分光光度法測定堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量

邱萍，馮煦，單宇，印敏，趙友誼，王鳴，王奇志

（江蘇省中國科學院植物研究所，江蘇省藥用植物研究開發(fā)中心，江蘇南京210014）

分光光度法測定堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量

邱萍，馮煦，單宇，印敏，趙友誼，王鳴，王奇志*

（江蘇省中國科學院植物研究所，江蘇省藥用植物研究開發(fā)中心，江蘇南京210014）

考察不同處理方法下堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量。分別以蘆丁、齊墩果酸為對照品，用紫外分光光度法對堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量進行測定分析。結(jié)果表明，三種不同處理方法所得的堿蓬三個部位，總黃酮含量均大于20%，其中，堿蓬經(jīng)純水提取后，濃縮液過聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高為36.51%，而堿蓬80%乙醇提取后，濃縮液過聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最低為22.66%。堿蓬80%乙醇提取后，濃縮液依次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測的總皂苷含量均在7%左右。不同處理方法對堿蓬中總黃酮、總皂苷含量有一定影響。

堿蓬；紫外分光光度法；化學成分；總黃酮；總皂苷

堿蓬Suaeda glauce（Bge.）Bge.為藜科Chenopodiaceae堿蓬屬Suaeda Forsk.ex Scop.一年生草本真鹽植物。主要分布于新疆、山東、河北、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古及甘肅等地的鹽堿荒漠和沿海灘涂［1］。它是目前改良和綠化鹽堿土壤的首選物種，又是沿海潮間帶的先鋒植物，資源相當豐富。研究發(fā)現(xiàn)，堿蓬中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和藥用成分，目前已逐漸發(fā)展成為藥食兩用的佳品。堿蓬種子和莖葉中營養(yǎng)成分完整而豐富，其種子脂肪含量占干物質(zhì)的36.5%高于大豆，不飽和脂肪酸占90%、亞油酸占70%、亞麻酸占6.08%；鮮嫩莖葉的蛋白質(zhì)含量占干物質(zhì)的40%；并含有豐富的維生素和微量元素，其鈣、磷、鐵、核黃素含量高于菠菜、番茄、胡蘿卜等蔬菜；維生素含量遠高于螺旋藻，含硒量較一般植物高10倍左右；堿蓬種子和莖葉的蛋白質(zhì)中人體必需氨基酸含量與世界衛(wèi)生組織給出的完全蛋白質(zhì)指標相當接近，優(yōu)于螺旋藻、大豆以及雞蛋中氨基酸的組成［2］?？梢?，其食用、保健、藥用價值非常大。

黃酮類化合物是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的天然產(chǎn)物，研究表明，具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和藥理活性［3-5］。皂苷是很強的表面活性劑，對心臟有刺激作用；又是很強的溶血劑，有些皂苷還具有抗菌、解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌［6］等有價值的生物活性。在過去的研究中證明堿蓬中含有豐富的黃酮類化合物，而所含的皂苷類化合物目前研究較少，本文用紫外分光光度法［7］對不同處理條件下的堿蓬總黃酮［8］、總皂苷進行測定。

1材料與儀器

堿蓬：2013年8月購自山東省壽光市，經(jīng)江蘇省中國科學院植物研究所袁昌齊研究員鑒定為堿蓬（Suaeda glauce），標本現(xiàn)存放于江蘇省中國科學院植物研究所藥用植物研究開發(fā)中心，編號SG201308。

UV-2501PC：島晶；STANO-BY分析天平：Shi madzu；HH-S型水浴鍋：鞏義市英峪予華儀器廠；GZX-9070 MBE數(shù)據(jù)鼓風干燥箱：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；KH5200DB型數(shù)控超聲波清洗器：昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；架盤天平：江蘇常熟衡器廠；Heating Bath B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、Vacuum Pump V-700：（BUCHI）。

2方法

2.1 堿蓬供試品的制備

1）1 kg堿蓬地上部分干藥材加10倍量（料液比= 1 kg/10 L）的純水加熱回流提取3次，提取時間分別是3、2、2 h，合并3次提取液并濃縮至小體積；上樣于聚酰胺柱，先用純水洗脫除鹽，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮，干燥得成品A，備用。

