應(yīng)用薄層色譜法對防風(fēng)中藥材檢測標準的研究

李雪真，許彬

（1.沈陽市化工學(xué)校，遼寧沈陽110000；2.遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，遼寧沈陽110016）

應(yīng)用薄層色譜法對防風(fēng)中藥材檢測標準的研究

李雪真1，許彬2

（1.沈陽市化工學(xué)校，遼寧沈陽110000；2.遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，遼寧沈陽110016）

為了使防風(fēng)散檢測方法更為完善，本實驗對防風(fēng)散中防風(fēng)藥材的檢測方法進行了研究。檢測方法采用薄層色譜法。本實驗各項目設(shè)計科學(xué)合理，防風(fēng)藥材的薄層鑒別主斑點不受方中其他藥材組分的干擾，專屬性強，重現(xiàn)性好，檢測快速準確。

防風(fēng)散；防風(fēng)藥材；薄層色譜法

防風(fēng)散收載于《中國獸藥典》2010年版二部，由防風(fēng)、獨活、連翹、升麻、柴胡、淡附片、烏藥、羌活、當歸、甘草、葛根、山藥十二味中藥組成，具有祛風(fēng)濕、調(diào)氣血之功效，主治大家畜腰跨風(fēng)濕之癥[1]。目前全國有近百家獸藥生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)該產(chǎn)品。防風(fēng)散現(xiàn)行質(zhì)量標準，其鑒別項為顯微鑒別，鑒別防風(fēng)、連翹、升麻、柴胡、羌活、當歸、山藥七味藥材，無其他定性與定量檢測方法。且防風(fēng)為處方中君藥，制劑中防風(fēng)性辛、甘，微溫，有祛風(fēng)解表、勝濕止痛的功效[2]。本文對防風(fēng)散進行薄層鑒別研究，試驗各項目設(shè)計科學(xué)合理，防風(fēng)藥材的薄層鑒別主斑點不受處方中其他藥材組分的干擾，專屬性強，重現(xiàn)性好，檢測快速準確，為防風(fēng)散的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器Linomat5半自動點樣器（瑞士Camag公司）；AG285型分析天平（Mettler Toledo儀器有限公司，感量0.000 01 g）；PB602-S型分析天平（Mettler Toledo儀器有限公司，感量0.01 g）；層析缸等。

1.2 試驗藥品、樣品與薄層板石油醚（60～ 90℃）、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、甲醇、乙醇、醋酸、硫酸等為分析純；水為蒸餾水。

組方中防風(fēng)、獨活等12味藥材,均購于丹東邊境經(jīng)濟合作區(qū)景江醫(yī)藥有限公司，執(zhí)行《中華人民共和國藥典》2010年版二部標準。藥材經(jīng)檢測符合相關(guān)規(guī)定。

薄層板：硅膠G板，青島海洋化工廠，規(guī)格100 mm×200 mm，厚度0.20～0.25 mm；活度：三色分開；批號∶20080219（使用前105℃活化30 min）。

1.3 試驗方法

1.3.1 薄層法1

1.3.1.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各4.5 g（相當于含防風(fēng)藥材0.5 g），加三氯甲烷20 mL，濃氨試液密塞，振搖10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.1.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各5 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.2 薄層法2

1.3.2.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加丙酮30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.2.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對照藥材溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各10 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠GF254

展開劑：三氯甲烷-甲醇（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（254 nm）下檢視

1.3.3 薄層法3

1.3.3.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液[3]。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.3.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各5 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠GF254

展開劑：三氯甲烷-甲醇（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（254 nm）下檢視

1.3.4 薄層法4

1.3.4.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.4.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各10 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：石油醚（60～90℃）-乙醚（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.5 薄層法5

1.3.5.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加無水乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液[4]。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.5.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各5 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：氯仿-乙酸乙酯-甲醇（10∶3∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

顯色方式：噴以10%硫酸乙醇溶液

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.6 薄層法6

1.3.6.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加丙酮40 mL，回流30 min，濾過，濾液揮去丙酮，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.6.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各6 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸-水（15∶1∶1∶2）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

顯色方式：噴以10%硫酸乙醇溶液

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.7 薄層法7

1.3.7.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加丙酮100 mL，加熱回流1 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.7.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各5 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.8 薄層法8

1.3.8.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加乙醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加石油醚（60～90℃）50 mL萃取，棄去石油醚液，取乙醇液用乙酸乙酯萃取3次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，并濃縮至1 mL，作為供試品溶液[5]。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.8.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各10 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

顯色方式：噴以10%氫氧化鈉溶液

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

1.3.9 薄層法9

1.3.9.1 溶液的制備樣品溶液制備：取自制防風(fēng)散缺防風(fēng)陰性樣品、自制防風(fēng)散、廠家樣品各9 g（相當于含防風(fēng)藥材1 g），加乙醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加乙醚15 mL，萃取2次，合并萃取液，濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：另取防風(fēng)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

1.3.9.2 點樣及展開、色譜觀察點樣量：上述對照藥材溶液、陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液各5 μL。

