深低溫停循環(huán)下幼豬腦皮質(zhì)HIF-1與NGB的表達(dá)及作用*

梁孟亞，唐志賢，陳光獻(xiàn)，榮健，戴剛，吳鐘凱(中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院心臟外科，廣東廣州510080)

深低溫停循環(huán)下幼豬腦皮質(zhì)HIF-1與NGB的表達(dá)及作用*

梁孟亞，唐志賢，陳光獻(xiàn)，榮健，戴剛，吳鐘凱△
(中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院心臟外科，廣東廣州510080)

目的:觀察深低溫停循環(huán)(DHCA)下幼豬腦皮質(zhì)缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1)與神經(jīng)珠蛋白(NGB)的表達(dá)變化。方法:五指山豬共15頭隨機(jī)分成體外循環(huán)組(CPB組)、深低溫停循環(huán)組(DHCA組)與深低溫停循環(huán)選擇性順行腦灌注組(SACP組)。建立體外循環(huán)后，DHCA組降溫至18℃后停循環(huán)40 min，SACP組停循環(huán)后經(jīng)無名動(dòng)脈順行腦灌注40 min。復(fù)灌180 min后取腦皮質(zhì)組織行HE染色鏡檢，Western blot及real-time PCR檢測(cè)HIF-1α、NGB蛋白表達(dá)及mRNA水平。結(jié)果:HE染色顯示與DHCA組相比SACP組腦組織損傷顯著減輕。復(fù)灌180 min后DHCA組及SACP組腦皮質(zhì)中HIF-1α的蛋白及mRNA水平均顯著高于CPB組(P＜0.05)，同時(shí)SACP組動(dòng)物腦組織HIF-1α的蛋白及mRNA水平顯著高于DHCA組(P＜0.05)。復(fù)灌180min后DHCA組及SACP組腦皮質(zhì)中NGB的蛋白及mRNA水平均顯著高于CPB組(P＜0.05)，同時(shí)SACP組動(dòng)物腦組織NGB的蛋白及mRNA水平顯著高于DHCA組(P＜0.05)。結(jié)論:HIF-1與NGB的表達(dá)上調(diào)參與了腦組織對(duì)DHCA腦損傷的反應(yīng)機(jī)制，并可能是SACP腦保護(hù)作用的機(jī)制之一。

深低溫停循環(huán);選擇性順行腦灌注;缺氧誘導(dǎo)因子1;神經(jīng)珠蛋白

［ABSTRACT］AIM:To observe the expression of hypoxia-inducible factor1(HIF-1)and neuroglobin(NGB)in piglet cortex during deep hypothermic circulatory arrest.METHODS:Wuzhishan piglets were random ly assigned to cardiopulmonary bypass group(CPB group)，40 min of circulatory arrest(CA)at18℃without cerebral perfusion(DHCA group)or with selective antegrade cerebral perfusion(SACP group).After180min of reperfusion，cortical tissuewas harvested for determining HIF-1αand NGB expression by HE staining，Western blotand real-time PCR.RESULTS:Severer cerebral injury was observed in DHCA group than that in SACP group.After 180 min of reperfusion，HIF-1αprotein and mRNA levelswere significantly higher in DHCA group than those in CPB group(P＜0.05).Accordingly，SACP animal had higher levels of HIF-1αprotein andmRNA than those in DHCA group(P＜0.05).Simultaneously，higher NGB protein and mRNA levels were found in DHCA group than those in CPB group after 180 min of reperfusion(P＜0.05).The SACP animal had higher levels of NGB protein and mRNA than those in DHCA group(P＜0.05).CONCLUSION:Upregulation of HIF-1 and NGB are involved in themechanism against cerebral injury resulting from DHCA in the cortex and possibly a part of cerebral protective effect of SACP.

