冠心病慢性心力衰竭患者血漿白介素-10和轉(zhuǎn)化生長因子-β1的研究

王歡 胡元會 孟昊 賈秋蕾 褚瑜光

臨床研究

冠心病慢性心力衰竭患者血漿白介素-10和轉(zhuǎn)化生長因子-β1的研究

王歡 胡元會 孟昊 賈秋蕾 褚瑜光

目的 評價(jià)血漿白介素-10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）在冠心病慢性心力衰竭（CHF）過程中的變化和意義。方法 選擇2013年8月至2014年2月中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科住院患者125例，其中慢性心力衰竭患者93例，非心力衰竭患者32例，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血漿IL-10和TGF-β1水平。結(jié)果 冠心病CHF組血漿TGF-β1為（219.99±136.70）pg/ml，低于非心力衰竭組的（646.57±248.06）pg/ml，而血漿 IL-10 為（7.88±3.79）pg/ml，高于冠心病非心衰組的（3.10±1.92）pg/ml，且兩組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 IL-10和TGF-β1水平與心衰嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可作為評價(jià)心衰嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一。

冠狀動脈疾??； 慢性心力衰竭； 白介素-10； 轉(zhuǎn)化生長因子-β1

慢性心力衰竭（CHF）是各種心臟疾病發(fā)展至終末狀態(tài)的一種綜合征[1]。神經(jīng)-內(nèi)分泌-細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)在CHF發(fā)展過程中起到了非常重要的作用。研究[2]證實(shí)，在CHF發(fā)展過程中，高水平的促炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）和白介素-6（IL-6）可降低心肌收縮力，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡。而關(guān)于抗炎性細(xì)胞因子白介素-10（IL-10）和TGF-β1的研究較少。本研究通過測定CHF患者血漿IL-10和TGF-β1水平，了解其在CHF發(fā)展過程中的變化情況。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2013年8月至2014年2月間中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科住院患者125例，其中慢性心力衰竭患者（CHF組）93例，男性 45 例，女性 48 例，平均年齡（71．09±3．97）歲，NYHAⅡ級25例、Ⅲ級35例、Ⅳ級33例；非心力衰竭患者（非CHF組）32例，其中男性14例，女性18例，平均年齡（67．90±4．43）歲，心功能 NYHA 均為Ⅰ級。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照1979年國際心臟病學(xué)會和協(xié)會及衛(wèi)生組織臨床命名標(biāo)準(zhǔn)化聯(lián)合專題組頒布的《缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3,4]，并結(jié)合冠狀動脈造影結(jié)果。冠狀動脈造影采用標(biāo)準(zhǔn)Judkins法，1支或以上冠狀動脈直徑狹窄≥50%判斷為陽性[5]或既往有心梗病史。

慢性心力衰竭診斷采用Framingham心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，參考2009年美國心臟病學(xué)會（ACC）及美國心臟協(xié)會（AHA）關(guān)于《成人慢性收縮性心力衰竭治療指南》[7]，參考彩色多普勒超聲心動圖，左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）＜50%[8]。心功能分級參照1994年紐約心臟病學(xué)會（NYHA）分級標(biāo)準(zhǔn)[9]。

冠心病慢性心力衰竭患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合冠心病和慢性心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡50～75歲；③自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書。完全符合上述三項(xiàng)條件選擇納入本研究。冠心病非心力衰竭患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)，心功能Ⅰ級；②年齡50～75歲；③自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書。完全符合上述三項(xiàng)條件選擇納入本研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床相關(guān)資料不完整；⑵瓣膜性心臟病患者（風(fēng)濕性心臟病、老年退行性心臟瓣膜病、肺心?。?；⑶嚴(yán)重心律失常患者（頻發(fā)室性早搏、Ⅱ度Ⅱ型房室傳導(dǎo)阻滯、Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯）；⑷近3個(gè)月內(nèi)發(fā)生過不穩(wěn)定型心絞痛或急性心肌梗死的患者；⑸惡性腫瘤患者；⑹自身免疫性疾病患者；⑺嚴(yán)重肝、腎功能不全者；⑻合并重度高血壓患者［收縮壓≥160 mm Hg（1 mm Hg=0．133 kPa）和（或）舒張壓≥100 mm Hg]；⑼糖尿病及內(nèi)分泌疾病患者；⑽急性、慢性感染或發(fā)熱患者；⑾近3個(gè)月服用過影響免疫反應(yīng)的中、西藥物患者；⑿精神疾病或行為不能自負(fù)者；⒀妊娠或哺乳期者；⒁不愿參加試驗(yàn)的患者。凡符合上述項(xiàng)目中任意一項(xiàng)者即予以排除。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：①無法判斷療效或資料不全影響療效判斷者；②中途自動退出者。凡符合上述兩項(xiàng)中的任意一項(xiàng)即予以排除。