點樣方式：LTNOMAT5半自動點樣器點樣（點狀）

薄層板吸附劑類型：硅膠G

展開劑：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）

展開條件：溫度22℃；相對濕度50%

展距：9 cm

色譜觀察：置紫外光燈（365 nm）下檢視

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層法1試驗結(jié)果見圖1。自制樣品溶液、廠家樣品溶液，在與對照藥材色譜和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；而陰性樣品溶液在與對照藥材色譜和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，也顯相同顏色的斑點。故此方法存在陰性樣有干擾問題，未采納。

圖1 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.1 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.2 薄層法2試驗結(jié)果見圖2。陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液無主斑點，溶液展開后為條帶狀，故未采納。

2.3 薄層法3試驗結(jié)果見圖3。陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液無主斑點，溶液展開后為條帶狀，故未采納。

2.4 薄層法4試驗結(jié)果見圖4。對照藥材主斑點Rf＜0.3；陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液無主斑點，溶液展開后為條帶狀，故未采納。

圖2 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.2 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

圖3 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.3 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.5 薄層法5試驗結(jié)果見圖5。自制樣品溶液、廠家樣品溶液的主斑點位置與對照藥材色譜主斑點位置不一致；而且陰性樣品溶液在與自制樣品溶液、廠家樣品溶液色譜相應(yīng)的位置上，也顯相同顏色的斑點，故未采納。

圖4 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.4 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

圖5 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.5 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

圖6 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.6 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

圖7 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.7 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.6 薄層法6試驗結(jié)果見圖6。自制樣品溶液、廠家樣品溶液，在與對照藥材色譜和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；而陰性樣品溶液在與對照藥材色譜和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，也顯相同顏色的斑點。故此方法存在陰性樣有干擾問題，而且樣品溶液在Rf0.92位置處為條帶狀，與對照藥材色譜和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點。故未采納。

2.7 薄層法7試驗結(jié)果見圖7。陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液薄層圖譜呈條帶狀；在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點，故未采納。

2.8 薄層法8試驗結(jié)果見圖8。陰性樣品溶液、自制樣品溶液、廠家樣品溶液薄層圖譜呈條帶狀；在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點，故未采納。

圖8 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.8 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

圖9 防風(fēng)散中防風(fēng)薄層色譜鑒別研究色譜圖Fig.9 TLC of Saposhnikoviae in Fangfeng powder

2.9 薄層法9試驗結(jié)果見圖9。自制樣品溶液、廠家樣品溶液，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且主斑點在Rf 0.3～0.7；陰性樣品溶液在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點，防風(fēng)藥材的薄層鑒別主斑點不受方中其它藥材組分的干擾，其方法可行。

3 討論和結(jié)論

為了使防風(fēng)散檢測方法更為完善，本試驗對防風(fēng)散中防風(fēng)藥材的檢測標準進行了方法學(xué)研究。依處方進行取樣量折算，在薄層色譜鑒別中采用自配缺防風(fēng)的陰性樣品、防風(fēng)對照藥材、自制樣品和廠家樣品用同一方法，在同一色譜條件下進行試驗[6-7]，薄層方法9中，防風(fēng)藥材的薄層鑒別主斑點不受方中其他藥材組分的干擾，其方法可行，專屬性強，重現(xiàn)性好，并且描述準確。本薄層色譜方法對制定防風(fēng)散的質(zhì)量標準具有參考價值。

[1]中國獸藥典2010年二部[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2]中藥大辭典[M].上?？萍汲霭嫔?1995.

[3]孫景，楊繼彪，張小龍，石磊.止咳化痰丸中黃芩和防風(fēng)的薄層鑒別[J]新疆中醫(yī)藥，2014，32（5）：67-68.

[4]黃蘭芷，王曙賓.連防感冒顆粒中防風(fēng)薄層鑒別方法改進[J]中南藥學(xué)，2007，4（2）：149-150.

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[6]王建華，于磊昇，樓之岑.防風(fēng)類藥材的薄層色譜鑒別[J].中國藥學(xué)雜志，1990，04：221-222.

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Studies on testing standards for Saposhnikoviae application of thin-layer chromatography

Li Xuezhen1,Xu Bin2

(1.Shenyang Chemical Industry School,Liaoning Shenyang 110000; 2.Liaoning Province Quality Inspection and Test center for Veterinary Drug feed and Animal product，Liaoning Shenyang 110016)

In order to make the Fangfeng powder detection method more perfect,the detection method of Fangfeng powder in the experiment of Saposhnikoviae was studied.Detection method using thin-layer chromatography.In this experiment,the project design is scientific and reasonable, the main spot of thin-layer chromatography identification of Saposhnikoviae is not affected by other medicine components of interference,strong specificity,good reproducibility,rapid and accurate detection.

Fangfeng powder;Saposhnikoviae;thin layer chromatography

S858.23

B

1672-9692(2015)03-0016-06

2015-02-19

李雪真（1964-），女，高級講師，研究方向為應(yīng)用化學(xué)。