［KEY WORDS］Deep hypothermic circulatory arrest;Selective antegrade cerebral perfusion;Hypoxia-inducible factor 1;Neuroglobin

深低溫停循環(huán)(deep hypothermic circulatory arrest，DHCA)目前廣泛用于主動(dòng)脈弓手術(shù)及復(fù)雜先天性心臟病矯治手術(shù)，但術(shù)后出現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)損害是主要并發(fā)癥。DHCA導(dǎo)致的腦損傷目前機(jī)制尚未十分明確［1］。近年的研究發(fā)現(xiàn)缺氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)通路在腦缺血損傷中扮演重要角色［2］，然而DHCA過程中HIF-1的表達(dá)情況尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。神經(jīng)珠蛋白(neuroglobin，NGB)是新近發(fā)現(xiàn)的一類主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)的高氧親和力珠蛋白，其在腦卒中的角色越來越受到重視，有研究發(fā)現(xiàn)缺氧條件下HIF-1可調(diào)控NGB的表達(dá)，提示兩者間存在功能聯(lián)系，目前HIF-1及NGB是否參與腦組織對(duì)DHCA腦損傷的反應(yīng)機(jī)制未有研究涉及。近年來應(yīng)用選擇性順行腦灌注(selective antegrade cerebral perfusion，SACP)在減輕DHCA導(dǎo)致的術(shù)后腦損傷方面取得較好的療效，其腦保護(hù)機(jī)制部分可能與提高腦組織對(duì)缺氧應(yīng)激的應(yīng)答能力相關(guān)［3］。HIF-1及NGB是腦組織應(yīng)對(duì)缺氧損傷的重要應(yīng)答因子，而目前尚未有研究分析兩者在SACP中的表達(dá)改變。本研究旨在通過建立幼豬DHCA模型觀察HIF-1及NGB在DHCA動(dòng)物腦皮質(zhì)的中的表達(dá)變化，并探討其在SACP腦保護(hù)機(jī)制中的作用。

材料和方法

1動(dòng)物、藥品、試劑和儀器

健康雄性2～4月齡五指山小型香豬15頭，體重(11.27±2.70)kg，由廣州白云實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。

HIF-1和NGB抗體購(gòu)自Abcam;Trizol購(gòu)自Invitrogen;HRP標(biāo)記Ⅱ抗(HRP2025)購(gòu)自Forevergen; ReverTra Ace qPCR試劑盒購(gòu)自Toyobo Biochemicals;SsoFast EvaGreen Supermix試劑盒購(gòu)自Bio-Rad。

體外循環(huán)管道及膜肺(Medtronic);人工心肺機(jī)(Stoker);變溫水箱(Sarns);多導(dǎo)生理記錄儀(BIOPAC);動(dòng)物麻醉呼吸機(jī)(Bird Vela);自動(dòng)取樣槍(Bard MAGNUM);紫外凝膠分析系統(tǒng)(Bio-Rad); TC-200型PCR儀(MJReseareh)。

2方法

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組五指山小型香豬共15頭按照隨機(jī)原則分為3組，每組5只:(1)體外循環(huán)組(CPB組):動(dòng)物經(jīng)歷40 min并行體外循環(huán)作為對(duì)照組;(2)深低溫停循環(huán)無腦灌注組(DHCA組):動(dòng)物接受18℃單純深低溫停循環(huán)40 min;(3)深低溫停循環(huán)選擇性順行腦灌注組(SACP組):動(dòng)物接受18℃深低溫停循環(huán)40 min，同時(shí)經(jīng)無名動(dòng)脈行順行腦灌注。

