乳腺癌組織胰島素受體底物 -1、胰島素受體底物 -2表達及其與患者臨床病理特征的關(guān)系研究

關(guān) 霞，趙穎潔

（四川省婦幼保健院病理科，四川 成都 610041）

乳腺癌是一種發(fā)生在乳房腺上皮組織的惡性腫瘤，患者早期沒有典型癥狀，容易與乳腺增生和乳腺纖維瘤混淆，不易引起重視。隨著病情進展，其可能出現(xiàn)周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，也可以通過血行轉(zhuǎn)移，到達肺、腦等重要的生命器官，嚴(yán)重威脅患者生命安全。有研究顯示，多種基因的異常表達和機體微環(huán)境眾多細(xì)胞因子的相互作用與乳腺癌的轉(zhuǎn)移、疾病進展密切相關(guān)[1]。胰島素受體底物-1（IRS-1）、胰島素受體底物-2（IRS-2）均屬于胰島素受體絡(luò)氨酸激酶底物家族中的成員，參與多種細(xì)胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，通過與受體結(jié)合發(fā)生自身磷酸化為下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)提供結(jié)合位點，從而激活下游轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號通路]，調(diào)控細(xì)胞的生長、存活、分化及代謝，且高表達時可使細(xì)胞發(fā)生癌變，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[2-3]。本研究旨在探討IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中的表達情況，及其與患者臨床病理特征的關(guān)系，以期為臨床上診治乳腺癌提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析四川省婦幼保健院2019年8月至2021年7月收治的60例乳腺癌患者的臨床資料，分別取其乳腺癌組織標(biāo)本與乳腺癌癌旁正常組織標(biāo)本進行檢測。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2017年版）》[4]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)檢測確診；未接受放化療治療；行乳腺癌根治術(shù)治療者；臨床資料完整者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有惡性腫瘤史或伴隨其他惡性腫瘤者；合并急、慢性炎癥疾病或基礎(chǔ)疾病者；影像學(xué)檢查存在可疑遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病者等。四川省婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會已批準(zhǔn)此研究。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集于乳腺癌根治術(shù)術(shù)中切除病灶組織，并采集距離病灶組織大于5 cm的癌旁正常組織2～3塊（經(jīng)病理診斷確診無癌細(xì)胞殘留），30 min內(nèi)使用濃度4%的多聚甲醛溶液進行固定1～2 d，使用乙醇脫水后再使用甲苯溶液對切片進行清洗，石蠟包埋制作成組織蠟塊。

1.2.2免疫組化檢測對組織蠟塊進行連續(xù)切片（厚度：4 μm），并將組織切片貼附在預(yù)先處理的載玻片上，隨后將其放在60 ℃干燥箱中進行烘烤2 h，室溫保存；使用二甲苯進行脫蠟和梯度酒精進行水化處理；在室溫避光下，使用3%過氧化氫處理10 min，山羊血清封閉（濃度10%）孵育30 min；磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS）浸泡2次，5 min/次。分別加入單克隆抗體，對照組以PBS代替一抗4 ℃孵育過夜，室溫復(fù)溫（45 min） →二抗（37 ℃孵育20 min） →三抗（37 ℃孵育20 min）；在1滴二氨基聯(lián)苯胺顯色液與1滴親和素生物素過氧化物酶復(fù)合物（約50 μL）的混合液中加入1 mL雙蒸水并混勻，在顯微鏡下觀察切片組織顏色和強度適中后，立即使用自來水終止顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核5 min，中性樹膠封片。使用全自動熒光免疫分析儀（Radiometer Medical ApS，型號：AQT90 FLEX）檢測IRS-1、IRS-2表達水平。細(xì)胞染色情況通過顯微鏡進行判定，同時統(tǒng)計其表達情況。由兩名病理科醫(yī)師對所有病理切片的免疫組化染色情況進行觀察確認(rèn)。

1.2.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)IRS-1與IRS-2高表達：呈棕黃色或棕褐色，根據(jù)標(biāo)本染色強度[無著色（0分，陰性）、淺黃色（1分，弱陽性）、棕黃色（2分，陽性）、棕褐色（3分，強陽性）]及范圍[棕黃色染色范圍≤ 25%為1分，25% ＜ 染色范圍≤ 50%為2分，50% ＜ 染色范圍≤ 75%為3分，染色范圍 ＞ 75%為4分]判定，免疫組化評分=染色強度×染色范圍， ≤ 1分為低表達，＞2分為高表達（5～8分、9～12分別為中度陽性、強陽性）[5]。

