正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選升麻炭最佳炮制工藝△

于曉，戴衍朋，周倩,，孫立立*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014)

·中藥工業(yè)·

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選升麻炭最佳炮制工藝△

于曉1，戴衍朋2，周倩1,2，孫立立2*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014)

目的：優(yōu)選升麻炭最佳炮制工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以外觀性狀、異阿魏酸含量為指標(biāo)，對炒炭藥材量、炒制溫度和炒制時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)果：升麻炭最佳炮制工藝為加樣量3 kg，炒制溫度400 ℃，炒制10 min。結(jié)論：優(yōu)選得到的升麻炭炮制工藝穩(wěn)定可行，適合指導(dǎo)升麻炭的生產(chǎn)。

升麻炭；正交試驗(yàn)；炮制工藝

升麻為毛茛科植物大三葉升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、興安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.)Maxim.或升麻CimicifugafodetidaL.的干燥根莖。其味辛、微甘，微寒，具有發(fā)表透疹，清熱解毒，升舉陽氣之功能。用于風(fēng)熱頭痛、齒痛、口瘡、咽喉腫痛、麻疹不透、陽毒發(fā)斑、脫肛、子宮脫垂等癥[1]。升麻炮制規(guī)格主要有升麻片、蜜升麻、升麻炭。升麻炒炭后能顯著縮短出血時(shí)間，有明顯的止血作用。

《全國中藥炮制規(guī)范》1988年版收載升麻炭飲片，將其炮制方法規(guī)定為“取升麻片置鍋內(nèi)，用武火加熱，炒至表面焦黑色，內(nèi)部棕褐色，噴淋清水少許，滅盡火星，取出晾干[2]?！钡悄壳皼]有具體參數(shù)來評定升麻炭飲片質(zhì)量優(yōu)劣，筆者通過文獻(xiàn)分析認(rèn)為，可以從外觀性狀、異阿魏酸含量來綜合評價(jià)炮制工藝的優(yōu)劣[3]。本文采用正交試驗(yàn)，以外觀性狀、異阿魏酸含量為考察指標(biāo)，對升麻炭炮制工藝的加樣量、炒制溫度和炒制時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，為規(guī)范升麻炭的炮制工藝提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

2695型高效液相色譜儀、2996 DAD檢測器(Waters)；XS205DU型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；CY340460型中藥炮制電熱控溫炒藥機(jī)(山東臨清藥物機(jī)械廠)；AR842A紅外溫度儀(香港希碼)。

1.2 試藥

升麻飲片為市售飲片，產(chǎn)地為東北，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定為大三葉升麻CimicifugaheracleifoliaKom.干燥根莖的加工品。異阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111698-200602)；乙腈、磷酸(色譜純，迪馬科技)；乙醇為分析純；水為自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 異阿魏酸含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenon HyperClone C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(13∶87)；檢測波長：316 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1，理論塔板數(shù)按異阿魏酸峰計(jì)算不低于5000。按此色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，色譜峰分離條件好[1]。見圖1～2。

圖1 異阿魏酸對照品HPLC圖譜

圖2 升麻飲片HPLC圖譜

2.1.2 對照品溶液的制備 取異阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加10%乙醇制成質(zhì)量濃度為0.17 mg·mL-1的溶液，即得[1]。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過二號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入10%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2.5 h，放冷，再稱定重量，用10%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[1]。

2.1.4 線性關(guān)系考察 取混合對照品溶液，精確進(jìn)樣1、3、5、8、10 μL，測定各色譜峰的峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=2025X-21.84，r=0.999 9，表明在0.17～1.7 μg呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定異阿魏酸的峰面積，結(jié)果異阿魏酸峰面積的RSD分別為0.58%，表明精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次的樣品5份，按2.1.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL，注入色譜儀，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件記錄色譜圖，測定異阿魏酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果異阿魏酸平均含量為0.47%，RSD為1.89%，表明試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別在0、2、4、8、12 h精密吸取同一供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件記錄色譜圖，測定峰面積，結(jié)果異阿魏酸峰面積的RSD為2.08%，表明異阿魏酸在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已測知含量的升麻樣品0.25 g，共6份，各分別精密加入異阿魏酸對照品適量，按2.1.3項(xiàng)下方法提取測定，計(jì)算回收率，結(jié)果異阿魏酸平均回收率為99.13%，RSD為1.75%，表明該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.2 升麻炭炮制工藝優(yōu)選

2.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 筆者通過預(yù)試驗(yàn)以及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[4]，確定了影響升麻炭質(zhì)量的主要因素為加熱溫度、炒制時(shí)間和投藥量等，以傳統(tǒng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和升麻中主要成分異阿魏酸含量作為正交試驗(yàn)的評價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平表見表1。

表1 因素水平表

照試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，取凈升麻飲片，置中藥炮制控溫爐中，照設(shè)定溫度和時(shí)間進(jìn)行炮制，取出晾涼，即得。

