四數(shù)九里香組織培養(yǎng)（簡(jiǎn)報(bào)）

林　茜，高營(yíng)營(yíng)，韓曉華，張　露，黃天琨，林貴美

（1.廣西植物組培苗有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 生物技術(shù)研究所，廣西 南寧 530007）

四數(shù)九里香組織培養(yǎng)（簡(jiǎn)報(bào)）

林茜1，2，高營(yíng)營(yíng)1，韓曉華1，張露1，黃天琨1，林貴美1

（1.廣西植物組培苗有限公司，廣西 南寧 530007；2.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院 生物技術(shù)研究所，廣西 南寧 530007）

以四數(shù)九里香新生帶腋芽莖段為外植體，研究取材時(shí)期、6-BA濃度及生長(zhǎng)素種類對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響，探討不同濃度活性炭對(duì)外植體褐化的影響。結(jié)果表明，四數(shù)九里香組織培養(yǎng)適宜的取材時(shí)期為4月；外植體腋芽誘導(dǎo)率在6-BA濃度為2.5 mg·L-1時(shí)表現(xiàn)較高；IBA是較適宜外植體生長(zhǎng)的生長(zhǎng)素；活性炭濃度為1.5 g·L-1可有效減輕外植體褐化；組織培養(yǎng)適宜的啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

四數(shù)九里香；組織培養(yǎng)；生長(zhǎng)素；活性炭；褐化

1　材料

四數(shù)九里香Murraya tetramera新生帶腋芽莖段。

2　方法

2.1取材時(shí)期分別于2013年3、4、5、8、11月中旬進(jìn)行取材試驗(yàn)。

2.2外植體消毒于連續(xù)晴朗的午后，取生長(zhǎng)健壯植株的新生莖段，分割成約2 cm大小片段，以75%酒精表面消毒5 s后轉(zhuǎn)入10%次氯酸鈉溶液消毒2 min，無(wú)菌水沖洗3次，最后置于0.1%氯化汞中消毒6 min，無(wú)菌水沖洗4次，在無(wú)菌濾紙上將莖段表面的水分吸干，將莖段切成1 cm左右以備接種。

2.3腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)外植體初代接種于MS + 6-BA 0.5 mg·L-1（單位下同） + IBA 0.1+活性炭0.5 g·L-1+ 蔗糖30 g·L-1培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)所有培養(yǎng)基均含蔗糖30 g·L-1，光照時(shí)間14 h·d-1，培養(yǎng)15 d左右。

2.46-BA濃度梯度試驗(yàn)將誘導(dǎo)良好、長(zhǎng)勢(shì)一致的帶腋芽莖段分別轉(zhuǎn)入附加不同濃度6-BA （0.5、1.5、2.5、3.5）的MS + IBA 0.1 + GA30.3 + 活性炭0.5 g·L-1培養(yǎng)基中。每濃度試驗(yàn)20瓶，培養(yǎng)30 d。

2.5生長(zhǎng)素種類試驗(yàn)挑選長(zhǎng)勢(shì)較好材料分別轉(zhuǎn)入下面培養(yǎng)基：MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + NAA 0.1 +活性炭0.5 g·L-1；MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + IBA 0.1 + 活性炭0.5 g·L-1。每試驗(yàn)20瓶，培養(yǎng)30 d。

2.6不同濃度活性炭試驗(yàn)以MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度活性炭（0.5、1.0、1.5 g·L-1）進(jìn)行抑制褐化試驗(yàn)，每濃度試驗(yàn)20瓶，培養(yǎng)15 d，觀察不同濃度活性炭對(duì)外植體褐化的影響。

3　結(jié)果與分析

3.1不同取材時(shí)期對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響不同月份取材在相同的處理方法及培養(yǎng)條件下培養(yǎng)7 d左右，大部分嫩莖段的腋芽誘導(dǎo)效果良好，誘導(dǎo)率達(dá)90%以上，但之后生長(zhǎng)速度出現(xiàn)較明顯差異（表1）。4月處理的外植體腋芽誘導(dǎo)后生長(zhǎng)速度較快，培養(yǎng)30 d外植體新生部分長(zhǎng)達(dá)2.5 cm，生長(zhǎng)較好。其他月份取材的外植體生長(zhǎng)較差，30 d時(shí)新生長(zhǎng)度僅為1.0 cm左右。說(shuō)明4月天氣回暖后，室外植株生理狀態(tài)最好，取材處理后，在培養(yǎng)基上恢復(fù)生長(zhǎng)速度快，長(zhǎng)勢(shì)好。因此，四數(shù)九里香組織培養(yǎng)較適宜的取材時(shí)間為4月。

表1　不同取材時(shí)期對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響Table 1　Effects of different sampling time on the explants growth

