濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏治療慢性難愈合創(chuàng)面的超微病理及絲裂原活化蛋白激酶激酶和c-myc mRNA表達(dá)的機(jī)制研究

唐乾利，黃　欣，王　宇，何曉微，王　兵，黃許森，李　輝，金　萌，呂　震

濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏治療慢性難愈合創(chuàng)面的超微病理及絲裂原活化蛋白激酶激酶和c-myc mRNA表達(dá)的機(jī)制研究

唐乾利，黃欣，王宇，何曉微，王兵，黃許森，李輝，金萌，呂震

目的 探討濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏（MEBT/MEBO）治療慢性難愈合創(chuàng)面的超微病理及絲裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）、c-myc mRNA表達(dá)的機(jī)制。方法 選取SPF級(jí)雄性SD大鼠80只，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為空白對(duì)照組、模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組，每組20只?？瞻讓?duì)照組建立全層皮膚缺損開(kāi)放性創(chuàng)面，模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組建立全層皮膚難愈合創(chuàng)面?？瞻讓?duì)照組建立創(chuàng)面后不做其他處理，模型組外敷0.9%氯化鈉溶液，濕潤(rùn)燒傷膏組外敷MEBO，康復(fù)新液組外噴康復(fù)新液。在用藥后第3、6、12天利用透射電鏡觀察大鼠皮膚創(chuàng)面細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；用藥后第12天進(jìn)行熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) （RT-PCR），分析MAPKK、c-myc mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 用藥后第3、6、12天，濕潤(rùn)燒傷膏組與康復(fù)新液組細(xì)胞結(jié)構(gòu)逐步改善，各細(xì)胞器形態(tài)結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)至正常水平。4組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組與康復(fù)新液組較空白對(duì)照組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平降低，濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組較模型組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平均增高（P＜0.05）；濕潤(rùn)燒傷膏組與康復(fù)新液組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。結(jié)論 MEBT/MEBO能夠改善細(xì)胞超微病理結(jié)構(gòu)，提高M(jìn)APKK、c-myc mRNA的表達(dá)水平，促進(jìn)慢性難愈合創(chuàng)面恢復(fù)。

慢性難愈合創(chuàng)面；濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏；病理學(xué)；絲裂原活化蛋白激酶激酶；c-myc

唐乾利，黃欣，王宇，等.濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏治療慢性難愈合創(chuàng)面的超微病理及絲裂原活化蛋白激酶激酶和c-myc mRNA表達(dá)的機(jī)制研究［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18（3）：294-299.［www.chinagp.net］

Tang QL，Huang X，Wang Y，et al.Ultrastructural pathology and the mechanism of expression of MAPKK mRNA&c-myc mRNA of chronic refractory wound treated by MEBT/MEBO［J］.Chinese General Practice，2015，18（3）：294-299.

同行評(píng)議：

本研究從細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及分子生物學(xué)水平研究MEBT/MEBO治療皮膚慢性難愈合創(chuàng)面的修復(fù)機(jī)制。通過(guò)建立慢性難愈合創(chuàng)面大鼠模型，觀察MEBT/MEBO在治療過(guò)程中對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的改變，同時(shí)觀察 MEBT/MEBO對(duì)MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)的改變情況，確定了MEBT/MEBO治療慢性難愈合創(chuàng)面的部分作用，為今后深入探討慢性難愈合創(chuàng)面的修復(fù)機(jī)制提供了可能的參考指標(biāo)。同時(shí)，本研究進(jìn)一步豐富和發(fā)展了燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)，為開(kāi)發(fā)MEBT/MEBO新的臨床適應(yīng)證進(jìn)一步提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論依據(jù)。