1.3 研究方法 患者于入院禁食12 h后，第2天清晨采集靜脈血2 ml，置于EDTA試管內(nèi)，室溫靜置30 min后，以3000 r/min離心10 min，分離后的血漿置于-80℃超低溫冰箱冷凍保存待檢。

血漿IL-10水平檢測：嚴(yán)格按照試劑操作說明書檢測，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度由低到高自左至右作為橫坐標(biāo)X軸，450 nm下讀取的各檢測孔OD值作為縱坐標(biāo)Y軸，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（圖1）；分別計(jì)算出各標(biāo)準(zhǔn)品孔及待測樣本孔的OD值。

圖1 OD值與IL-10標(biāo)準(zhǔn)品濃度的擬合曲線

血漿TGF-β1水平檢測：嚴(yán)格按照試劑操作說明書檢測，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度由低到高自左至右作為橫坐標(biāo)X軸，450 nm下讀取的各檢測孔OD值作為縱坐標(biāo)Y軸，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（圖2）；分別計(jì)算出各標(biāo)準(zhǔn)品孔及待測樣本孔的OD值。

圖2 OD值與TGF-β1標(biāo)準(zhǔn)品濃度的擬合曲線

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用盲法，由第3方人員統(tǒng)計(jì)。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入計(jì)算機(jī)，采用SPSS 20．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料以±s表示，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性檢驗(yàn)和滿足方差齊性檢驗(yàn)，使用t檢驗(yàn)或單因素的方差分析。計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，比較使用卡方檢驗(yàn)；相關(guān)性分析使用Spearmen相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 本研究共納入患者125例，CHF組患者93例，非CHF組患者32例。經(jīng)檢驗(yàn)，兩組在年齡、性別比例，NYHA心功能分級組間年齡、性別比例方面比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。見表1、2。

表1CHF組與非CHF組性別、年齡構(gòu)成［±s，例數(shù)及百分率（%）]

表1CHF組與非CHF組性別、年齡構(gòu)成［±s，例數(shù)及百分率（%）]

組別 例數(shù) 年齡（歲） 男性 女性CHF 組 93 71.09±3.97 45（48.38） 48（51.62）非 CHF 組 32 67.90±4.43 14（43.75） 18（56.25）

表2 NYHA不同心功能分級組性別、年齡構(gòu)成［±s，例數(shù)及百分率（%）]

表2 NYHA不同心功能分級組性別、年齡構(gòu)成［±s，例數(shù)及百分率（%）]

NYHA分級 例數(shù) 年齡（歲） 男性 女性Ⅰ32 67.90±4.43 14（43.75） 18（56.25）Ⅱ25 66.36±7.81 13（52.00） 12（48.00）Ⅲ35 72.03±2.13 15（42.86） 20（57.14）Ⅳ33 70.76±4.12 15（48.39） 18（51.61）

2.2 兩組患者血漿IL-10和TGF-β1水平比較 經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，CHF組與非CHF組血漿IL-10水平分別為（7.88±3.79）pg/ml和（3.10±1.92）pg/ml，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；TGF-β1 水平CHF 組為 （219.99±136.70）pg/ml，非 CHF 組為（646.57±248.06）pg/ml，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CHF組血漿IL-10高于非CHF組，而血漿TGF-β1低于冠心病非CHF組。

2.3 NYHA不同心功能分級患者血漿IL-10水平比較 經(jīng)多因素方差分析（ANOVA），F(xiàn)=2.619，P＜0.05，可以認(rèn)為血漿IL-10水平在NYHA心功能分級組間不全相同。根據(jù)均值的比較，四組血漿IL-10水平由高到低依次為NYHAⅣ、NYHAⅢ、NYHAⅡ、NYHAⅠ。見表3。