2）250 g堿蓬地上部分干藥材加10倍量［（料液比為1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加熱回流提取3次，提取時間分別是2、1、1 h，合并3次提取液并濃縮至無醇味；依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮，干燥得成品B，備用。

3）1 kg堿蓬地上部分干藥材加10倍量［料液比為1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加熱回流提取3次，提取時間分別是2、1、1 h，合并提取液并濃縮至無醇味；上樣于聚酰胺柱，用純水洗脫除鹽，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮，干燥得成品C，備用。

4）分別精密稱取上述A、B、C 3份樣品100 mg于25 mL容量瓶中，60%乙醇溶解并定容至刻度，備用。

2.2總黃酮含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品11.655 0 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%乙醇適量，超聲處理使其溶解，放冷加60%乙醇至刻度，得蘆丁對照品溶液，冷藏，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備

分別量取0.3 mL的2.1.4中得到三份樣品溶液，加60%乙醇5.7 mL（稀釋20倍），制的供試品溶液。

2.2.3 標準曲線的繪制

分別精密量取對照品溶液0、2、4、6、10 mL至25 mL容量瓶，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，避光放置6 min；加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，避光放置6 min；加4%氫氧化鈉溶液10 mL，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，避光放置15 min。以相應溶劑為空白，在500 nm處測定吸光度。以分光光度計在500 nm波長處測量吸光度值A為縱坐標，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標進行回歸，得回歸方程A=0.000 5C+0.002（r=0.999 7），結(jié)果表明蘆丁濃度在0～1 160.55 μg/mL線性關(guān)系良好，見圖1。

圖1 總黃酮標準曲線Table 1Total flavonoids standard curve

2.2.4 供試品溶液總黃酮含量的測定

吸取6 mL供試品溶液，按上述方法進行操作，測得A值，按對照品比較法計算被測供試品溶液的濃度，并求出其總黃酮含量。

2.2.5 精密度試驗

精密吸取供試品溶液，重復測定6次，吸光度的RSD為0.15%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液，于室溫分別放置0、3、6、12、36、48 h測定，吸光度的RSD為3.13%。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗

精密稱取同批樣品5份，按2.2.2方法制備供試品溶液，測定吸光度，計算，總黃酮的RSD為0.645%。

2.3 總皂苷的含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品5.6 mg，用甲醇溶解并定容至2 mL，搖勻，既得濃度為2.8 mg/mL的齊墩果酸標準品溶液。

2.3.2 標準曲線的繪制

精密吸取齊墩果酸標準品溶液0、100、200、300、400、500、600 μL于具塞試管中，70℃水浴上蒸干或吹干，于每個試管中加新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，置60℃水浴上加熱15 min，冰水浴冷卻，加冰醋酸5 mL，搖勻，以分光光度計在560 nm波長處測量吸光度值A，以A為縱坐標，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標進行回歸，得回歸方程A= 0.000 7C+0.014 9（r=0.999 4），結(jié)果表明齊墩果酸在28 μg/mL～168 μg/mL線性關(guān)系良好，見圖2。

圖2 總皂苷標準曲線Table 2Total saponins standard curve

2.3.3 供試品總皂苷含量的測定

吸取100μL樣品溶液，按上述方法進行操作，測得A值，每個樣品各取一分測定，并計算其總皂苷含量。

2.3.4 精密度試驗

精密稱取測試樣品溶液，重復測定6次，吸光度的RSD為0.35%。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液，于室溫分別放置0、3、6、12、36、48 h測定，吸光度的RSD為3.08%。

2.3.6 重現(xiàn)性試驗

精密稱取同批樣品5份，按2.3.2方法制備供試品溶液，測定吸光度，計算，總黃酮的RSD為0.546%。

3結(jié)果

3.1 不同處理方法下堿蓬中總黃酮、總皂苷含量比較通過紫外分光光度法對不同處理條件下堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量進行測定，結(jié)果如表1。

表1 總黃酮、總皂苷含量比較Table 1The content of total flavonoids and total saponins

從表1可以看出，堿蓬地上部分經(jīng)純水提取后，上樣于聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高，而堿蓬地上部分經(jīng)80%乙醇提取后，上樣于聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最低，但是3種不同處理方法所得的A、B、C 3個部位，總黃酮含量均大于20%。堿蓬80%乙醇提取后，經(jīng)石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測的總皂苷含量均在7%左右。