皮膚慢性難愈合創(chuàng)面在臨床上多指局部皮膚或皮下組織受到損傷，伴有各種原因刺激導(dǎo)致的限局性缺損、潰爛，經(jīng)1個(gè)月以上治療未能愈合，也無(wú)愈合傾向。皮膚再生醫(yī)療技術(shù)主要為濕潤(rùn)暴露療法/濕潤(rùn)燒傷膏（MEBT/MEBO）［1］，其能夠加快皮膚慢性難愈合創(chuàng)面的修復(fù)，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的分泌，促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的釋放和新生毛細(xì)血管的生長(zhǎng)，減少創(chuàng)面炎性滲出，提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量［2］。絲裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）可通過(guò)激活p38、ERK、JNK等信號(hào)通路，參與細(xì)胞的各種應(yīng)答，特別是皮膚損傷愈合過(guò)程中的基因表達(dá)［3］。其可防止細(xì)胞周期停滯，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)外信息的交流，促進(jìn)成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，還能使表皮基底層細(xì)胞增殖、遷移，繼而促進(jìn)細(xì)胞增殖分化，防止細(xì)胞凋亡［4］。c-myc mRNA是MAPKK重要的下游底物，其高表達(dá)能促進(jìn)組織細(xì)胞增殖，有積極的生物學(xué)意義，有利于損傷創(chuàng)面的修復(fù)，恢復(fù)皮膚組織的生理功能，并促進(jìn)創(chuàng)緣處成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、皮膚附屬上皮細(xì)胞增殖組織旺盛修復(fù)［5-6］。本研究擬運(yùn)用超微電鏡、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) （RT-PCR），觀察不同時(shí)間段創(chuàng)面的愈合情況，并從基因水平分析慢性難愈合創(chuàng)面的愈合機(jī)制，探討MEBT/MEBO促進(jìn)慢性難愈合創(chuàng)面修復(fù)的機(jī)制，為臨床推廣應(yīng)用MEBT/MEBO防治慢性難愈合創(chuàng)面提供可靠的理論依據(jù)和研究思路。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級(jí)雄性SD大鼠80只，2月齡，體質(zhì)量為200～250 g（廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK桂2011-0001）。大鼠飼養(yǎng)于安靜動(dòng)物房中（噪聲85分貝以下），環(huán)境溫度保持在

18～26℃，相對(duì)濕度40% ～70%，自由進(jìn)食和飲水，定期更換墊料。所有大鼠適應(yīng)周?chē)h(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2藥品與試劑 美寶濕潤(rùn)燒傷膏（北京光明中醫(yī)燒傷創(chuàng)瘍研究所汕頭經(jīng)濟(jì)特區(qū)美寶制藥廠生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z20000004），康復(fù)新液 （湖南科倫制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z43020995），鹽酸氯胺酮 （江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：H32022820），醋酸氫化可的松（上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：H31021290），總RNA提取試劑盒（北京天根生物有限公司提供，編號(hào)：FP205-01），Real Master Mix SYBR Green（北京天根生物有限公司提供，目錄號(hào)：DP419），TaKaRa試劑盒〔寶生物工程（大連）有限公司提供，Code：DRR037A〕。

1.3方法

1.3.1分組與模型的建立 將80只雄性SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組，每組 20只。大鼠均參照趙就禹等［7］研究在大鼠腰椎部建立直徑約為24 mm的圓形全層皮膚缺損開(kāi)放性創(chuàng)面模型。除空白對(duì)照組外，其余3組大鼠立即于右下腹部連續(xù)3 d肌肉注射80 mg/kg醋酸氫化可的松，建立慢性難愈合創(chuàng)面模型。

1.3.2換藥方法 模型組按創(chuàng)面大小外敷單層0.9%氯化鈉溶液紗布；濕潤(rùn)燒傷膏組以MEBO藥膏直接涂抹于創(chuàng)面上，厚度約1 mm，再用濕潤(rùn)燒傷膏浸透的單層紗布按創(chuàng)面大小外敷于創(chuàng)面；康復(fù)新液組創(chuàng)面外噴康復(fù)新液，而后以康復(fù)新液浸透后的單層紗布按創(chuàng)面大小外敷于創(chuàng)面。模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組大鼠均在創(chuàng)面上加蓋兩層消毒干紗布，用膠布“豐”字形固定，

每日定時(shí)換藥2次，連續(xù)12 d，且大鼠均于換藥首日起連續(xù)4 d腹腔注射青霉素80 000 U/d?？瞻讓?duì)照組不做其他處理。

1.3.3超微結(jié)構(gòu)檢測(cè) 在用藥后第3、6、12天，大鼠均切取相同部位大小約為1 mm×1 mm×1 mm的皮膚組織，用醋酸鈾染色法制作成超微病理切片，利用透射電鏡（廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，型號(hào)：日立H-7650），在30 000倍數(shù)下觀察大鼠皮膚創(chuàng)面細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.3.4RT-PCR檢測(cè) 在用藥后第12天，大鼠均取相同部位的皮膚組織，深度以達(dá)到真皮全層為宜，沿皮面平行切下皮膚組織，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)；以β-actin為內(nèi)參基因，根據(jù)CT值計(jì)算MAPKK及c-myc mRNA的表達(dá)水平，采用熒光相對(duì)定量分析法計(jì)算結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)的整理和分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用 SNK-q檢驗(yàn)，以 P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1超微病理結(jié)構(gòu)

