容積敏感性氯通道在急性胰腺炎早期的應用研究

文毅　許芳怡　康娟

容積敏感性氯通道在急性胰腺炎早期的應用研究

文毅許芳怡康娟

目的 觀察容積敏感性氯通道在急性胰腺炎（AP）早期中的作用。方法 選取40只大白鼠建立AP模型，隨機分為觀察組和對照組，觀察組給予容積敏感性氯通道抑制劑，對照組給予生理鹽水安慰劑，對比分析兩組大白鼠炎癥因子變化情況。結果 觀察組血清淀粉酶、TNF-α、IL-6均明顯低于對照組，差異有顯著性（P＜0.01）；觀察組細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組，差異有顯著性（P＜0.01）；觀察組水腫、炎癥、出血及壞死等病理學評分明顯低于對照組，差異有顯著性（P＜0.01）。結論 容積敏感性氯通道在胰腺腺泡細胞急性炎癥早期起著重要的作用，可通過容積敏感性氯通道抑制劑改善胰腺腺泡細胞急性炎癥反應。

容積敏感性氯通道 胰腺腺泡細胞 急性炎癥

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是消化內(nèi)科常見的疾病之一，目前其發(fā)病機制尚未完全闡明。近年的研究證實，細胞凋亡不僅在生理狀態(tài)下對細胞的選擇、分化及衰老細胞的清除起重要作用［1］。容積敏感性氯離子通道普遍存在于哺乳動物細胞對維持細胞容積的動態(tài)平衡，調(diào)節(jié)細胞的電活動，以及對細胞內(nèi)pH值、細胞增殖與分化、細胞的凋亡等多種生物學功能發(fā)揮重要的作用［2］。本文通過動物模型實驗對容積敏感性氯通道進行研究，現(xiàn)將結果報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 本實驗使用SPF級健康SD大鼠40只，其中雄性大鼠32只，體重為（305.6±26.8.5）g，未交配雌性大鼠28只，體重為（280.4±25.4）g，購自廣西醫(yī)科大學實驗動物中心。實驗使用藥品：二磺酰苯乙烯類化合物（上海生工生物工程股份有限公司），臨用前使用高壓滅菌生理鹽水配置稀釋成所需的藥物濃度。?；悄懰徕c（STC）（上海生工生物工程股份有限公司）。滅菌生理鹽水（上海生工生物工程股份有限公司），烏司他丁（UTI）（上海生工生物工程股份有限公司）。

1.2AP模型制備 制作AP動物模型前先將采購的SD大鼠喂養(yǎng)1周左右，每日觀察SD大鼠健康狀況，待適應后擇期進行實驗。實驗前12h對SD大鼠進行嚴格的禁食，可適當給予少量飲用水。實驗所用麻醉藥品為3%戊巴比妥鈉（北京普博斯生物產(chǎn)品），按照0.1ml/100g劑量給藥。將麻醉后的SD大鼠固定在實驗操作臺，使用一次性外科手術刀從上腹正中作1～2cm的切口，充分暴露十二指腸和膽胰管，使用動脈夾夾閉膽總管阻斷。使用鈍15號針頭進行穿刺，從十二指腸通過，由腸系膜邊緣經(jīng)乳頭逆行進入膽胰管約1cm左右，勿插入太深，固定好穿刺針后，使用動脈夾夾閉針頭插入部位的膽胰管。使用10ml注射器向膽胰管緩慢勻速（0.2ml/min）注入3%?；悄懰徕c（1.0ml/ kg）。注射時間控制在1min左右，注射完成后停留3min，完成后去掉動脈夾和穿刺針頭，消毒切口縫合腹壁關腹。

1.3方法 觀察組大鼠給予二磺酰苯乙烯類化合物（美國BD公司）抑制容積敏感性氯通道，用法：250mg/次，使用生理1ml溶解后插胃管給藥，1次/d，連續(xù)給藥1周；對照組大鼠給予生理鹽水安慰劑。

1.4觀察指標 血清淀粉酶、血清TNF-α、血清IL-6、胰腺細胞凋亡指數(shù)、胰腺組織光鏡下病理學評分。

1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包。計量資料以（±s）表示，組間比較采用成組設計t檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組炎癥細胞因子變化的比較 見表1。

表1　觀察組與對照組炎癥細胞因子變化的比較（±s）

表1　觀察組與對照組炎癥細胞因子變化的比較（±s）

組別n血清淀粉酶（nkat/L）血清TNF-α（μg/L）血清IL-6（ng/L）觀察組2067.8±3.53.2±0.21175.9±7.88對照組2015.24±4.80.92±0.0728.6±4.45 t值39.56840.06372.729 P值0.0000.0000.000

2.2觀察組與對照組胰腺細胞凋亡情況的比較 見表2。

表2　觀察組與對照組細胞凋亡情況的比較（±s）

表2　觀察組與對照組細胞凋亡情況的比較（±s）

組別n細胞凋亡指數(shù)觀察組208.56±1.61對照組200.13±0.04 t值23.409 P值0.000

2.3觀察組與對照組胰腺組織光鏡下病理學評分比較 見表3。

表3　觀察組與對照組胰腺組織光鏡下病理學評分比較（±s）

表3　觀察組與對照組胰腺組織光鏡下病理學評分比較（±s）

組別n水腫炎癥出血壞死觀察組200.21±0.18000對照組203.6±0.472.7±0.182.21±1.032.4±0.54 t值30.123 P值0.0000.0000.0000.000