4討論

1）總黃酮含量的比較分析：通過對不同處理方法下堿蓬中總黃酮含量的測定可知，堿蓬地上部分經(jīng)純水加熱回流提取后，濃縮上聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高為36.51%，堿蓬80%乙醇加熱回流提取后，濃縮至無醇味，乙酸乙酯萃取部位總黃酮含量略低為31.98%，堿蓬80%乙醇加熱回流提取后，濃縮上聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位黃酮含量最低為22.66%。3種不同處理方法得到的堿蓬中總黃酮含量均在20%以上，因此表明，堿蓬中含有大量的黃酮類成分。

2）總皂苷含量的比較分析：通過對不同處理方法下堿蓬中總皂苷含量的測定可知，堿蓬地上部分經(jīng)80 %乙醇加熱回流提取后，經(jīng)石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測的總皂苷含量均在7%左右。文獻中報道的有關(guān)堿蓬中皂苷類成分相對較少，而本法測得的堿蓬中總皂苷含量并不低。

3）此外，藥理研究表明，堿蓬具有良好的降脂、抗衰老、保健等作用，初步推測這些藥理活性可能與其含有豐富的黃酮類成分有關(guān)，因此，可對堿蓬中黃酮類化學成分進行系統(tǒng)深入的研究，同時設計一系列藥理實驗，尋找其藥效物質(zhì)基礎，這將有望開發(fā)出新型降脂、抗衰老保健藥物等。關(guān)于堿蓬屬植物中皂苷類成分的研究相對較少，根據(jù)本實驗方法所測得的總皂苷含量，我們將有望從堿蓬中分離得到不同類型的皂苷單體并進一步通過藥理實驗檢測其生物活性。

［1］中科院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第二十五卷，第二分冊）［M］.北京：科學出版社，1979

［2］張學杰，樊守金，李法曾.中國堿蓬資源的開發(fā)利用研究狀況［J］.中國野生植物資源，2003，22（2）：1-3

［3］趙宇明.分光光度法快速測定水產(chǎn)品中組胺的含量［J］.食品研究與開發(fā)，2014，35（8）：94-96

［4］張建揚，李明慧，徐連明，等.堿蓬籽油對小鼠血脂及免疫功能的影響［J］.職業(yè)與健康，2008，24（15）：1529-1530

［5］鄭維發(fā)，陳才法，李巍.鹽地堿蓬幼苗和種子氯仿/甲醇提取物的化學組成及其抗炎作用（英）［J］.中成藥，2003，25（12）：997-1002

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［7］周亞福，毛少利，李思鋒，等.柴胡屬5種植物總皂苷和總黃酮含量的測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2013，24（5）：1241-1243

［8］張躍林，張濱.堿蓬中黃酮的提取工藝與鑒別［J］.中國食物與營養(yǎng)，2008（8）：46-47

Determination of Total Flavonoids and Saikosaponins in Suaeda glauce（Bge.）Bge by UV-Vis Spectrophotometry

QIU Ping，F(xiàn)ENG Xu，SHAN Yu，YIN Min，ZHAO You-yi，WANG Ming，WANG Qi-zhi*
（Jiangsu Center for Reaserch&Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China）

To study the content of total flavonoids and saikosaponins in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.The content of total flavonoid and saikosaponin was determined by uv-visible spectrophotometry and Rutin and oleanolic acid as reference.The total flavonoids in the three different parts of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were all more than 20%，in which，the total flavonoids in the 60%ethanol elution of the pure water extraction of the S.glauce from the polyamide column was up to 36.51%，while the total flavonoids in the 60% ethanol elution of The 80%ethanol extraction of the S.glauce from the polyamide column was 22.66%.The 80 %ethanol extraction of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were extraced followed by petroleum ether and ethyl acetate，the content of total saikosaponin in the ethyl acetate was up to 13.18%，the content of total saikosaponin in other two parts were measured at about 7%.The different treatment methods influences the content of total flavonoid and saikosaponin in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.

Suaeda glauce（Bge.）Bge.；UV spectorphotometry；chemical constituents；total flavoniond；total saikosaponin

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.015

2014-08-12

江蘇省鹽土生物資源研究重點實驗室開放研究課題項目（JKLBS2012011）

邱萍（1987—），女（漢），在讀研究生，研究方向：天然產(chǎn)物化學。

*通信作者：王奇志，女（漢），副研究員。