跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合作用對大鼠骨骼肌急性損傷修復過程中炎癥的發(fā)展及肌衛(wèi)星細胞增殖的影響

楊 輝，常 青，唐成林，唐念珍，田 源，張 毅

骨骼肌損傷是運動中最為常見的軟組織損傷，在肌肉損傷中所占比例最大［26］。在所有肌肉骨骼系統(tǒng)損傷中，鈍器傷是最常見的損傷類型之一［23］。如此高的發(fā)病率讓科研工作者一直致力于有關骨骼肌損傷修復機制的相關研究，現(xiàn)有研究觀察了藥物、康復理療等干預因素對損傷動物模型愈合的促進作用。張建、陳世益、李云霞等［12］發(fā)現(xiàn)，在急性骨骼肌鈍挫傷修復過程中，黃芪皂甙、丹參酮ⅡA注射液能減少損傷區(qū)域纖維疤痕組織形成，對損傷部位骨骼肌纖維直徑無明顯影響。葛新發(fā)、潘衛(wèi)東、董貴俊等［3］發(fā)現(xiàn)，磁納米化的bFGF比直接注射bFGF能明顯改善大鼠急性骨骼肌鈍挫傷后肌肉收縮應力和恢復應力衰減。羅麗、張林、董宇等［9］發(fā)現(xiàn)，低功率激光能增強急性骨骼肌鈍挫傷大鼠肌衛(wèi)星細胞增殖活性，從而加速骨骼肌的再生，促進損傷修復；Kasemkijwattana、Channarong MD 等［24］通過在損傷骨骼肌中注射生長因子，提高骨骼肌損傷后修復。但是，有關運動訓練促進骨骼肌損傷修復的文獻卻很少。

N復合體I，即NADH-泛醌還原酶，是細胞能量代謝所必需的輔酶，是線粒體中能量產生鏈中的控制標志物，在維持細胞生長、分化和能量代謝以及細胞保護方面起著重要作用［1，14，19］。肌衛(wèi)星細胞是位于肌膜和基底膜之間的梭形單核干細胞，一般情況下處于靜止狀態(tài)，當受到損傷或刺激時即被激活并增殖，然后，與原有骨骼肌細胞相互融合，形成新的肌纖維細胞，動物出生后，在肌肉組織的生長和肌肉損傷的修復過程中起著重要作用［30］。而NO／HGF／c-Met作為肌衛(wèi)星細胞激活主要信號通路之一［2］，在肌衛(wèi)星細胞的激活增殖中發(fā)揮了重要作用。

隨著國家大力發(fā)力發(fā)展競技體育與全民健身運動，運動損傷也大量出現(xiàn)，科學的防治運動損傷是現(xiàn)今科研工作者面臨的一大難題。本研究結合現(xiàn)狀，緊接前期研究［5-8］，探討跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合作用對大鼠骨骼肌急性損傷修復過程中NADH還原酶及NO／HGF／c-Met通路的影響，研究跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合作用對炎癥的發(fā)展及肌衛(wèi)星細胞增殖的分子機制，為臨床按摩與跑臺運動訓練聯(lián)合治療骨骼肌損傷提供一定的實驗理論依據；也為運動員肌肉損傷的治療方法與康復手段的發(fā)展提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

本研究共選取12周健康成年雄性SD大鼠76只，體質量200～230g／只，均由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供（醫(yī)學動物合格證SCXK渝在20070002）。常規(guī)分籠飼養(yǎng)，每籠1只，室溫（21±2℃），相對濕度為65%～75%，自然光照，每日正常飲水，喂食標準飼料。

1.1.2 主要試劑及儀器

主要試劑:1）NDUFA1Antibody（G-13）試劑，編號 :sc-131623，購自Santa Cruz生物科技公司；2）RNA逆轉錄（Perfect Real Time）試劑盒，RNAiso Plus試劑，熒光定量SYBR○RPremix Ex TaqTM II（Tli RNaseH Plus）試 劑 盒，DEPC水，均購自日本TAKARA生物公司。2×Taq MasterMix（含染料）酶 :購自北京天根生化有限公司；3）8%硫化鈉脫毛劑。