2.2深低溫停循環(huán)與逆行腦灌注操作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由靜脈注射芬太尼2μg/kg，維庫(kù)溴銨0.1 mg/kg誘導(dǎo)后行氣管插管。以七氟醚吸入，芬太尼及維庫(kù)溴銨靜脈注射維持麻醉。股動(dòng)、靜脈分別置管并連接多導(dǎo)生理記錄儀監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓及中心靜脈壓。手術(shù)操作與體外循環(huán)流程均模擬臨床心臟手術(shù)過程。胸骨正中切口，右心房?jī)?nèi)注射肝素3 mg/kg肝素化后，主動(dòng)脈和上、下腔靜脈分別插入10F主動(dòng)脈插管和2條12F靜脈插管，并連接人工心肺機(jī)。體外循環(huán)管道及膜肺使用乳酸林格液預(yù)充。灌流流量維持于75～80 mL·kg－1·min－1，平均動(dòng)脈壓維持于50～80 mmHg之間。體外循環(huán)開始后，逐漸降溫直至鼻咽溫18℃。CPB組不進(jìn)行降溫，阻斷主動(dòng)脈后順行灌注心肌停跳液致心臟停跳，體外循環(huán)轉(zhuǎn)流40 min后開放主動(dòng)脈。DHCA組動(dòng)物鼻咽溫降至目標(biāo)溫度后開始停循環(huán)40 min。SACP組于停循環(huán)開始后經(jīng)右無名動(dòng)脈按20 mL·kg－1·min－1流量順行灌注，其余主動(dòng)脈弓血管以套索收緊阻斷，灌注壓力維持于45～50 mmHg。停循環(huán)40 min后，開放主動(dòng)脈恢復(fù)流量復(fù)溫直至鼻咽溫達(dá)到36℃。復(fù)灌180 min后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，開顱后留取腦皮質(zhì)組織，置于2.5%戊二醛及0.1 mmol/L甲次砷酸鹽混合溶液中固定并于4℃冷凍保存，或于－70℃低溫冰箱保存?zhèn)湎乱徊綑z測(cè)。

2.3腦皮質(zhì)組織HE染色腦皮質(zhì)組織以10%甲醛固定24 h后經(jīng)梯度乙醇脫水，石蠟包埋切片后經(jīng)蘇木素伊紅染色，置于光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.4Western blot測(cè)定腦皮質(zhì)HIF-1α和NGB蛋白表達(dá)取100 mg腦皮質(zhì)組織，剪碎后加入300μL RIPA裂解液進(jìn)行勻漿，4℃、16 000×g離心30 min，收集中層蛋白液體。采用Bradford進(jìn)行蛋白定量。所使用SDS凝膠濃度為12%。電泳前，100℃沸煮蛋白樣本5 min，使蛋白變性。電泳條件為恒壓200 V 45 min。轉(zhuǎn)膜條件為恒壓200 V 60 min。封閉液(5%脫脂奶粉溶于TBST)封閉1 h。4℃搖晃孵育HIF-1Ⅰ抗(1∶1 000)和NGBⅠ抗(1∶1 000)過夜。采用HRP標(biāo)記Ⅱ抗(1∶3 000)常溫孵育1 min。TBST緩沖液室溫下?lián)u床搖動(dòng)洗膜3次。ECL發(fā)光液化學(xué)發(fā)光法顯色。結(jié)果圖片使用Image J軟件測(cè)定灰度值。以GAPDH(1∶5 000)作為內(nèi)參照，比較不同處理后上述蛋白表達(dá)的差異。

2.5腦皮質(zhì)HIF-1α和NGBmRNA的real-time PCR檢測(cè)取腦皮質(zhì)組織加入Trizol液中根據(jù)操作規(guī)程進(jìn)行總RNA提取，然后應(yīng)用ReverTra Ace qPCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，引物如下:HIF-1的上游引物為5’-GCTACAACATCACCATACAG-3’，下游引物為5’-GCGACAGATAACACATTAGG-3’;NGB的上游引物為5’-CCCTCTTCCAGTACAACT-3’，下游引物為5’-CAATCACAAGCATCACCTT-3’;β-actin的上游引物為5’-TGTTGACAATGGATCCGGTA-3’，下游引物為5’-CTGCTGGAAGGTGGAGAGAG-3’。應(yīng)用SsoFast EvaGreen Supermix試劑盒進(jìn)行cDNA擴(kuò)增，實(shí)驗(yàn)體系如下:SsoFast EvaGreen Supermix 10μL;模板DNA 2μL;引物0.4μmol/L。擴(kuò)增參數(shù)為98℃2 min; 98℃5 s，57℃30 s，共40個(gè)循環(huán)。產(chǎn)物凝膠電泳后用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。連續(xù)指標(biāo)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。采用單因素方差分析檢驗(yàn)組間均數(shù)差異。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1腦皮質(zhì)HE染色

