白化喜馬拉雅旱獺自然感染體外寄生蟲監(jiān)測與凈化效果評價

劉海青, 吳克梅, 張靜宵, 劉玉芳, 范　微, 劉巴睿, 陶元清（青海省地方病預(yù)防控制所, 西寧　811602）

白化喜馬拉雅旱獺自然感染體外寄生蟲監(jiān)測與凈化效果評價

劉海青, 吳克梅, 張靜宵, 劉玉芳, 范微, 劉巴睿, 陶元清
（青海省地方病預(yù)防控制所, 西寧811602）

目的調(diào)查白化旱獺體外寄生蟲的自然感染狀況, 為建立白化旱獺質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法對野生白化旱獺21只和白化旱獺原產(chǎn)地混生的正常毛色旱獺30只活體法檢測體外寄生蟲, 同時采用透明膠紙粘取法、手術(shù)刮取法、逆毛刷蟲法、肉眼觀察法和鏡檢等5種方法, 觀察蟲體和蟲卵。結(jié)果野生白化喜馬拉雅旱獺和正常毛色旱獺自然感染體外寄生蟲感染率分別為： 斧形蓋蚤C.dolabris（85.7%/93.3%）、謝氏山蚤O.silantiewi（90.1%/90.0%）、腹竇纖蚤深廣亞種R.Li ventricos（71.4%/96.7%）、古北擬額虱L.laeviusculus（85.7%/86.7%）和草原硬蜱I.crenulatus （100%/9.7%），白化和正常毛色旱獺體外寄生蟲感染情況進行了統(tǒng)計學(xué)檢驗，兩者除腹竇纖蚤深廣亞種（P＜0.05）感染率有顯著性差異以外，其余4種體外寄生蟲感染率無顯著性差異； 應(yīng)用溴氰菊酯和伊維菌素注射液進行了藥物驅(qū)治和凈化。結(jié)論監(jiān)測結(jié)果和驅(qū)治方法可作為白化喜馬拉雅旱獺實驗動物化的寄生蟲質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)和凈化方法。

喜馬拉雅旱獺； 白化； 體外寄生蟲； 凈化

喜馬拉雅旱獺（Marmota himalayana）屬嚙齒目（Rodentia）松鼠科（Sciuridae）旱獺屬（Marmota）的大型地棲性嚙齒動物，為青藏高原特有種。近年來該動物在生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用制作人類疾病的動物模型的研究越來越深入。2008年6月和2009年7月分別在青海海西烏蘭縣和海北門源縣鼠疫監(jiān)測工作時發(fā)現(xiàn)2個白化旱獺家族，活套法共捕捉8只白化旱獺，經(jīng)衛(wèi)生檢疫證明為健康動物后運至西寧進行人工飼養(yǎng)和繁殖取得成功并開始了白化旱獺的實驗動物化研究工作。2013年5月在青海海北門源縣的白化旱獺開展了種群擴種工作。其間，根據(jù)野生動物實驗動物化的質(zhì)量控制要求，對該地區(qū)的白化和正常毛色旱獺進行了一系列的質(zhì)量檢測和控制工作。實驗動物的寄生蟲學(xué)質(zhì)量是實驗動物質(zhì)量控制的重要內(nèi)容［1］，作者根據(jù)《實驗動物體外寄生蟲檢測方法》（GB/T18448.1-2001）［2］的規(guī)定和參照家畜寄生蟲檢查和防治方法［3］進行了體外寄生蟲檢測和控制工作，現(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1研究地點