主要儀器:小動物跑臺，6跑道，型號:M9W-315587，購自北京中西遠大科技有限公司，低溫離心機購自德國LEICA生物科技公司，熒光定量PCR儀購自美國ABI生物科技公司 ，PCR儀購自美國MJR生物科技公司。自制軟組織打擊器、AFY—10型按摩器（天津產）。生物顯微鏡、圖像采集系統(tǒng)等設備由重慶醫(yī)科大學生命科學研究院提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物造模

自制打擊器參照了KATSUYA KAMI［25］的模型。在造模的前一天用8%硫化鈉脫毛劑除去B、C、D、E各實驗組大鼠右側小腿腓腸肌被毛，用10g／L水合氯醛腹腔麻痹后，重物下落導致一次性打擊傷，打擊部位為大鼠右側小腿內側面（其皮下為腓腸肌中段），打擊器為一打擊面平坦的空心鋁制圓柱體（直徑1cm，長20cm，質量20g），底面與木制圓柱體相接（直徑1cm，長2cm，質量2g），木制打擊面與打擊部位直接接觸，自制重力錘640g，從25cm高處落下，重力6.27N，產生1.57J的動能打擊力，造成腓腸肌急性中度挫傷模型。造模后即刻麻醉解剖，通過病理、功能檢查，觀察損傷部位肌組織斷裂程度、是否骨折，證實腓腸肌有一定的收縮功能障礙，無骨折，屬急性中度腓腸肌挫傷模型。重力錘的投放和大鼠的固定均由一人操作，保證打擊力和損傷部位及程度的一致性。

1.2.2 分組處理

所有實驗SD大鼠經過適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成5組。分別為正常對照組（A組，n＝4）、自然恢復組（B組，n＝24）、按摩組（C組，n＝16）、跑臺組（D組，n＝16）、混合組（E組，n＝16）。各組又根據造模后時間觀察點不同，B組又分為造模后1d、3d、7d、14d、21d、28d6個亞組（每個亞組4只），C、D、E組分為造模后7d、14d、21d、28d4個亞組（每個亞組4只）。A組為空白對照組，不做任何處理；B、C、D、E組SD大鼠用自制打擊器造大鼠右后肢腓腸肌損傷模型。B組不給予按摩，C組于造模后第3天開始給予按摩，D組于造模后第3天開始給予跑臺運動訓練，E組造模后第3天開始給予按摩加跑臺運動訓練。正常對照組于造模前一天取標本；自然恢復組1d、3d、7d、14d、21d、28d處死大鼠取標本；C、D、E組分別造模后7d、14 d、21d、28d處死大鼠取標本。提取大鼠右側腓腸肌損傷最嚴重區(qū)域的肌肉，一部分用PBS緩沖液沖洗干凈后，放入事前標記好的1.5ml離心管，于液氮凍存0.5h，然后轉移到-80℃冰箱，待Western Blot檢測肌組織NADH還原酶蛋白量，待實時熒光PCR檢測nNOS、HGF mRNA轉錄水平；另一部分用生理鹽水清洗干凈后，用4%多聚甲醛固定，備以石蠟切片及HE染色。

1.3 跑臺運動訓練干預方案

造模后第3天，跑臺組、混合組實驗大鼠介入跑臺運動訓練。在動物的暗周期進行訓練，每周訓練5d，每天訓練1次。跑臺運動恢復訓練參照Bedford［16］訓練方案進行（表1）。

1.4 按摩干預方案

造模后第3天，按摩組、混合組實驗大鼠介入震動按摩治療。實驗大鼠震動按摩干預操作步驟:1）實驗大鼠按1ml／kg體質量用10g／L水合氯醛進行腹腔麻痹；2）麻醉后將實驗大鼠以側臥位的方式固定，損傷側位于健側腿之上；3）將天津產AFY-10型小動物按摩器按摩頭固定于大鼠受損腓腸肌中部及鄰近肌組織下；4）讓按摩頭對受損組織進行按摩干預，設置按摩頭轉速為2600r／min，按摩時間為15min，每天1次［10］。

