥℃浸提時(shí)間(B)∥h料液比(C)∥g/ml

    15011∶20

    27031∶25

    39051∶30

    1.2.4海帶酒抗氧化性的測(cè)定。

    1.2.4.1清除 DPPH 自由基的能力測(cè)定[9]。

    稱取海帶提取液 1 ml及1×10-4 mol/L DPPH 溶液1 ml 加入同一試管中搖勻后,在室溫下密閉靜置30 min,對(duì)照組1為1 ml 95%的乙醇和1 ml的樣品,對(duì)照組2為1 ml的蒸餾水和1 ml的DPPH,其他步驟一樣。于 535 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。依次記為A1、A2、A3 。調(diào)零組為95%的乙醇,根據(jù)下列公式計(jì)算每種提取液對(duì) DPPH 自由基的清除率。

    清除率=[A3-(A1-A2 )/A3]×100%

    1.2.4.2清除羥自由基的能力測(cè)定[9]。

    取濃度為 0.75 mmol/L 鄰二氮菲溶液 1 ml于試管中,依次加入 0.20 mol/L 磷酸緩沖液(pH 7.4)2 ml、蒸餾水1 ml,混合均勻,加入濃度為 0.75 mmol/L 的 硫酸亞鐵溶液1 ml,混勻,加入1 ml的0.12%的 H2O2,37 ℃水浴 90 min,于波長(zhǎng)536 nm 處測(cè)其吸光度Ap;其余條件相同,用 1 ml 蒸餾水代替 1 ml H2O2 為Ab ;用樣品溶液代替1 ml 的蒸餾水為As。

    樣品對(duì)羥自由基清除率=(As-Ap )/(Ab-Ap )×100%

    1.2.4.3超氧陰離子自由基體系[10]。

    取pH 8.2的TrisHCl緩沖液5 ml,分別加入0.25 ml 試樣和0.10 ml 鄰苯三酚溶液,混勻后于25 ℃水浴中反應(yīng)15 min,后使用1 cm的比色皿,以蒸餾水做空白對(duì)照,在波長(zhǎng)320 nm處時(shí)測(cè)吸光度Ai,并測(cè)定本底扣除水解自身的干擾,計(jì)算清除率。

    清除率的計(jì)算公式:

    超氧陰離子自由基清除率(% )=A0[(Ai-Aj)/A0]×100%

    式中,A0 為空白的平均吸光度,Ai為試樣的吸光度值,Aj為樣液本底的吸光度值。

    2結(jié)果與分析

    2.1海帶本身攜帶的自然菌群對(duì)發(fā)酵的影響及菌種的優(yōu)選

    以滅菌后的海帶提取液為原料,接種6種發(fā)酵劑制備海帶酒,對(duì)這6種海帶酒進(jìn)行感官評(píng)定,其感官評(píng)定QDA圖如圖1、2所示。

    注:圖中的釀+果=釀酒曲+果酒曲;釀+甜=釀酒曲+甜酒曲;果+甜=果酒曲+甜酒曲。

    圖1不同菌種發(fā)酵的海帶酒(滅菌)感官特性QDA圖

    注:圖中的釀+果=釀酒曲+果酒曲;釀+甜=釀酒曲+甜酒曲;果+甜=果酒曲+甜酒曲。

    圖2不同菌種發(fā)酵的海帶酒(不滅菌)感官特性QDA圖

    由圖1和圖2可以看出,海帶提取液滅菌與不滅菌最后發(fā)酵得到的海帶酒的澄清度是有明顯差距的,而其他感官指標(biāo)都是比較相近的,總體的風(fēng)味相差較小,可知海帶本身攜帶的菌種對(duì)試驗(yàn)沒(méi)有明顯的影響,因此后續(xù)試驗(yàn)均以不滅菌的海帶提取液為原料進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)。試驗(yàn)總體平均值都在4~7,說(shuō)明各感官評(píng)定最后的評(píng)分結(jié)果都不是很大,處于適中。從圖1和圖2的第6個(gè)綜合因素風(fēng)格的得分,可以較明顯地得出最優(yōu)發(fā)酵菌為釀酒曲和果酒曲的混合菌種。圖1各組試驗(yàn)在澄清度上顯著高于圖2得分,分析其原因可能是:在海帶提取的過(guò)程中有部分的膠類物質(zhì)被提出,但是經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌后其膠類物質(zhì)被分解,使得提取液的稠度下降,密度減小,一些溶液中的固體顆粒沉淀致提取液變得澄清透明。