3.2不同 6-BA濃度對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響由表 2可知，外植體在含不同濃度 6-BA的培養(yǎng)基上腋芽均表現(xiàn)伸長(zhǎng)生長(zhǎng)趨勢(shì)，30 d時(shí)含2.5 mg·L-16-BA培養(yǎng)基上外植體的新生嫩莖段伸長(zhǎng)最明顯，新生部分最長(zhǎng)達(dá)4.0 cm，增殖系數(shù)約為2.5，6-BA濃度低于或高于該濃度，伸長(zhǎng)長(zhǎng)度均劣之。

表2　不同6-BA濃度對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響Table 2　Effects of different 6-BA concentration on the explants growth

3.3不同生長(zhǎng)素種類對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)表明，外植體在兩類培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度有差別，在含有生長(zhǎng)素IBA培養(yǎng)基上的出芽數(shù)與芽生長(zhǎng)長(zhǎng)度均優(yōu)于含生長(zhǎng)素 NAA的培養(yǎng)基（表3）。說(shuō)明IBA是四數(shù)九里香組織培養(yǎng)較適宜的生長(zhǎng)素。

3.4不同濃度活性炭（AC）對(duì)外植體褐化的影響試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在四數(shù)九里香組織培養(yǎng)的各個(gè)階段均有褐化現(xiàn)象發(fā)生，嚴(yán)重阻礙外植體正常生長(zhǎng)。通過(guò)活性炭濃度梯度試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)活性炭濃度為0.5或1.0 g·L-1時(shí)對(duì)褐化的發(fā)生幾乎無(wú)抑制作用，而當(dāng)AC濃度調(diào)高到1.5 g·L-1時(shí)，對(duì)褐化抑制作用較明顯（表4）。

表3　不同生長(zhǎng)素種類對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響Table 3　Effect of different types of auxins on the explants growth

4　結(jié)語(yǔ)

四數(shù)九里香Murraya tetramera為蕓香科九里香屬植物，落葉小喬木，葉有濃郁香氣。生長(zhǎng)于廣西百色、德保和云南東部硯山、富寧、文山、西疇，常見(jiàn)于石灰?guī)r山地山頂陽(yáng)光充足地帶［1］。以根、葉入藥，辛、微苦、性微溫，可鮮用或陰干備用，具祛風(fēng)解表、行氣止痛、活血散淤、抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱之功效，用于治療感冒發(fā)熱、支氣管炎、哮喘、胃痛、風(fēng)濕痹痛、跌打淤腫、皮膚搔癢、毒蛇咬傷、濕疹、瘧疾等癥［2—3］。但多年來(lái)廣西石灰?guī)r山地的物種、群體及其棲息環(huán)境遭人為或自然的破壞，導(dǎo)致資源萎縮、物種瀕危，甚至呈滅絕趨勢(shì)。通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)廣西石灰?guī)r特有珍稀藥用植物進(jìn)行組培快繁，不僅可達(dá)到良種保存的目的，且可確保藥源的供應(yīng)量。近年來(lái)，對(duì)四數(shù)九里香進(jìn)行組織培養(yǎng)的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本文根據(jù)木本植物及蕓香科植物組織培養(yǎng)的特點(diǎn)，借鑒相關(guān)成功培養(yǎng)基配方，對(duì)四數(shù)九里香組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方進(jìn)行針對(duì)性研究［4—8］。結(jié)果表明，4月為四數(shù)九里香外植體最佳取材時(shí)期，組織培養(yǎng)適宜培養(yǎng)基為MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1 + GA30.3 + 蔗糖30 g·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

表4　不同活性炭濃度對(duì)外植體褐化的影響Table 4　Effect of different AC concentration on the browning of explants

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Tissue Culture of Murraya tetramera

LIN Qian1，2， GAO Ying-ying1， HAN Xiao-hua1， ZHANG Lu1， HUANG Tian-kun1， LIN Gui-mei1
（1.Guangxi Plant Tissue Culture Co. Ltd.， Nanning， 530007， Guangxi China； 2.Biotechnology Institute of Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning 530007， Guangxi China）

Stems with newborn axillary bud used as explant， sampling times， concentrations of 6-BA，type of auxins were researched as important factor affecting growth of explants. Also， the effect of activated carbon on browning of explants was studied. Appropriate sampling time for tissue culture of Murraya tetramera was April， appropriate 6-BA concentration for the shoots induction from explants was 2.5 mg·L-1， appropriate auxin was IBA and 1.5 g·L-1activated carbon could reduce the browning of explants. The results showed that the initial media was MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ AC 1.5 g·L-1in tissue culture of M. tetramera.

Murraya tetramera； tissue culture； auxin； activated carbon； browning

10.3969/j.issn.1009-7791.2015.01.014

Q943

B

1009-7791（2015）01-0070-02

2015-01-05

林茜，碩士，研究實(shí)習(xí)員，從事植物組織培養(yǎng)研究。E-mail： lgm998@126.com