表1 本研究大鼠跑臺運動訓練方案一覽表Table 1 Proposal of Treadmill Running Exercise

1.5 實時熒光定量PT-PCR檢測大鼠骨骼肌nNOS、HGF mRNA轉錄水平

1.5.1 引物設計與合成

檢索美國國立生物技術信息中心NCBI數(shù)據庫（Gene Bank）中nNOS、HGF mRNA序列，用Primer P remier5.0軟件設計出nNOS、HGF基因以及內參GAPDH基因的上下游引物序列（表2），均由TAKARA生物工程（大連）有限公司合成。

表2 nNOS、HGF和GAPDH基因引物序列一覽表Table 2 Sequences and Detalls of Target Genes

1.5.2 總RNA提取與鑒別

選取凍存于-80℃冰箱中離心管的樣本，加入液氮預冷的研缽中，用研杵研磨組織，其間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀，按照RNAiso Plus試劑盒說明書提取RNA。用TE Buffer稀釋RNA后測定吸光度，使用紫外分光光度計檢測，OD260／OD280比值在1.7～2.1為好。

1.5.3 RNA逆轉錄反應

取1μg的總RNA，按照逆轉錄試劑盒（TAKARA）配配制PT反應液（總體積10μl），逆轉錄后得cDNA模板。

1.5.4 實時熒光定量PCR（Real-Time PCR）

Realtime PCR反應體系為20μl，其中，SYBR○RGreen PCR Master Mix（TOYOBO）10μl，前向、反向引物各1μl，dH206μl，cDNA 模 板 2μl。 反 應 條 件，tep 1:預 變 性（95℃，30s）；Step 2:（95℃，15s；55℃／56℃，30s；65℃，30s）×40個循環(huán)；Step3:擴增建立PCR產物的熔解曲線，再變性 （95℃，15s），退 火 （55℃／56℃，35s），然 后，從55℃／56℃緩慢加熱到（95℃，15s）；每1℃收集熒光一次。經儀器自動分析，各基因融解曲線（Melt Curve）均為單峰，表明擴增產物特異性較高。反應結束后，PCR儀給出各反應孔的Ct值，以GAPDH基因為內參，根據公式2-△Ct（△CT＝CT-target-CTGAPDH）計算出樣品目的基因的相對表達量。

1.6 Western Blot檢測肌組織NADH還原酶蛋白量

1）灌制聚丙烯凌膠，10%分離膠，4%濃縮膠；2）上樣量50μg，每樣至少上2塊平行膠；3）電泳電壓濃縮膠90 V，分離膠160V，電泳液為甘氨酸緩沖液；4）電泳結束后，取出凝膠，和相同大小的PVDF（先用95%乙醇固定）置于3層濾紙中間，放入轉移槽中，加滿轉移液，300mA約90 min；5）取出PVDF膜，自然晾干后，置于95%乙醇中固定；自然晾干；6）0.01MPBST洗5min；7）放入5%脫脂奶粉中封閉非特異性蛋白，37℃恒溫搖床下約4h；8）加I抗體（1∶1000用0.01MPBT配制），37℃恒溫搖床下3～4h；9）0.01MPBST洗15min×3次；10）加 HRP標記的二抗（1∶1000用0.01MPBST配制），室溫下1～2h；11）0.01M PBST洗15min×3次；12）將PVDF置于NEN化學發(fā)光試劑中增強反應1～3min；13）在暗室中使X光片爆光，常規(guī)方法顯影，定影，并掃入凝膠成象系統(tǒng)進行圖象分析，計算光密度值（OD值），重復3次。

1.7 組織學觀察

取出固定于4%多聚甲醛的各實驗大鼠受損腓腸肌標本，常規(guī)乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、然后切片5μm／片，HE染色后置于生物顯微鏡下觀察受損組織病理學改變，在圖像采集系統(tǒng)下獲取圖片。