表3NYHA不同心功能分級患者血漿 IL-10 水平比較（±s）

表3NYHA不同心功能分級患者血漿 IL-10 水平比較（±s）

注：與 NYHAⅡ、Ⅲ、Ⅳ相比，aP＜0.05；與 NYHA Ⅲ、Ⅳ相比，bP＜0.05；與NYHA Ⅳ相比，cP＜0.05

NYHA 分級 例數(shù) IL-10（pg/ml）Ⅰ32 1.57±1.28aⅡ25 3.93±1.26bⅢ35 9.39±5.15cⅣ33 13.53±2.63

由NYHA心功能分級與血漿IL-10水平的相關(guān)性檢驗(yàn)得Spearman r=0.189，P＞0.05，尚不能提示血漿IL-10水平隨NYHA分級增高而升高。

2.4 NYHA不同心功能分級患者血漿TGF-β1水平比較 經(jīng)多因素方差分析（ANOVA），F(xiàn)=13.823，P=0.000，可以認(rèn)為血漿TGF-β1水平在NYHA心功能分級組間不全相同。根據(jù)均數(shù)的比較，四組血漿TGF-β1水平由高到低依次為NYHAⅠ、NYHAⅡ、NYHAⅢ、NYHAⅣ。見表4。

表4NYHA不同心功能分級患者血漿 TGF-β1水平比較（±s）

表4NYHA不同心功能分級患者血漿 TGF-β1水平比較（±s）

注：與 NYHAⅡ、Ⅲ、Ⅳ相比，aP＜0.05

NYHA 分級 例數(shù) TGF-β1（pg/ml）Ⅰ32 646.57±48.06aⅡ25 246.04±57.96Ⅲ35 236.86±83.47Ⅳ33 222.86±38.44

由NYHA心功能分級與血漿TGF-β1水平的相關(guān)性檢驗(yàn)得 Spearman r=-0.195，P>0.05，尚不能提示血漿TGF-β1水平隨NYHA分級增高而降低。

3 討論

IL-10是一種由160個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，是一種重要的負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。它可以抑制前炎癥細(xì)胞因子如TNF、IL-6、IL-1等的產(chǎn)生，單核細(xì)胞及T細(xì)胞的活化，并能抑制巨噬、單核細(xì)胞產(chǎn)生NO[10]。在CHF的進(jìn)程中，IL-10因能下調(diào)多種心肌破壞性細(xì)胞因子而對心肌有保護(hù)作用[11]。

Stumpf等[12]研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭患者血清IL-10水平明顯低于健康對照組，且與心力衰竭程度呈負(fù)相關(guān)。同時(shí)，有學(xué)者[13,14]探討IL-10與CHF關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，CHF患者血清IL-10水平顯著高于對照組，且隨著心功能受損程度的加重而明顯升高。而鄧元江等[15]應(yīng)用液相芯片技術(shù)研究CHF患者血清細(xì)胞因子的變化，結(jié)果顯示CHF患者與正常對照組相比，TNF-α和IL-6明顯增加，而IL-10水平無明顯變化，從而認(rèn)為炎性細(xì)胞因子與抗炎性細(xì)胞因子的紊亂參與了CHF的發(fā)生和發(fā)展。

TGF-β是一種多功能細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化，刺激多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)等活性物質(zhì)的合成和分泌，參與胞外基質(zhì)構(gòu)成及降解，具有抑制和促進(jìn)雙重作用。在哺乳動物中TGF-β1所占比例最高（>90%）、功能最多、活性最強(qiáng)、分布最廣泛，已成為臨床和實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)[16]。

苗夢露等[17]用可定性的免疫熒光染色法和可定量的Western blot法測定心衰大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的表達(dá)，研究結(jié)果分別顯示模型組大鼠心肌細(xì)胞TGF-β1表達(dá)高于假手術(shù)組。于欣等[18]探索慢性心力衰竭與細(xì)胞因子變化的關(guān)系，將49例CHF患者與 30例健康者血清 TNF-α、IL-6、CRP和TGF-β1濃度比較，結(jié)果顯示CHF患者TGF-β1水平明顯低于健康對照組，與LVEF呈正相關(guān)，認(rèn)為細(xì)胞因子濃度的變化可以作為評估CHF患者的參考指標(biāo)。