動(dòng)物腦皮質(zhì)HE染色結(jié)果顯示，CPB組動(dòng)物腦皮質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血明顯，組織結(jié)構(gòu)基本正常。DHCA組皮質(zhì)神經(jīng)元排列紊亂，細(xì)胞皺縮，染色質(zhì)結(jié)緊及胞漿濃縮明顯，細(xì)胞周圍有空泡形成，局部液化性壞死。多數(shù)小血管明顯充血，周圍淋巴細(xì)胞圍繞呈“袖套”樣。SACP組腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常，組織輕度水腫，部分血管擴(kuò)張充血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯，其組織結(jié)構(gòu)損傷程度較DHCA組顯著減輕，見圖1。

Figure 1.The histopathological changes of the frontal cortex(HE staining，×400).圖1　腦皮質(zhì)HE染色結(jié)果

2腦皮質(zhì)HIF-1α及NGB蛋白表達(dá)結(jié)果

復(fù)灌180 min后DHCA組及SACP組HIF-1α的表達(dá)均顯著高于CPB組(P＜0.01)，另外SACP組動(dòng)物腦組織HIF-1α的表達(dá)顯著高于DHCA組(P＜ 0.01)，見圖2。復(fù)灌3 h后DHCA組及SACP組NGB的表達(dá)均顯著高于CPB組(P＜0.01)，此外SACP組動(dòng)物腦組織NGB的表達(dá)顯著高于DHCA組(P＜0.01)，見圖3。

Figure 2.HIF-1αlevels in the frontal cortex at180min of reperfusion determined byWestern blotanalysis.Mean±SD.n=5.＊＊P＜0.01 vs DHCA group.圖2　W estern blot檢測(cè)腦皮質(zhì)HIF-1α蛋白的水平

Figure 3.The neuroglobin(NGB)levels in the frontal cortex at180 min of reperfusion determined byWestern blot.Mean±SD.n= 5.＊＊P＜0.01 vs DHCA group.圖3　W estern blot檢測(cè)腦皮質(zhì)神經(jīng)珠蛋白的水平

3腦皮質(zhì)HIF-1α及NGBm RNA的表達(dá)結(jié)果

在再灌注3 h后應(yīng)用real-time PCR方法檢測(cè)3組動(dòng)物皮質(zhì)HIF-1α及NGB的mRNA表達(dá)。復(fù)灌3 h后DHCA組及SACP組HIF-1α的mRNA水平均明顯高于CPB組(P＜0.01);有腦灌注的SACP動(dòng)物腦組織HIF-1α的mRNA水平顯著高于DHCA組(P＜0.05)。另外再灌注3 h后DHCA組及SACP組NGB的mRNA水平均明顯高于CPB組(P＜0.01);有腦灌注的SACP動(dòng)物腦皮質(zhì)組織中NGB的mRNA水平顯著高于DHCA組(P＜0.05)，見圖4。

Figure 4.ThemRNA expression of HIF-1αand neuroglobin(NGB)in the frontal cortex at180 min of reperfusion determined by realtime PCR.Mean±SD.n=5.*P＜0.05 vs DHCA group.圖4　Real-time PCR檢測(cè)腦皮質(zhì)HIF-1α及NGB的m RNA表達(dá)水平

討論

目前對(duì)DHCA腦損傷的機(jī)制研究認(rèn)為，腦組織在停循環(huán)期間及再灌注后經(jīng)歷一系列復(fù)雜的代謝環(huán)境變化過程，代謝環(huán)境的急劇變化及缺血缺氧刺激誘導(dǎo)腦神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答機(jī)制，啟動(dòng)一系列相關(guān)蛋白因子的表達(dá)，這一過程被認(rèn)為是腦組織應(yīng)對(duì)DHCA腦損傷的修復(fù)機(jī)制的一部分。HIF-1是細(xì)胞在缺氧條件下產(chǎn)生的核蛋白，是由α亞基和β亞基組成的具有轉(zhuǎn)錄活性的異源二聚體，HIF-1α是其中的主要活性亞基，組織缺氧過程中與靶基因增強(qiáng)子或啟動(dòng)子上的缺氧反應(yīng)元件(hypoxia response element，HRE)結(jié)合，啟動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮其對(duì)組織缺血缺氧的反應(yīng)機(jī)制［4］。目前發(fā)現(xiàn)的HIF-1的靶基因包括促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)基因、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因及葡萄糖載體蛋白1的編碼基因等，這些基因編碼的蛋白因子對(duì)缺血缺氧后組織修復(fù)具有重要作用［5］。HIF-1是組織應(yīng)對(duì)缺氧缺血的重要應(yīng)答因子與啟動(dòng)環(huán)節(jié)，有研究顯示慢性缺氧動(dòng)物腦組織中檢測(cè)到HIF-1蛋白表達(dá)的上調(diào)，亦有研究發(fā)現(xiàn)HIF-1高表達(dá)基因型大鼠腦組織對(duì)缺氧刺激的耐受能力顯著高于野生型［2］，提示HIF-1表達(dá)上調(diào)對(duì)熱缺血損傷腦組織具有保護(hù)作用。目前對(duì)于DHCA腦損傷過程中HIF-1的表達(dá)變化及其是否參與腦組織應(yīng)對(duì)DHCA腦損傷的相關(guān)機(jī)制尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。