1.8 數(shù)據處理

圖2 本研究自然對照組大鼠小腿腓腸肌組織學觀察圖（HE，400×）Figure 2.The Histological Observation of the Gastrocnemius in Control Group（HE，400×）

2 實驗結果

2.1 造模前、后實驗各組大鼠骨骼肌組織變化

正常對照組大鼠骨骼肌肌節(jié)結構完整，肌絲排列整齊，肌細胞正常（圖1A）。自然恢復組大鼠肌纖維斷裂、碎解，炎癥細胞浸潤，吞噬碎片，肌節(jié)結構紊亂（圖1B）。

圖1 本研究大鼠小腿腓腸肌組織學觀察圖（HE，400×）Figure 1.The Histological Observation of the Gastrocnemius in Rats（HE，400×）

自然恢復組7天后可見少量成肌細胞，炎癥細胞減少，線粒體較少；14天后出現(xiàn)肌管自然恢復組出現(xiàn)在肌管，成肌細胞核出現(xiàn)，周圍有新生肌纖維；21天后肌管融合，損傷部位出現(xiàn)疤痕組織；28天后，損傷部位基本愈合，但是疤痕組織明顯（圖2）。

按摩組7天后炎癥細胞減少明顯，出現(xiàn)少量線粒體、大量成肌細胞，并有一定量成肌細胞核出現(xiàn)，周圍有大量新生肌纖維，肌衛(wèi)星細胞增殖明顯；14天后大量肌管出現(xiàn)，肌衛(wèi)星細胞增殖更加明顯，肌纖維排列有序；21天后肌管融合，肌纖維排位整齊，損傷部位基本愈合:28天后損傷部位完全愈合，疤痕組織微?。▓D3）。

跑臺組7天后炎癥細胞減少亦明顯，出現(xiàn)大量線粒體，大量成肌細胞:14天后出現(xiàn)大量肌管，并融合成肌纖維，肌衛(wèi)星細胞增殖明顯；21天后，肌纖維排列整齊，損傷部位基本愈合；28天后損傷部位完全愈合，肌組織排列整齊，少量疤痕組織，與正常對照組無異（圖4）。

混合組7天后炎癥細胞基本消失，出現(xiàn)大量線粒體，肌衛(wèi)星細胞增殖明顯，出現(xiàn)大量肌纖維；14天后，肌衛(wèi)星細胞增殖更加明顯，新生肌纖維相互融合，排列整齊；21天后，損傷肌組織已基本痊愈，新生肌纖維排列整齊，并伴有大量成肌細胞核:28天后，損傷部位痊愈，基本無疤痕組織，與正常對照組肌組織相比，混合組有更多成肌細胞 核、線粒體，肌組織排列更加緊湊（圖5）。

圖3 本研究按摩組大鼠小腿腓腸肌組織學觀察圖（HE，400×）Figure 3.The Histological Observation of the Gastrocnemius in Massage Group（HE，400×）

圖4 本研究跑臺組大鼠小腿腓腸肌組織學觀察圖（HE，400×）Figure 4.The Histological Observation of the Gastrocnemius in Treadmill Exercise Group（HE，400×）

圖5 本研究混合組大鼠小腿腓腸肌組織學觀察圖（HE，400×）Figure 5.The Histological Observation of the Gastrocnemius in Mixed Group（HE，400×）

圖6 本研究各組大鼠骨骼肌中NADH還原酶蛋白量比較圖Figure 6.NADH Reductase Protein in Each Group

2.2 Western Blot檢測實驗各組肌組織NADH還原酶蛋白量結果

表3顯示，C、D、E組與B組比較，肌組織NADH還原酶蛋白量明顯增高，且具有極顯著性差異（P＝0＜0.01），說明干預組比自然恢復組能量代謝更好；E組與C、D組比較，肌組織NADH還原酶蛋白量明顯增高，且具有極顯著差異（P＝0＜0.01），混合組增加肌細胞NADH還原酶蛋白量效果最明顯；D組與C組比較，肌組織NADH還原酶蛋白量明顯增高，且具有極顯著差異（P＝0.006＜0.01），在提高肌組織NADH還原酶蛋白量上，跑臺組比按摩組明顯。