    圖1和圖2在色澤因素上得分都處于5~6,呈乳黃色和微黃色,呈乳黃色的海帶酒主要是由果酒酵母發(fā)酵而成,因?yàn)楣平湍钢械呐浞接腥榛瘎x予酒香氣和濁度。酒味這個(gè)因素相差的比較大,原因是使用的3種發(fā)酵劑菌種不同,作用的機(jī)理不同:甜酒曲主要用于制作甜酒釀,故發(fā)酵的酒其甜度會(huì)較其他2種菌要甜的多。釀酒曲主要是生產(chǎn)白酒的菌種,其發(fā)酵的酒,酒精度數(shù)會(huì)相對(duì)較高。果酒曲是發(fā)酵果蔬類的菌種,其發(fā)酵的酒精度數(shù)不會(huì)很高,并且會(huì)帶有點(diǎn)甜味。

    評(píng)定員要參考以上5個(gè)因素的評(píng)定并結(jié)合自身的偏好,在第6個(gè)因素風(fēng)格上給樣品綜合打分評(píng)定。這個(gè)分?jǐn)?shù)是較為重要的,因?yàn)樵撛囼?yàn)的目的是制作出一類較符合大眾口味的海帶酒,由圖1和圖2可以得出最優(yōu)發(fā)酵劑是釀酒曲和果酒曲的混合菌種,釀酒曲能夠釀造酒精度較高的酒,而果酒曲在風(fēng)味和口味上作出貢獻(xiàn),這2種菌的混合菌種發(fā)酵的海帶酒較符合大眾的口味。

    2.2海帶提取液參數(shù)優(yōu)化正交試驗(yàn)

    3因素3水平的海帶提取液正交試驗(yàn)結(jié)果及分析見表2。最優(yōu)發(fā)酵劑釀酒曲和果酒曲的混合菌種發(fā)酵制得的9種海帶酒感官評(píng)定QDA圖見圖3。

    由表2中的R值可以看出,影響海帶酒品質(zhì)的主要因素是海帶提取液浸提溫度和浸提時(shí)間,料液比的影響不顯著。正交試驗(yàn)優(yōu)化的參數(shù)組合為A3B3C1,即浸提溫度為90 ℃、浸提時(shí)間5 h、料液比為1∶20 g/ml。結(jié)合圖3,可以明顯看出提取液6、8、9發(fā)酵的海帶酒感官評(píng)定較好,其參數(shù)分別是:提取溫度90 ℃、浸提時(shí)間3 h、料液比1∶20 g/ml;提取溫度70 ℃、浸提時(shí)間5 h、料液比1∶30 g/ml;提取溫度90 ℃、浸提時(shí)間5 h、料液比1∶25 g/ml。綜合考慮,為了節(jié)約時(shí)間,最適提取液參數(shù)為溫度90 ℃、時(shí)間3 h、料液比1∶20 g/ml。 由圖3還可以看出,不同的提取條件對(duì)澄清度和甜味的影響不顯著,對(duì)于色澤和風(fēng)格的影響最大,酒味和海帶味次之。

    2.36種菌種發(fā)酵海帶酒的抗氧化性

    以最適提取條件下(溫度90 ℃、時(shí)間3 h、料液比1∶20 g/ml)獲得的海帶提取液為原料,不滅菌直接添加6種發(fā)酵劑制備海帶酒,后發(fā)酵25 d進(jìn)行抗氧化性的測(cè)定,結(jié)果見表3。從表3中的清除羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH 自由基的能力測(cè)定結(jié)果可知,這6種海帶酒的抗氧化性均比較高。根據(jù)文獻(xiàn)研究,海帶中還有多酚類物質(zhì),多酚具有抗氧化性,并且海帶多糖也有抗氧化性。結(jié)合文獻(xiàn),分析該試驗(yàn)的6種海帶酒抗氧化性高的原因,很可能是由于海帶酒中的多酚類物質(zhì)及海帶多糖的作用。

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