NGB是近年發(fā)現(xiàn)的存在于脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的對(duì)氧有高親和力的珠蛋白，在成年大鼠腦皮層、海馬回、丘腦、下丘腦、嗅球和小腦等部位均檢測(cè)到NGB的廣泛表達(dá)，已被證實(shí)與腦局灶性缺氧缺血相關(guān)［6］。有研究證實(shí)NGB過表達(dá)基因型鼠較野生型對(duì)缺血缺氧有較強(qiáng)的抵御能力［7］。NGB對(duì)腦組織缺血缺氧損傷的保護(hù)作用可能與維持線粒體功能及清除氧自由基有關(guān)，NGB與氧分子有高親和性，可以協(xié)助氧氣通過血腦屏障，并且在神經(jīng)組織代謝過程中增加氧的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和供應(yīng)。另有研究發(fā)現(xiàn)NGB在大腦不同區(qū)域的表達(dá)與該區(qū)域?qū)植咳毖拿舾行猿煞幢龋ｑR回等部位對(duì)缺血的高敏感性和易損性與此類區(qū)域的NGB表達(dá)偏低相關(guān)［8］。目前針對(duì)腦卒中過程中NGB所起作用已有諸多研究涉及，但對(duì)DHCA腦損傷過程中NGB蛋白的表達(dá)變化尚未得到充分研究。

本研究首次通過幼豬模型研究了DHCA過程中HIF-1與NGB的表達(dá)變化及其相互關(guān)系，證實(shí)DHCA可導(dǎo)致HIF-1與NGBmRNA與蛋白表達(dá)的上調(diào)，其變化可持續(xù)到再灌注后3 h。同時(shí)我們也觀察到了存在腦灌注(SACP)條件下HIF-1與NGB mRNA與蛋白表達(dá)亦出現(xiàn)上調(diào)，且兩者的表達(dá)水平顯著高于無腦灌組。本研究結(jié)果證實(shí)了HIF-1參與了針對(duì)DHCA腦損傷的反應(yīng)機(jī)制，鑒于先前研究已經(jīng)證實(shí)HIF-1對(duì)熱缺血損傷腦組織具有保護(hù)作用，我們推斷HIF-1表達(dá)升高是腦組織應(yīng)對(duì)DHCA腦損傷啟動(dòng)的自我保護(hù)機(jī)制，而且SACP組動(dòng)物腦組織HIF-1表達(dá)的大幅提高提示其與SACP的腦保護(hù)作用有一定關(guān)聯(lián)。另一方面，本研究在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)NGB參與了腦組織對(duì)DHCA腦損傷的反應(yīng)機(jī)制，目前對(duì)于低氧誘導(dǎo)NGB表達(dá)的具體機(jī)制尚不清楚，但本研究觀察到NGB的表達(dá)在SACP組腦組織中要顯著高于無腦灌組，提示NGB表達(dá)上調(diào)可能參與了SACP的腦保護(hù)機(jī)制。既往有研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α特異性siRNA可以在小鼠體內(nèi)抑制增強(qiáng)子誘導(dǎo)的NGB表達(dá)［9］。另外有文獻(xiàn)報(bào)道HIF-1的誘導(dǎo)因子，如鈷和去鐵敏等，均能增強(qiáng)NGB的表達(dá)，提示在低氧條件下HIF-1可介導(dǎo)NGB的表達(dá)［10］。HIF-1作用靶基因的共同特點(diǎn)是在啟動(dòng)子或增強(qiáng)子中含有HIF-1結(jié)合位點(diǎn)缺氧反應(yīng)原件，而在NGB基因5’端非編碼區(qū)也發(fā)現(xiàn)了多條HIF-1結(jié)合位點(diǎn)相同序列，提示NGB可能為HIF-1的靶基因之一，在機(jī)體對(duì)腦缺血的應(yīng)答過程中兩者之間可能存在一定功能聯(lián)系［11］。本研究結(jié)果證實(shí)在深低溫停循環(huán)期間HIF-1與NGB存在共同的表達(dá)上調(diào)趨勢(shì)，提示兩者間可能存在功能聯(lián)系，但HIF-1是通過何種途徑介導(dǎo)NGB的表達(dá)上調(diào)尚需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究利用幼豬DHCA模型證實(shí)了HIF-1與NGB的表達(dá)上調(diào)參與了腦組織對(duì)DHCA腦損傷的反應(yīng)機(jī)制，同時(shí)亦證實(shí)了兩者的表達(dá)上調(diào)可能與SACP的腦保護(hù)機(jī)制相關(guān)。