表3 本研究各組大鼠骨骼肌中NADH還原酶蛋白量的比較一覽表Table 3 NADH Reductase Protein in Each Group

2.3 實驗各組骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA整體轉錄水平實時熒光定量PCR檢測結果

表4顯示，C、D、E組與B組比較，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA整體轉錄水平明顯增高，且具有極顯著差異（P＝0＜0.01）；E組與C、D組比較，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA整體轉錄水平明顯增高，且具有極顯著差異（P＝0＜0.01）。

表4 本研究大鼠骨骼肌中nNOS、HGF mRNA轉錄水平一覽表Table 4 nNOS，HGF mRNA Transcription in Each Group

2.4 實驗各組骨骼肌NADH還原酶，nNOS、HGF mRNA轉錄水平治療前后對比

通過跑臺運動訓練與按摩的聯(lián)合作用，控制組各組骨骼肌損傷區(qū)域NADH還原酶，nNOS、HGF mRNA轉錄水平明顯高于自然恢復組，這說明跑臺運動訓練與按摩能明顯改善骨骼肌損傷的修復，在修復效果上，聯(lián)合干預好于單獨干預，跑臺運動訓練效果好于按摩。

圖6 本研究各實驗大鼠治療前、后骨骼肌中NADH還原酶、nNOS、HGF mRNA轉錄水平圖Figure 6.Comparison of NADH Reductase、nNOS，HGF mRNA Transcription of the Control and the Model

3 討論

骨骼肌損傷修復過程的極其復雜性，使骨骼肌損傷一直成為現(xiàn)在研究的熱點和難點。骨骼肌急性損傷后，肌纖維膜受損，細胞內Ca2＋外溢，導致局部Ca2＋濃度升高，激活Ca2＋依賴的蛋白酶，抑制正常線粒體呼吸，激活補體，募集炎癥細胞，引起局部壞死。隨后，炎癥因子會釋放一些成肌細胞趨化因子和促分裂因子［20，28］，緊接著血管化隨著吞噬作用而發(fā)現(xiàn)，并釋放一些血管源性因子，如IGF、FGF等［28］。肌成肌細胞趨化因子和促分裂因子激活肌衛(wèi)星細胞與纖維母細胞參與修復，它們增殖、增生、分化、融合，形成新肌管，在這個過程中，新生的肌纖維通常從未受傷部分開始，向受損區(qū)域延伸，數(shù)個新形成的肌管向幸存的肌纖維融合［22，29］。如果成纖維細胞過程增殖則會形成疤痕組織，導致不完全的恢復，影響肢體正常功能。

在這個復雜的動態(tài)修復過程中，炎癥的發(fā)展以及肌衛(wèi)星細胞的激活增殖對骨骼肌損傷的修復都具有十分重要的作用。炎癥反應學說提出鈣離子在骨骼肌損傷中起觸發(fā)作用，當肌組織受到損傷，肌膜上K＋-Na＋-ATPase異常，影響肌細胞K＋-Na＋交換、Ca2＋超載，導致線粒體結構受損，三羧酸循環(huán)發(fā)生困難，氧化磷酸化過程中的能量轉換異常，活性氧類物質逐漸累積，進一步造成肌膜、線粒體膜的破壞，導致能量代謝障礙以至細胞死亡［4，31］。能量的代謝對于骨骼肌損傷后炎癥的發(fā)展起著決定性的作用。NADH還原酶簡稱復合體Ⅰ（complexⅠ），作為線粒體呼吸鏈上的重要限速酶，在生物氧化過程中起著電子傳遞的作用，是細胞能量代謝所必需的輔酶。NADH還原酶的活性和蛋白量直接影響細胞能量的代謝，它通過影響肌膜K＋-Na＋-ATPase的活性來影響 K＋-Na＋交換、Ca2＋代謝。當損傷肌組織炎癥持續(xù)發(fā)展，NADH還原酶活性被抑制，直接導致肌膜K＋-Na＋-ATPase的活性下降，K＋-Na＋交換、Ca2＋代謝障礙，Ca2＋超載，更多的線粒體結構、肌漿網受損，進而引起局部組織結構損傷的加重和肌肉內部的損傷，出現(xiàn)肌原纖維斷裂，線粒體膜、肌膜的破壞等現(xiàn)象，最終導致細胞壞死。而受損、壞死的細胞吸引炎癥細胞聚集，分泌更多的炎癥因子，抑制了肌成肌細胞趨化因子和促分裂因子分泌，影響了肌衛(wèi)星細胞的激活、增生、分化、融合形成肌管的再生修復過程?？梢?，NADH還原酶的活性與骨骼肌損傷的修復也密切相關。