研究地點位于青海省海北自治州門源縣仙米林區(qū) （東徑102°05'～102°12', 北緯37°03'～37°10'）,屬大陸性寒濕、半濕潤氣候帶。海拔2500～3 400 m。主要河流是討拉河。年平均氣溫0℃以上，其中7月份最熱, 平均氣溫2℃, 1月份最冷, 平均氣溫在-12.6℃左右, 0℃以下有五個月。年降雨量570 mm, 約90 % 集中在4～9月份，其中7月份最多, 占年降雨量30 %左右。夏秋濕潤，平均相對濕度70%以上，冬季較干燥，平均相對濕度為52%。6月中旬至8月中旬為無霜期。該地區(qū)土壤陰坡以山地淋溶褐色土、山地型褐色土及山地碳酸鹽褐色土為主。植被有蘚類、草莓、寥類、蕨類等； 陽坡以山地森林草原土、山地草甸草原土和山地典型褐色土為主,植被主要是苔草、寥科類和禾本科植物。

1.2研究對象

本研究所有動物圈套法活體捕自研究地點-青海省海北州門源縣仙米地區(qū)討拉大溝內(nèi)，數(shù)量總計51只，由白化旱獺21只（12♀9♂）和白化旱獺原產(chǎn)地混生的正常毛色旱獺30只（14♀16♂）組成，旱獺年齡為1～4周歲。

1.3試驗藥物

伊維菌素注射液，西鄉(xiāng)長江動物藥品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，［批號］獸藥字（2007）270151126，生產(chǎn)批號120301，主要成分為伊維菌素B1（B1a+B1b）；綠島白鷹牌殺蟲氣霧劑，臺州綠島化妝品有限公司生產(chǎn)，農(nóng)藥生產(chǎn)批號： HNP33106-I1520，生產(chǎn)批號L0515，有效成分： 胺聚酯0.3%，氯菊酯0.5%，氯氰菊酯0.1%。

1.4調(diào)查方法

在青藏高原5月份為喜馬拉雅旱獺體外寄生蟲攜帶指數(shù)最高的時段［2］，為了較全面地掌握白化旱獺體外寄生蟲攜帶情況, 作者于2014年5月1日至5月27日, 在調(diào)查地區(qū)圈套法捕捉白化旱獺21只, 正常毛色旱獺30只，按照動物體外寄生蟲檢查方法和有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)［3,4］, 采用透明膠紙粘取法、手術(shù)刮取法、逆毛刷蟲法、肉眼觀察法和鏡檢等5種方法逐一檢查每只動物, 采集的蟲體和蟲卵分類計數(shù)。蟲體鑒定到種, 分離的蟲體在體積比70%乙醇中固定保存, 蟲卵制片保存。五種方法中任何一種方法檢驗結(jié)果為陽性的則該樣品檢測結(jié)果視為陽性。

1.5驅(qū)蟲試驗方法

工作人員穿著防蚤服，將捕獲的野生喜馬拉雅旱獺現(xiàn)場按體質(zhì)量每只0.6 mg/kg劑量后肢肌肉注射氯氨酮麻醉劑進行麻醉后，放置于檢蚤盆，用殺蟲氣霧劑對動物體表均勻噴霧5～10 s，紙板蓋住整個檢蚤盆10 s，使氣霧中的藥物完全作用于體外寄生蟲，然后取開紙板，對動物通體進行體外寄生蟲的檢查，手術(shù)刮取、逆毛刷蟲和肉眼觀察法收集動物體表的蟲體，透明膠紙粘取體毛收集蟲卵，并收集檢蚤盆中已熏殺的蟲體［5］； 每只旱獺后肢皮下按體重0.03 mL/kg注射伊維菌素注射液后，動物飼養(yǎng)于飼養(yǎng)籠具中，殺蟲氣霧劑噴霧飼養(yǎng)環(huán)境（地面和籠具）。然后于14 d、21 d和35 d加強驅(qū)蟲共3次, 方法同第一次驅(qū)蟲方法，檢查收集蟲體和蟲卵，分類計數(shù)。同時觀察動物飲食、飲水情況和其它異常行為。在動物捕捉、檢疫隔離、轉(zhuǎn)運、人工飼養(yǎng)等各個環(huán)節(jié)，采取綜合防蟲措施，如消滅設(shè)施周圍環(huán)境的野鼠、昆蟲，特別做好運輸工具、飼養(yǎng)籠具、飼料、飲水和墊料的管理，旱獺和設(shè)備實行全進全出制，避免交叉污染。