2.1.1用藥第3天皮膚組織超微病理學(xué)情況 用藥第3天，空白對(duì)照組細(xì)胞核呈梭形，核內(nèi)物質(zhì)散亂，大量線粒體內(nèi)無(wú)線粒體脊（見(jiàn)圖1A）。模型組細(xì)胞核未成型，體積變小，核周隙增寬，可見(jiàn)大量空泡 （見(jiàn)圖1B）。濕潤(rùn)燒傷膏組出現(xiàn)核仁壞死，核周隙增寬；胞質(zhì)溶解明顯；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，排列紊亂；線粒體嵴被破壞，線粒體內(nèi)有空泡（見(jiàn)圖1C）。康復(fù)新液組出現(xiàn)細(xì)胞核核周隙凹凸不平，伴有線粒體融合，線粒體數(shù)量減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)色澤暗淡，存在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象（見(jiàn)圖1D）。

2.1.2用藥第6天皮膚組織超微病理學(xué)情況 用藥第6天，空白對(duì)照組細(xì)胞核清晰明顯，形態(tài)圓潤(rùn)，未出現(xiàn)線粒體成片聚集融合現(xiàn)象；胞質(zhì)中可見(jiàn)大量?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)貫穿其中（見(jiàn)圖2A）。模型組細(xì)胞核破壞嚴(yán)重，呈異常的梭形結(jié)構(gòu)，核內(nèi)物質(zhì)散亂；部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，并伴有大量線粒體成片聚集、擠壓，形成網(wǎng)狀或梭形結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖2B）。濕潤(rùn)燒傷膏組可見(jiàn)結(jié)構(gòu)完整的高爾基體，扁平膜囊、大囊泡、小囊泡；線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，可見(jiàn)數(shù)條線粒體嵴（見(jiàn)圖2C）?？祻?fù)新液組細(xì)胞結(jié)構(gòu)修復(fù)十分明顯，可見(jiàn)全視野內(nèi)大量管狀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布，形成網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖2D）。

2.1.3用藥第12天皮膚組織超微病理學(xué)情況 用藥第12天，空白對(duì)照組細(xì)胞核形態(tài)完整，核仁清晰，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)能觀察到片層隙狀或小管狀結(jié)構(gòu)，并貫穿于線粒體之間（見(jiàn)圖3A）。模型組細(xì)胞核仍未成形，核內(nèi)物質(zhì)溶解消失；線粒體數(shù)量仍然稀少，但部分線粒體可見(jiàn)少量線粒體嵴垂直排列在線粒體內(nèi)膜上；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量稀少（見(jiàn)圖3B）。濕潤(rùn)燒傷膏組的細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)育良好，可見(jiàn)大量高爾基體，結(jié)構(gòu)完整，由數(shù)個(gè)扁平囊泡堆積而呈現(xiàn)出弓形或半球形；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上附著大量核糖體，無(wú)脫顆?，F(xiàn)象（見(jiàn)圖3C）?？祻?fù)新液組細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)育良好，可觀察到大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體生成，大量扁平囊泡聚集呈長(zhǎng)條梭形結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖3D）。

2.2RT-PCR檢測(cè)結(jié)果的比較

2.2.1擴(kuò)增曲線、溶解曲線 在用藥后第12天，對(duì)各組大鼠MAPKK、c-myc mRNA進(jìn)行RT-PCR測(cè)定，分別得出擴(kuò)增曲線、溶解曲線。擴(kuò)增曲線的基數(shù)期均穩(wěn)定在同一水平，CT值穩(wěn)定在10～30之間，拐點(diǎn)清晰，整體平行性良好，溶解曲線平穩(wěn)，溶解峰呈單峰，擴(kuò)增產(chǎn)物有效，未見(jiàn)異常雙峰（見(jiàn)圖4～7）。

2.2.24組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較 4 組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組、濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組較空白對(duì)照組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組較模型組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；濕潤(rùn)燒傷膏組與康復(fù)新液組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05，見(jiàn)表1）。