一般情況下，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞處于靜息狀態(tài)，當受到外界刺激時，如損傷、牽拉或肌肉萎縮引起的病變時，衛(wèi)星細胞能夠被激活［17］。Angelis［18］在有關損傷區(qū)域肌衛(wèi)星細胞作用的研究中認為，肌肉損傷區(qū)肌衛(wèi)星細胞的增殖和分化，是達到損傷修復目的的主要途徑。有研究表明，NO／HGF／c-Met信號通路對肌衛(wèi)星細胞的激活起著關鍵作用。骨骼肌細胞在受到刺激后可通過相應機制增加一氧化氮合酶數(shù)量或活性，然后，合成并釋放NO，成為肌衛(wèi)星細胞激活的起始信號；NO介導HGF及c-MET在肌衛(wèi)星細胞的共同定位作用［32］；HGF一方面與其受體c-MET結合，引發(fā)磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和絲裂原活化蛋白激酶等相關基因轉錄和細胞分裂的多個信號通路；另一方面，下調肌肉生長抑制素水平以保持肌衛(wèi)星細胞靜息狀態(tài)，從而激活肌衛(wèi)星細胞［28］。肌衛(wèi)星細胞增殖、增生、分化、融合，最終形成新肌管，完成修復。nNOS、HGF mRNA表達的量決定了NOS、HGF蛋白的量，NOS介導NO的合成，間接影響NO介導的NO／HGF／c-Met信號通路，影響肌衛(wèi)星細胞的激活、增生、分化以及融合形成肌管。

前期研究已發(fā)現(xiàn)，骨骼肌損傷修復的生理生化機制。按摩可以增強SDH和K＋-Na＋-ATPase酶活性的。按摩可以抑制兔鈍挫傷骨骼肌瘢痕的形成，兔骨骼肌鈍挫傷恢復過程中堿性成纖維細胞生長因子有干預作用以及有促進骨骼肌損傷后肌纖維再生［11］等。查閱國內、外最新研究報道，卻沒有發(fā)現(xiàn)有關跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合作用對骨骼肌急性損傷修復過程中線粒體呼吸鏈關鍵酶NADH還原酶及肌衛(wèi)星細胞NO／HGF／c-Met通路的研究。本研究采用跑臺運動訓練結合按摩聯(lián)合干預的方法，探討聯(lián)合療法對骨骼肌急性損傷修復的影響。