1.6數(shù)據(jù)分析

檢測結(jié)果按照毛色分組, 結(jié)果以率（%）表示。進行獨立樣本的差異性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1檢測結(jié)果

本次調(diào)查共從野生白化喜馬拉雅旱獺和正常毛色旱獺體外檢出5種體外寄生蟲，分別為斧形蓋蚤C.dolabris、謝氏山蚤O.silantiewi、腹竇纖蚤深廣亞種R.Li ventricos、古北擬額虱L.laeviusculus和草原硬蜱I.crenulatus等5種體外寄生蟲（圖1）。白化旱獺和原產(chǎn)地混生的正常毛色旱獺體外寄生蟲感染情況進行了統(tǒng)計學(xué)檢驗，兩者除腹竇纖蚤深廣亞種（P＜0.05）感染率有顯著性差異以外，其余4種體外寄生蟲感染率無顯著性差異（表1）。

2.2驅(qū)蟲結(jié)果與效果評價

在研究期間共進行了4次驅(qū)蟲, 每次驅(qū)蟲前動物麻醉后, 5種方法同時檢測動物體表寄生蟲蟲體和蟲卵, 分類計數(shù), 計算陽性檢出率； 動物的健康狀況良好, 采食和飲水正常, 外貌、精神和行為正常。經(jīng)過4次驅(qū)蟲, 35 d后51只動物體外寄生蟲檢測均為陰性（表2）。

圖1　白化旱獺體外寄生蟲

表 1　白化和正常毛色旱獺體外寄生蟲陽性檢出率　　%Table 1　Epizoic parasites infection of　wild albino and normal Marmota himalayana

3　討論

本次野生白化和正常毛色旱獺體外寄生蟲調(diào)查共檢出斧形蓋蚤C.dolabris、謝氏山蚤O.silantiewi、腹竇纖蚤深廣亞種R.Li ventricos、古北擬額虱L.laeviusculus和草原硬蜱I.crenulatus等5種體外寄生蟲，5種蟲體的感染率達85%以上，與青海省其它報道一致［6-9］。旱獺體外寄生蟲在危害動物自身健康的同時還是某些動物疾病和人獸共患病病原體的傳播者（或媒介）［10］，在動物流行病學(xué)和公共衛(wèi)生上具有重要意義。作者開展白化喜馬拉雅旱獺的培育研究，就是要實現(xiàn)白化旱獺的實驗動物化目標(biāo)。因此，必須按照實驗動物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，開展旱獺寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制，而且要實現(xiàn)動物不攜帶任何寄生蟲的要求。在目前尚未掌握旱獺剖宮產(chǎn)等生物凈化技術(shù)的情況下，應(yīng)用高效、低毒、低殘留的驅(qū)蟲劑, 依據(jù)動物攜帶體外寄生蟲的生活史長短［11］，結(jié)合蟲卵發(fā)育成幼蟲的時間長度和藥物滯留有效期，制定多次驅(qū)蟲計劃，同時強化對旱獺環(huán)境和飼養(yǎng)設(shè)備的滅蟲滅鼠管理，探索建立了旱獺體外寄生蟲質(zhì)量綜合控制技術(shù)，實際應(yīng)用中動物無不良反應(yīng)，驅(qū)蟲效果可靠，值得推廣應(yīng)用。

表 2　旱獺體外寄生蟲各次凈化效果Table 2　Purifying efficiency for epizoic parasites in wild albino and normal Marmota himalayana　　　　　　%

［1］蘇衛(wèi).實驗動物寄生蟲質(zhì)量控制［J］. 中國實驗動物學(xué)雜志, 1996, 6（1）：60.

［2］張廣登. 喜馬拉雅旱獺寄生蚤的調(diào)查［J］. 中國媒介生物學(xué)及控制雜志, 1990, 1（12）：391.