1.3觀察指標(biāo)①觀察乳腺癌組織與乳腺癌癌旁組織IRS-1、IRS-2表達情況。②分析乳腺癌組織IRS-1、IRS-2陽性表達與患者臨床病理特征的關(guān)系。其中臨床病理特征包括組織學(xué)分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）、腫瘤直徑（＜2 cm或≥ 2 cm）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有或無）、T分期[T1：腫瘤最大直徑≤ 20 mm；T2：20 mm＜腫瘤最大直徑≤ 50 mm；T3：腫瘤最大直徑＞50 mm]、N分期[N0：無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；N1～2：同側(cè)Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可移動（N1）、同側(cè)Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，固定或融合（N2）；N3：同側(cè)鎖骨下淋巴結(jié)（Ⅲ級腋窩淋巴結(jié)）轉(zhuǎn)移，伴或不伴Ⅰ、Ⅱ級腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移][6]；組織學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)：按照腺管形成[腺管形成＞75%（1分），10% ≤腺管形成≤ 75%（2分），腺管形成＜10%（3分）]、核的多形性[1分（與腫瘤周圍正常乳腺組織比較，細(xì)胞規(guī)則，核小或稍大）、2分（較正常上皮細(xì)胞大，有中度異形性，可見空泡核及核仁）、3分（瘤細(xì)胞有明顯的多形性，可見巨核及畸形核）]及核分裂計數(shù)[核分裂計數(shù)評估，在細(xì)胞生長活躍區(qū)，計數(shù)10個高倍視野（400×），然后算出每10個高倍視野的核分裂數(shù)（1分：0～1個；2分：2～3個；3分：＞3個] 3項總分進行評估，總分為3者之和，3～5分為Ⅰ級，6～7分為Ⅱ級，8～9分為Ⅲ級[7]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料使用[ 例(%)]表示，行χ2檢驗，多組間比較采用χ2趨勢檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌組織IRS-1、IRS-2表達情況乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2的高表達率均顯著高于乳腺癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中均有廣泛表達，呈棕褐色，陽性細(xì)胞占比≥ 51%，定位于細(xì)胞漿內(nèi)，見圖1-A、圖1-B。

表1 乳腺癌組織中組織IRS-1、IRS-2表達情況比較[ 例(%)]

圖1 乳腺癌組織IRS-1、IRS-2免疫組織化學(xué)染色陽性圖片（×200）

2.2乳腺癌組織IRS-1、IRS-2表達與患者臨床病理特征的關(guān)系乳腺癌組織IRS-1、IRS-2高表達患者中T3期、N3期占比均顯著高于IRS-1、IRS-2低表達患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表2、表3。

表2 乳腺癌組織IRS-1表達與患者臨床病理特征的關(guān)系[ 例(%)]

表3 乳腺癌組織IRS-2表達與患者臨床病理特征的關(guān)系[ 例(%)]

3 討論

大部分乳腺癌患者在早期一般不會出現(xiàn)明顯的不適癥狀，因此容易被患者忽視，當(dāng)病情發(fā)展到一定程度時，進行相關(guān)檢查才發(fā)現(xiàn)病灶，但是為時已晚，癌細(xì)胞已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，進而導(dǎo)致多器官出現(xiàn)病變，嚴(yán)重威脅患者生命安全。此外，乳腺癌患者不同的疾病進展階段，也會有不同的治療方式與預(yù)后。因此，尋找一種積極有效的乳腺癌診斷方法，對指導(dǎo)臨床采取及時有效的治療措施與改善患者預(yù)后意義重大。隨著臨床對乳腺癌研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)基因突變是其分子發(fā)病機制，并且在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中均有多基因參與。因此，了解細(xì)胞增殖標(biāo)志物水平，對診斷乳腺癌具有積極意義。

IRS是被激活的胰島素受體酪氨酸激酶作用的底物，具有較多的殘基，發(fā)生磷酸化，參與了細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的磷酸化蛋白，控制下游信號的傳導(dǎo)，參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及免疫調(diào)節(jié)等作用，其異常時可使細(xì)胞發(fā)生癌變，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[8]；而IRS-1、IRS-2屬于胰島素受體底物家族中的主要成員，可作為胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的關(guān)鍵中介分子，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用；同時，該蛋白參與多種激素、細(xì)胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，以維持細(xì)胞的基本功能。相關(guān)研究顯示，IRS-1、IRS-2蛋白與乳腺癌的臨床癥狀和預(yù)后有著重要的關(guān)系[9]。本研究中，乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2的高表達率均顯著高于乳腺癌旁組織，提示IRS-1、IRS-2在乳腺癌癌組織和癌旁組織中的表達具有較大的差異，參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

IRS-1可通過調(diào)控多聚嘧啶區(qū)結(jié)合蛋白（PTB）的表達，消除胰島素樣生長因子受體-1（IGF-1R）對細(xì)胞分化的作用，從而促進細(xì)胞轉(zhuǎn)化，IRS-1在乳腺癌中持續(xù)被激活，高表達IRS-1會促進乳腺上皮細(xì)胞增殖[10]。IRS-2高表達于乳腺癌中，主要通過調(diào)節(jié)下游通路PI3K促進細(xì)胞有絲分裂，從而導(dǎo)致惡性腫瘤的增殖，同時還可以促進間皮瘤細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[11]。本研究中，IRS-1、IRS-2表達均與組織學(xué)分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期、N分期有關(guān)，說明IRS-1、IRS-2表達與臨床病理特征有關(guān)，能夠在一定程度上反映乳腺癌患者的惡性程度，這與上述指標(biāo)在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用有關(guān)。

綜上，IRS-1、IRS-2在乳腺癌組織中呈高表達水平，且上述指標(biāo)表達水平與患者臨床病理特征（乳腺癌T、N分期等）關(guān)系密切，可在臨床上診斷和治療乳腺癌方面起協(xié)助作用。但本研究也存在一定不足之處，未對患者疾病治療和預(yù)后情況進行隨訪，因此需擴大樣本量，延長隨訪周期，對疾病治療和預(yù)后情況做深入研究。