圖4　MAPKK mRNA擴(kuò)增曲線Figure 4 MAPKK mRNA amplification curve

圖1　用藥第3天皮膚組織超微病理結(jié)構(gòu)?。ù姿徕櫲旧ǎ?0 000）Figure 1 Cellular ultrastructural pathology of the skin wound on day 3

　圖2 用藥第6天皮膚組織超微病理結(jié)構(gòu)?。ù姿徕櫲旧?，×30 000）Figure 2 Cellular ultrastructural pathology of the skin wound on day 6

圖3　用藥第12天皮膚組織超微病理結(jié)構(gòu)?。ù姿徕櫲旧?，×30 000）Figure 3 Cellular ultrastructural pathology of the skin wound on day 12

表1　4組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較 （±s）Table 1 Comparison of the expression level of MAPKK，c-myc mRNA among the four groups

表1　4組MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平比較 （±s）Table 1 Comparison of the expression level of MAPKK，c-myc mRNA among the four groups

注：MAPKK=絲裂原活化蛋白激酶激酶；與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組別　例數(shù)20　0.89±0.17　0.86±0.24模型組　20　0.15±0.07*　0.18±0.05*濕潤(rùn)燒傷膏組　20　0.65±0.11△　0.44±0.07*△康復(fù)新液組　20　0.63±0.13△　0.42±0.08*△F值MAPKK mRNA　c-myc mRNA空白對(duì)照組＜0.001?。?.001 117.811　86.054 P值

圖5　MAPKK mRNA溶解曲線Figure 5 MAPKK mRNA dissociation curve

圖6　c-myc mRNA擴(kuò)增曲線Figure 6 c-myc mRNA amplification curve

圖7　c-myc mRNA溶解曲線Figure 7 c-myc mRNA dissociation curve

3　討論

皮膚慢性難愈合創(chuàng)面在臨床上是一種常見(jiàn)的周?chē)苄约膊。哂胁∫驈?fù)雜、患病時(shí)間長(zhǎng)、病情反復(fù)發(fā)作、愈后極易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)［8］。皮膚慢性難愈合創(chuàng)面愈合的關(guān)鍵主要在于增強(qiáng)局部細(xì)胞免疫功能［9］，減少或消除炎性反應(yīng)［10］，以完成對(duì)創(chuàng)面的上皮化再生修復(fù)［11］。對(duì)細(xì)胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)和創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)信號(hào)通路的研究能反映出在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中細(xì)胞增殖、分化、代謝及死亡諸多方面的表現(xiàn)和調(diào)控方式，對(duì)揭示機(jī)體損傷修復(fù)與再生的機(jī)制具有重要意義。

本研究皮膚組織超微病理結(jié)構(gòu)顯示，MEBT/MEBO能促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，逐步改善損傷細(xì)胞的超微病理結(jié)構(gòu)。盡管用藥后第3天，各組細(xì)胞超微病理結(jié)構(gòu)變化不明顯，細(xì)胞器仍存在一定的損傷；但是從用藥后第6天開(kāi)始，濕潤(rùn)燒傷膏組大量線粒體的超微結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，康復(fù)新液組則出現(xiàn)數(shù)量眾多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；特別在用藥后第12天，濕潤(rùn)燒傷膏組大鼠的細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，說(shuō)明MEBT/MEBO能保護(hù)細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)完整及線粒體膜的完整性，改善因病理因素破壞而導(dǎo)致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的氧化應(yīng)激狀態(tài)，重建核仁并促進(jìn)大小亞基的協(xié)調(diào)能動(dòng)性，防止細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常［12］。值得關(guān)注的是，MEBT/MEBO在改善損傷細(xì)胞的超微病理結(jié)構(gòu)過(guò)程中，由于細(xì)胞器結(jié)構(gòu)功能恢復(fù)正常，同時(shí)也能促進(jìn)大鼠潰瘍創(chuàng)面成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)新生毛細(xì)血管的形成，有效地改善創(chuàng)面局部炎癥，加快肉芽組織的生長(zhǎng)，從而促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)［13］。