［3］GB/T18448.1-2001. 實驗動物體外寄生蟲檢測方法［S］. 2001.

［4］北京農(nóng)業(yè)大學(xué). 家畜寄生蟲學(xué)［M］. 北京： 農(nóng)業(yè)出版社, 1989：454-478.

［5］王治軍, 岳珊瓏, 王國麗, 等. 增效百蟲靈、溴氰菊酯對喜馬拉雅旱獺寄生蚤及Ⅲ齡幼蟲的觸殺效果［J］. 中國媒介生物學(xué)及控制雜志, 1993, 4（2）：145-1477.

［6］王心娥. 青海嚙齒動物體外寄生蟲調(diào)查一： 旱獺體外寄生蟲［J］. 蘭州大學(xué)學(xué)報∶自然科學(xué)版, 1960, 4（生物學(xué)?？?9-107.

［7］王心娥. 青海海北自治州嚙齒動物體外寄生蟲調(diào)查［J］. 蘭州大學(xué)學(xué)報∶自然科學(xué)版, 1981, 18（4）：133-135.

［8］蔡進忠, 李春花. 青海省畜禽寄生蟲蟲種資源與分布［J］.中國動物傳染病學(xué)報, 2010, 18（1）：64-67.

［9］范微, 王忠東. 人工飼養(yǎng)條件下喜馬拉雅旱獺寄生蟲病綜合防治［J］. 四川動物, 2009, 28（5）：750-752.

［10］ 王祖鄖, 魏柏青, 張珊瑚, 等. 中國自然感染鼠疫桿菌的蚤、蜱、螨與虱類［J］. 人獸共患病雜志, 2007, 23（3）：307-309.

［11］ 肖柏林, 董桂琴, 張全芬. 謝氏山蚤生活史的初步觀察［J］.應(yīng)用昆蟲學(xué)報, 1986, 29（5）：213-215.

A Survey on Epizoic Parasites Infection and Evaluations of Purification Techniques in Albino Marmota himalayana

LIU Hai-qing, WU Ke-mei, ZHANG Jing-xiao, LIU Yu-fang, FAN Wei, LIU Ba-rui, TAO Yuan-qing
（Qinghai Institute for Endemic Disease Prevention and Control， Xining 811602， China）

ObjectiveTo investigate the epizoic parasites infection in albino Marmota himalayan, and providebasis for setting up the quality standard of Marmota himalayana. MethodsTwenty-one wild albinism and 30 wild normal Marmota himalayana from the same origin were detected by the method as transparent tape, operation scraping, inverse brush bug and naked eye observation for epizoic parasites of each animal, then detected the epizoic parasites and eggs under platoscope and microscope. ResultsThe natural infectious rate of the epizoic parasites in the wild albinism and the normal Marmota Himalayana were respectively C.dolabris （85.7%/93.3%）, O.silantiewi （90.1%/90.0%）, R.Liventricos （71.4%/96.7%）, L.laeviusculus （85.7%/86.7%） and I.crenulatus （100%/9.7%）, but the infection rate of R.Li ventricos has significant difference （P＜0.05）, and there was no significant difference in the rest of the four kinds of the epizoic parasite infection rate between the two groups； The efficay is significant by using Deltamethrin and Ivermectin injection for purification. ConclusionsThe monitoring results and the cure method can be used as an index of animal parasite quality for albino Himalayan marmot.

Albino； Marmota himalayana； Epizoic Parasite； Purification techniques

Q95-33

A

1674-5817（2015）05-0403-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.05.012

2015-03-09

國家自然科學(xué)地區(qū)基金（31160436）

劉海青（1971-）, 女, 主管醫(yī)師, 主要研究方向： 醫(yī)學(xué)檢驗。E-mail： 415328482@qq.com

陶元清（1971-）, 男, 副研究員。主要研究方向： 實驗動物管理和動物質(zhì)量控制及野生動物實驗動物化研究。E-mail： tyq001@126.com