臨床上將骨骼肌損傷程度分為 3度［15，23］:輕度（1°）:少量肌纖維損傷并伴有輕微腫脹，沒有或僅有輕微的力量和活動受限；中度（2°）:絕大部分肌纖維損傷，肌力明顯下降:重度（3°）:損傷范圍涉及整塊肌肉橫截面，波及臨近肌肉組織，損傷后肌肉功能完全喪失。損傷程度直接影響炎癥反應、肌纖維再生和肌纖維化程度［13］。輕度損傷一般可以自動痊愈，中度和重度損傷伴隨著肌纖維和脈管系統(tǒng)的破裂，最終出現(xiàn)瘢痕修復。本研究以大鼠骨骼肌急性中度損傷模型為研究對象，突出動物自身的運動修復，在修復中恢復損傷部位的正常功能，主要包括肌力和關節(jié)度的恢復。本研究運用HE染色，Western Blot檢測肌組織NADH還原酶蛋白量，實時熒光PCR檢測肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA表達量，研究了跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合干預對骨骼肌急性損傷修復過程NADH還原酶，及肌衛(wèi)星細胞NO／HGF／c-Met通路的影響。本實驗發(fā)現(xiàn)，經過4周的跑臺運動訓練和按摩介入治療，按摩組C組、跑臺組D組、混合組E組，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA表達量，肌組織NADH還原酶蛋白量均比自然恢復組B組高，且具有極顯著性差異（P＜0.01）；混合組與按摩組、跑臺組比較，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA表達量、肌組織NADH還原酶蛋白量更高，且具有極顯著差異（P＜0.01）；跑臺組與按摩組比較，骨骼肌肌衛(wèi)星細胞中nNOS、HGF mRNA表達量更高，且具有極顯著差異（P＜0.01），肌組織NADH還原酶蛋白量也比按摩組高，且具有顯著差異（P＜0.05）。這說明，聯(lián)合治療更能有效地提高肌組織中nNOS、HGF mRNA表達量、肌組織NADH還原酶，通過提高肌組織NADH還原酶的量，增強線粒體的呼吸作用，產生更多的ATP，改善肌膜K＋-Na＋-ATPase的活性，調節(jié)NA＋-K＋的交換，Ca2＋的轉運，減輕Ca2＋超載，減少活性氧類物質累積，減輕線粒體結構的破壞以及線粒體膜、肌膜的損傷，減少炎癥細胞的聚集，減少炎癥因子的分泌，增加成肌細胞趨化因子和促分裂因子的分泌，從而阻止了炎癥的發(fā)展、減少了細胞的損傷、死亡，促進了肌前體細胞的激活、增生、分化的再生修復過程；另一方面，聯(lián)合治療可以明顯提高nNOS、HGF mRNA表達量，提高了肌組織內NOS的產生，促進肌細胞產生更多的NO，通過NO介導的NO／HGF／c-Met信號通路，激活更多肌衛(wèi)星細胞，進而有更多的肌衛(wèi)星細胞增殖、增生、分化、融合成肌管，形成更多肌纖維，增加修復的速度。聯(lián)合干預比單一手段干預能更好地阻止炎癥的發(fā)展及促進后期骨骼肌損傷的修復速度，在骨骼肌損傷修復的整個過程中都發(fā)揮著重要作用。跑臺運動訓練與按摩相比，前者在阻止炎癥的發(fā)展及促進后期骨骼肌損傷的修復速度的效果上好于后者。總之，聯(lián)合治療能有效阻止骨骼肌急性損傷后早期炎癥的發(fā)展，促進和提高骨骼肌損傷后肌衛(wèi)星細胞的再生修復過程。

4 結論

在骨骼肌急性損傷修復過程中，跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合作用比單獨的跑臺運動訓練或按摩干預能更有效地提高骨骼肌中NADH還原酶蛋白量及NOS、HGF mRNA表達量，能提高機體能量代謝水平，有效阻止骨骼肌急性損傷后早期炎癥的發(fā)展，促進和提高骨骼肌損傷后肌衛(wèi)星細胞的再生修復過程，在骨骼肌損傷修復的整個過程中發(fā)揮著重要作用。

本研究進一步完善了按摩對骨骼肌損傷修復過程中細胞內修復相關因子的作用機制的證據鏈，為臨床上進行跑臺運動訓練與按摩聯(lián)合干預治療骨骼肌急性損傷提供了一定的依據。

5 研究展望

最新的研究發(fā)現(xiàn)，在骨骼肌損傷中，超早期介入按摩比晚期介入按摩更有利于恢復肌肉功能和調節(jié)炎癥細胞浸潤［21］。在未來的研究中，本研究團隊將圍繞超早期介入按摩對骨骼肌急性損傷修復過程中細胞膜修復的影響機制展開研究，進一步完善按摩對于骨骼肌損傷修復的作用機制。

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