MAPKK mRNA在參與傷口的愈合過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，能調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫，清除過(guò)多的中性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)堿性成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等的合成與分泌，調(diào)控細(xì)胞凋亡［14］。c-myc mRNA是MAPKK mRNA的主要下游底物，可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，啟動(dòng)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化，調(diào)控細(xì)胞凋亡，并在核內(nèi)傳遞信息，具有轉(zhuǎn)錄因子活性的作用［15］。本研究中RT-PCR的檢測(cè)結(jié)果顯示，濕潤(rùn)燒傷膏組、康復(fù)新液組較模型組的 MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平增高，說(shuō)明MEBT/MEBO能提高M(jìn)APKK、c-myc mRNA的表達(dá)水平，通過(guò)調(diào)控MAPKK、c-myc mRNA的傳導(dǎo)信號(hào)通路，使干細(xì)胞在原位持續(xù)分裂再生，有效改善創(chuàng)面局部的微環(huán)境，完成潰瘍創(chuàng)面的愈合。

總之，本研究結(jié)果顯示MEBT/MEBO能明顯改善SD雄性大鼠表皮生長(zhǎng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，提高潰瘍創(chuàng)面中 MAPKK、c-myc mRNA的表達(dá)水平，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)效應(yīng)，加速成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖分化，該改變可能是MEBT/MEBO促進(jìn)大鼠慢性難愈合創(chuàng)面恢復(fù)的作用機(jī)制之一，將為今后深入探討慢性難愈合創(chuàng)面的機(jī)制研究提供可能的參考指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)僅研究了用藥后第12天MEBT/MEBO對(duì)MAPKK、c-myc mRNA表達(dá)水平改變情況的影響，尚缺乏對(duì)這些指標(biāo)在整個(gè)創(chuàng)面愈合過(guò)程中的動(dòng)態(tài)觀察。經(jīng)MEBT/MEBO治療后，對(duì)大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的恢復(fù)具有明顯的效果，但停止用藥治療后，創(chuàng)面能否保持正常還有待在今后的研究中繼續(xù)觀察。

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（本文編輯：李婷婷）

Ultrastructural Pathology and the Mechanism of Expression of MAPKK mRNA&c-myc mRNA of Chronic RefractoryWound Treated by MEBT/MEBO

TANG Qian-li，HUANG Xin，WANG Yu，et al.Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China

Objective To study the ultrastructural pathology and the mechanism of expression of MAPKK mRNA&c -myc mRNA of chronic refractory ulcer wound treated by MEBT/MEBO.Methods A total of 80 SPF male SD rats were randomly divided into four groups by random number table method：blank control group，model group，MEBO ointment group and new healing lotion group，20 rats in each group.The full-thickness skin defect open wound was established among rats in blank control group，full-thickness skin refractory ulcer wound was established among rats in model group，MEBO ointment group and new healing lotion group.After the establishment of wound，rats in blank control group were not managed，rats in model group were dressed with normal saline，rats in MEBO ointment group were dressed with MEBO，rats in new healing lotion group were sprayed with new healing lotion.3，6，12 days after treatment，the cellular ultrastructural structure of the skin wound was observed using TEM microscope.12 days after treatment，the expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA using RT-PCR technology.Results 3，6 and 12 days after treatment，the cellular ultrastructural structure of the skin wound among rats in MEBO ointment group and new healing lotion group gradually improved，morphology and structure of cell organs restored tonormal.There were significant differences in expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA among four groups（P＜0.05）.The expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA in model group，MEBO ointment group and new healing lotion group were significantly lower than those in blank control group，respectively；while the expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA in MEBO ointment group and new healing lotion group were significantly higher than those in model group，respectively（P＜0.05）.There was no significant difference in expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA between MEBO ointment group and new healing lotion group（P＞0.05）.Conclusion MEBT/MEBO can improve cellular pathological ultrastructure，increase the expression levels of MAPKK mRNA and c-myc mRNA，and promote chronic refractory ulcer wound healing.

Chronic Refractory Ulcer；MEBT/MEBO；Pathology；MAPKK；c-myc

R 644

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.03.013

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360547）；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2013GXNSFDA019020）

533000廣西百色市，右江民族醫(yī)學(xué)院（唐乾利，王宇，王兵，黃許森，李輝，金萌，呂震）；廣西中醫(yī)藥大學(xué) （黃欣，何曉微，王兵，李輝，金萌，呂震）

唐乾利，533000廣西百色市，右江民族醫(yī)學(xué)院；E-mail：tangqianliyy@126.com

2014-07-21；

2014-11-21）