孔雀石綠光度法測定阿魏酸鈉

孫芳芳， 譚建紅, 龐向東, 江 虹

(長江師范學院化學化工學院，重慶 408100)

阿魏酸屬酚酸類化合物，普遍存在于當歸、川芎、蜂膠、酸棗仁等中藥材中，它具有活血化瘀、抗血小板聚集、抗血栓形成，保護心肌，抗脂質(zhì)過氧化和提高機體免疫功能等作用。臨床上常用其鈉鹽，主要用于心、腦血管疾病和白細胞、血小板減少等的治療。目前，測定阿魏酸鈉含量的方法主要是高效液相色譜法[1 - 3]，另外也有瑞利散射法[4]、流動注射化學發(fā)光法[5]、熒光法[6]、紫外分光光度法[7]等的報道。這些方法中，有的存在儀器昂貴不易普及，或是操作繁瑣、費時，不能滿足急檢的需要，或是靈敏度較低等缺點。而可見分光光度法操作簡便、快速、有較高靈敏度，迄今未見用可見分光光度法測定阿魏酸鈉的報道，因此用可見吸收光譜法研究阿魏酸鈉含量的測定有一定意義。

實驗發(fā)現(xiàn)，在pH=4.5 的酸性條件下，阿魏酸能與堿性染料孔雀石綠發(fā)生顯色反應，生成具有明顯正吸收峰和負吸收峰的綠色離子締合物，最大正吸收和負吸收波長分別位于612 nm 和650 nm，其表觀摩爾吸光系數(shù)分別為3.95×104L/(mol·cm)和1.20×104L/(mol·cm)，阿魏酸在一定濃度范圍內(nèi)與體系的吸光度呈良好的線性關(guān)系。方法用于實際樣品的測定，結(jié)果滿意。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

U-4100型紫外-可見-近紅外分光光度計(日本，日立公司)；S20型酸度計(梅特勒托利多儀器(上海)有限公司)。

阿魏酸(FA，中國藥品生物制品檢定所)標準溶液：19.42 mg/L，冰箱4 ℃保存。孔雀石綠(MAG，上海標本模型廠)溶液：1.0×10-3mol/L、 1.0×10-4mol/L。B -R緩沖溶液：0.01 mol/L H3PO4、H3BO3和HAc與0.2 mol/L NaOH溶液適當混合，配成一系列不同pH 的溶液,pH用酸度計校正。所用試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

1.2 實驗方法

于10 mL具塞比色管中，準確加入2.0 mL 1.0×10-3mol/L的孔雀石綠溶液，再依次加入1.0 mL pH=4.5 B -R緩沖溶液和一定量的19.42 mg/L 阿魏酸標準溶液，用水稀釋至刻度，搖勻，室溫下，10 min后以試劑空白作參比，于分光光度計上，在最大正吸收或負吸收波長處用1 cm比色皿測其吸光度A。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

圖1 阿魏酸與孔雀石綠的吸收光譜 Fig.1 The absorption spectra of ferulic acid with malachite green1.FA (1.94 mg/L),against water; 2.MAG (2.0×10-5 mol/L),against water; 3-6.FA (0.97,1.94,2.91,3.88 mg/L)-MAG (2.0×10-4 mol/L),against reagent blank；pH=4.5.

從圖1可知：阿魏酸(FA)在可見光區(qū)幾乎無吸收(曲線1)，孔雀石綠(MAG)溶液在可見光區(qū)產(chǎn)生強烈吸收，其最大吸收波長位于616 nm(曲線2)。當在孔雀石綠溶液中加入阿魏酸溶液后，由于孔雀石綠在溶液中以陽離子形式存在，能與阿魏酸以靜電引力形成疏水性的綠色離子締合物，且在570～700 nm 范圍內(nèi)，產(chǎn)生兩個大小不等的正吸收峰和一個明顯的負吸收峰。最大正吸收波長位于612 nm，紫移4 nm，最大負吸收波長位于650 nm，紅移34 nm。實驗表明該離子締合物在可見光區(qū)的吸光度與一定濃度范圍的阿魏酸呈良好的線性關(guān)系(曲線3～6)。故正、負吸收均可用于阿魏酸鈉的定量分析。

2.2 反應介質(zhì)及用量的選擇

室溫下，考察了HAc-NaAc、B -R、Tris-HCl緩沖介質(zhì)對體系吸光度的影響。結(jié)果表明：用B -R 緩沖溶液效果較好，適宜的pH范圍為3.6～5.5。實驗用pH=4.5 的B -R 緩沖溶液，用量以1.0 mL 為宜。

2.3 顯色劑溶液濃度的選擇

室溫下，考察了不同濃度的孔雀石綠溶液對體系吸光度的影響。結(jié)果表明：孔雀石綠溶液在1.8×10-4～2.5×10-4mol/L濃度范圍內(nèi)，體系的吸光度較大，實驗選用1.0×10-3mol/L 孔雀石綠溶液2.0 mL。

2.4 試劑加入順序的影響

室溫下，考察了B -R、FA和MAG在不同加入順序時對體系吸光度的影響。結(jié)果表明：按實驗方法中的試劑加入順序最佳。

2.5 反應時間的選擇

在最大正吸收或負吸收波長處，每間隔一定時間測量體系的吸光度。結(jié)果表明：室溫下，阿魏酸與孔雀石綠生成的締合物在 10 min內(nèi)即可形成，且至少穩(wěn)定1 h。實驗選擇在反應10 min后測定。

2.6 標準曲線及靈敏度

按實驗方法配制標準系列溶液，在最大正吸收波長或最大負吸收波長處測定吸光度(A)，并對阿魏酸濃度(c)制作標準曲線，其線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及表觀摩爾吸光系數(shù)ε列于表1。

表1 標準曲線相關(guān)參數(shù)

2.7 方法的選擇性

在選定條件下，考察了612 nm波長處某些常見物質(zhì)對測定1.94 mg/L阿魏酸的影響。結(jié)果表明以下物質(zhì)不干擾測定：100倍的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘氨酸、谷氨酸、L-組氨酸、L-色氨酸、L-亮氨酸、NaCl、KCl；20倍的KNO3、Na2SO3、Na2S2O3、Mg(NO3)2、Pb(NO3)2、CaCl2、BaCl2；5倍的KBr、尿素、抗壞血酸?？梢?，方法具有良好的選擇性。

2.8 樣品測定及加標回收試驗

分別取注射用阿魏酸鈉1支和阿魏酸鈉藥片5片，用水溶解后稀釋至100 mL，再各取該稀釋液1.0 mL 分別稀釋至100 mL，即為待測液。分別取阿魏酸鈉藥片待測液和注射用阿魏酸鈉待測液各1.0 mL，按實驗方法各平行配制6份，在最大正吸收波長處測其吸光度，同時作加標回收試驗，結(jié)果見表2。

表2 樣品分析結(jié)果及回收試驗(n=6)

3 結(jié)論

利用孔雀石綠與阿魏酸的顯色反應可以簡便、快速、準確地測定藥物中阿魏酸鈉的含量。