2.2.2 試驗(yàn)結(jié)果及分析 以異阿魏酸的含量作為內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，以外觀性狀為外在質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

飲片傳統(tǒng)質(zhì)量評價(jià)是以外觀性狀為主要指標(biāo)，可在相當(dāng)程度上提示飲片質(zhì)量。根據(jù)《全國中藥炮制規(guī)范》1988年版對升麻炭的性狀要求，以表面黑色，內(nèi)部棕褐色為炮制程度適中，得分為20～30分；表面焦黑色，內(nèi)部黑色為炮制稍過，表面黑棕色、斷面褐色為炮制稍輕，得分為10～20分；表面焦黑色，內(nèi)部焦黑色為炮制太過，表面深棕色，內(nèi)部黃棕色為炮制太輕，得分為0～10分，總分為30分[2]。

正交試驗(yàn)用表及試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3

表2 升麻炭L9(34)正交試驗(yàn)直觀分析表

表3 方差分析

注：F0.05(2，2)=19；*表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

由表3可知，3種評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行評價(jià)，加熱溫度對試驗(yàn)結(jié)果均有顯著性影響，而炒制時(shí)間對異阿魏酸含量具有顯著性影響。

綜合直觀分析和方差分析結(jié)果，升麻炭最佳炮制工藝為A2B2C3，即取凈升麻片3 kg，倒入已預(yù)熱的中藥炮制電熱控溫炒藥機(jī)中，400 ℃，炒制10 min，迅速出鍋，放涼，即得。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

為確保該炮制工藝的穩(wěn)定性，按照上述最佳炮制工藝進(jìn)行3次試驗(yàn)，并測得異阿魏酸平均含量為0.63%，RSD為0.634%。因此，可以說明該炮制工藝穩(wěn)定、可行。

3 討論

正交試驗(yàn)選擇外觀性狀和內(nèi)在質(zhì)量為考察指標(biāo)，可避免單純以內(nèi)在指標(biāo)評價(jià)質(zhì)量的片面性，能夠更客觀地反映各個(gè)因素對升麻炭飲片質(zhì)量的影響。目前，關(guān)于升麻炭有效成分的研究較少，升麻炒炭后增加止血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。前期研究發(fā)現(xiàn)，升麻中異阿魏酸含量隨升麻炒制程度的加重呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，可以指示升麻炒炭的程度。一般認(rèn)為有機(jī)酸是升麻清熱解毒的有效成分，其中的阿魏酸和異阿魏酸等咖啡酸衍生物具有較強(qiáng)的抗炎活性[5-8]，故選擇異阿魏酸為內(nèi)在指標(biāo)。通過正交試驗(yàn)進(jìn)行多指標(biāo)考察，優(yōu)選得到的最佳炮制工藝具有可行性、穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，可用于指導(dǎo)升麻炭的生產(chǎn)，為其合理利用與研究奠定基礎(chǔ)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010：68.

[2] 中華人民共和國藥政管理局.全國中藥炮制規(guī)范[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：23.

[3] 張慧芳，戴衍朋.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選升麻最佳蜜炙工藝[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2014，34(7)：520-523.

[4] 趙婷，劉力，馮雙全，等.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化側(cè)柏炭炮制工藝研究[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，23(2)：70-73.

[5] 潘瑞樂，陳迪華，沈連鋼，等.高效液相色譜法測定升麻中阿魏酸和異阿魏酸的含量[J].藥物分析雜志，2000，20(6)：396-398.

[6] 張濤.HPLC測定升麻中阿魏酸的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2002，3(4)：41-42.

[7] 劉穎，張小茜.升麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中草藥，2005，36(9)：1402-1404.

[8] 高璟春，張金超，朱國元，等.升麻族植物藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥，2006，37(10)：附3.

Optimization of Processing Technology of Carbonized Cimicifugae Rhizoma by Orthogonal Test Method

YU Xiao1，DAI Yanpeng2，ZHOU Qian1,2，SUN Lili2*

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China)

Objective：To optimize the processing technology for carbonized Cimicifugae Rhizoma.Methods：The traditional organoleptic feature and the content of isoferulic acid were chosen as indexes.The factors of the weight of materia medica processing temperature and processing time were investigated by orthogonal test.Results：The optimum condition for processing technology of carbonized Cimicifugae Rhizoma was as following：3Kg Cimicifugae Rhizoma was carbonized by stir-frying at 400 ℃ for 10 min.Conclusion：The optimum condition is reasonable，which can be used to guide the production of carbonized Cimicifugae Rhizoma.

carbonized Cimicifugae Rhizoma；orthogonal test；processing technology

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.8.019

2015-03-21)

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011-180)；中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)20種中藥飲片炮制技術(shù)規(guī)范研究(201207004-9)

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孫立立，研究員，研究方向：中藥新藥與中藥炮制原理；Tel：(0531)82949829，Email：89247566@qq.com