［1］Gega A，Rizzo JA，Johnson MH，et al.Straight deep hypothermic arrest:experience in 394 patients supports its effectiveness as a sole means of brain preservation［J］.Ann Thorac Surg，2007，84(3):759-766.

［2］王贊峰，代冰，康健，等.慢性間斷低氧對(duì)大鼠腦內(nèi)缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響［J］.中國(guó)病理生理雜志，2010，26(3):593-595.

［3］Apostolakis E，Koletsis EN，Dedeilias P，etal.Antegrade versus retrograde cerebral perfusion in relation to postoperative complications following aortic arch surgery for acute aortic dissection type A［J］.J Cardiac Surg，2008，23 (5):480-487.

［4］劉秀華，武旭東，蔡莉蓉，等.缺氧誘導(dǎo)因子-1在缺氧預(yù)處理心肌保護(hù)中的作用及其機(jī)制研究［J］.中國(guó)病理生理雜志，2004，20(3):343-346.

［5］Singh N，Sharma G，Mishra V，et al.Hypoxia inducible factor-1:its potential role in cerebral ischemia［J］.Cell Mol Neurobiol，2012，32(4):491-507.

［6］Wang X，Liu J，Zhu H，et al.Effects of neuroglobin overexpression on acute brain injury and long-term outcomes after focal cerebral ischemia［J］.Stroke，2008，39(6): 1869-1874.

［7］Khan AA，Mao XO，Banwait S，et al.Regulation of hypoxic neuronal death signaling by neuroglobin［J］.FASEB J，2008，22(6):1737-1747.

［8］Khan AA，Mao XO，Banwait S，et al.Neuroglobin attenuatesβ-amyloid neurotoxicity in vitro and transgenic Alzheimer phenotype in vivo［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2007，104(48):19114-19119.

［9］Liu N，Yu ZY，Xiang SL，et al.Transcriptional regulation mechanisms of hypoxia-induced neuroglobin gene expression［J］.Biochem J，2012，443(1):153-164.

［10］Hota KB，Hota SK，Srivastava RB，etal.Neuroglobin regulates hypoxic response of neuronal cells through HIF-1αand Nrf2-mediated mechanism［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2012，32(6):1046-1060.

［11］史少陽(yáng)，劉岌虹，馮雪梅，等.腦紅蛋白與神經(jīng)系統(tǒng)缺氧缺血性損傷［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88(6):430-432.

Expression of hypoxia-inducible factor 1 and neuroglobin in piglet cortex during deep hypotherm ic circulatory arrest

LIANG Meng-ya，TANG Zhi-xian，CHEN Guang-xian，RONG Jian，DAI Gang，WU Zhong-kai
(The Second Department of Cardiac Surgery，The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China.E-mail:wuzkdr@126.com)

R654.1;R363.2

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2015.05.010

1000-4718(2015)05-0823-05

2014-12-08［修回日期］2015-03-12

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81400307)

Tel:020-87332200;E-mail:wuzkdr@126.com