3　討論

AP發(fā)病時主要表現(xiàn)為大量組織細胞水腫、壞死，并釋放大量的炎癥介質(zhì)，進一步加劇急性炎癥的反應。近年研究表明，胰腺腺泡細胞凋亡與AP有密切的關系，主要表現(xiàn)為保護胰腺組織，防止胰腺組織進一步壞死，胰腺腺泡凋亡是一種保護性反應。 研究證實，通過誘導胰腺腺泡細胞發(fā)生凋亡可有效減輕AP進一步惡化壞死，減輕胰腺組織損傷程度［3］。促炎癥細胞因子包括TNF-a、IL-ie、IL-6、IL-8等；抗炎細胞因子包括IL-4、IL-10、1L-12等［4］。炎癥細胞因子和抗炎細胞因子在正常情況下表達較低，兩者保持平衡水平，當促炎細胞因子在體內(nèi)過多釋放時，抗炎細胞因子相對不足，表現(xiàn)為炎癥逐漸嚴重，機體出現(xiàn)全身炎癥反應綜合征。當抗炎因子釋放過多時，促炎因子相對不足，表現(xiàn)為代償性抗炎反應綜合征。這兩者平衡在治療AP或者重癥AP中起重要的作用。IL-6是預測AP嚴重程度的一個重要指標，檢測IL-6可預測患者是否會出現(xiàn)重癥AP，在AP發(fā)病后24h內(nèi)對重癥AP嚴重程度的預測敏感性和準確性均較高，可達＞90%，由于其在血液中濃度高峰出現(xiàn)的較早，即使在急診救治過程中，亦有較高的預測價值。

本資料結果顯示，觀察組模型大鼠給予容積敏感性氯通道抑制后，血清淀粉酶、TNF-α、IL-6明顯降低，說明通過抑制容積敏感性氯通道可以改變炎癥細胞因子的濃度，從而控制胰腺腺泡細胞急性期炎癥的反應，結果與文獻報道相一致［5］。另外結果亦顯示，觀察組大鼠的胰腺細胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組大鼠，說明使用容積敏感性氯通道抑制劑后，胰腺炎癥反應可得到有效控制，胰腺細胞主要以凋亡形式減少胰腺的炎癥反應，文獻研究亦證實了本研究結果［6］。使用容積敏感性氯通道抑制劑后觀察組大鼠胰腺組織光鏡下病理學評分明顯低于對照組，說明使用抑制劑后，抑制胰腺炎癥反應，胰腺細胞出現(xiàn)水腫、炎癥、出血、壞死等明顯減少，病理評分相對減少，研究結果與文獻報道相似［7，8］。

本研究結果從動物模型中證實了容積敏感性氯通道在胰腺腺泡細胞急性炎癥早期發(fā)揮重要的作用，通過使用容積敏感性氯通道可明顯改善AP炎癥反應。本實驗結果為臨床治療AP提供了一個新的治療方向。本文亦存在不足之處，由于本研究主要以動物為模型，因此，由動物實驗研究推用至人還需進行更深入的研究。

1 Lee, EL, Shimizu T, Ise T, et al. Impaired activity of volume-sensitive Cl-channel is involved in cisplatin resistance of cancer cells. J Cell Physiol, 2007, 211（2）： 513～521.

2 萬云,鄒玲婷,沈佳慶,等. 血清CK與hs-CRP在急性胰腺炎診斷及預后評估中的價值. 浙江臨床醫(yī)學,2013, 15（5）： 678～679.

3 金牡丹,周智林,傅志泉.重癥急性胰腺炎大鼠IL-8、IL-10及NF-kB的表達. 浙江臨床醫(yī)學,2008, 10（6）： 724～725.

4 朱長炎,趙海峰,曾憲有,等. 一種新型小鼠重癥急性胰腺炎模型的制作及評估.中國組織工程研究,2012,16（42）：7861～7865.

5 Habela CW, Ernest NJ, Swindall AF, et al. Chloride accumulation drives volume dynamics underlying cell proliferation and migration. Neurophysiol, 2009, 101（2）： 750～757.

6 Hoffmann EK,Lambert IH, Pedersen SF. Physiology of cell volume regulation in vertebrates. Physiol Rev, 2009, 89（1）： 193～277.

7 Okada Y, Shimizu T, Maeno E, et al. Volume-sensitive chloride channels involved in apoptotic volume decrease and cell death. Membr Biol, 2006, 209（1）： 21～29.

8 Habela CW, Ernest NJ, Swindall AF, et al. Chloride accumulation drives volume dynamics underlying cell proliferation and migration. Neurophysiol, 2009, 101（2）：750～757.

Objective To observe the volume sensitive chloride channels in early stage of acute pancreatitis. Methods 40 rats were used toestablish the model of acute pancreatitis，were randomly divided into experimental group and control group，the experimental group was given the volume sensitive chloride channel inhibitor，the control group received saline placebo，comparative analysis of two groups on thechanges of inflammatory factor. Results Serum amylase，TNF-a，IL-6 in experimental group were significantly lower than those in the control group，the difference was statistically significant（P＜0.01）；in observation group，the apoptosis index was significantly higher than the control group，the difference was statistically signifi cant（P＜0.01）；observation group edema，infl ammation，hemorrhage and necrosis and other pathological score was significantly lower than that of the control group，the difference was statistically significant（P＜0.01）. Conclusion The volume sensitive chloride channels play an important role in the early stage of acute pancreatitis，can improve the acute infl ammatory response of pancreatitis through volume sensitive chloride channel inhibitor.

Volume sensitive chloride channels Pancreatic acinar cell Acute infl ammation

516002 廣東省惠州市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科