上述研究顯示，在慢性心衰過程中IL-10和TGF-β1水平研究尚不一致。而本研究結(jié)果顯示，冠心病慢性心力衰竭患者與非心力衰竭患者比較，CHF血漿IL-10水平明顯高于非心力衰竭患者，且隨心功能受損程度的增加而升高；而血漿TGF-β1水平明顯低于非心力衰竭患者。血漿IL-10水平的升高，提示抗炎性細(xì)胞因子的增加對慢性心力衰竭患者心肌的保護(hù)作用增強(qiáng)，以抵消炎性細(xì)胞因子對心肌的損害，其在心衰的發(fā)展過程中起重要作用。而TGF-β的生物學(xué)多效性決定了其細(xì)胞調(diào)節(jié)功能的多面性[19]：炎癥初期TGF-β具有免疫刺激作用，可募集炎癥細(xì)胞和促進(jìn)前炎癥因子生成，而在炎癥消散期其免疫抑制活性表現(xiàn)更為突出，抑制T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖與活化，抑制細(xì)胞因子的生成，誘導(dǎo)細(xì)胞因子拮抗劑的表達(dá)及抑制免疫球蛋白的分泌等。由于TGF-β1的雙向作用，故在不同研究中，可能由于所選擇人群的基礎(chǔ)病變不同、病程不同等諸多原因的影響，從而造成研究結(jié)果的不一致。在本研究中，CHF患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞低于非CHF患者，且隨著NYHA心功能分級的增加，表明慢性心力衰竭患者體內(nèi)存在免疫激活狀態(tài)。

但在本研究中，血漿IL-10水平較對照組出現(xiàn)升高趨勢，而TGF-β1則有下降趨勢。IL-10和TGF-β1同樣都是免疫抑制因子，有抑制炎癥反應(yīng)的作用，兩者水平卻呈現(xiàn)相反現(xiàn)象，在CHF時(shí)TGF-β1水平降低，可能與TGF-β1分泌不足勝過TGF-β的升高所致，同時(shí)由于其濃度降低，心肌保護(hù)作用減弱，相應(yīng)地使炎性反應(yīng)因子的心肌損傷作用增強(qiáng)，從而促進(jìn)了CHF的發(fā)展。在這個(gè)失衡中過度的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子的過度產(chǎn)生，這些上調(diào)炎性細(xì)胞因子通過多種機(jī)制抑制心肌收縮，調(diào)節(jié)心肌重構(gòu)，包括引起心肌肥大、纖維化和凋亡，同時(shí)能引起內(nèi)皮損害，導(dǎo)致外周血管損害[20]。

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The study of the plasma levels of IL-10，TGF-β1 in patients with coronary heart disease and chronic heart failure

WANG Huan＊，HU Yuan-hui，MENG hao，et al.＊Cardiovascular Department，Guang′anmen Hospital，China A－cademy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China

HU Yuan-hui，E-mail:huiyuhui55@sohu.com

ObjectiveTo determine the levels of plasma interleukin-10 （IL-10） and transforming growth factor-β1（TGF-β1）in coronary heart disease patients with chronic heart failure.MethodsFrom August 2013 to February 2014，a total of 125 in-patients admitted in Guang′anmen Hospital of Traditional Chinese A－cademy of Cardiology were enrolled，of whom 93 patients with chronic heart failure，non-heart failure patients 32 people.The plasma levels of IL-10，TGF-β1 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.ResultsThe plasma levels of TGF-β1 in chronic heart failure were lower than the non-failure group，while the plasma levels of IL-10 were higher than the non-coronary heart failure group.ConclusionThe plasma levels of IL-10，TGF-β1 are closely related to the severity of heart failure and can be evaluated as an indicator of the severity of heart failure.

Coronary heart disease； Chronic heart failure； IL-10； TGF-β1

北京市自然科學(xué)基金（項(xiàng)目編號：7122154）

100053 北京市，中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科（王歡、胡元會、褚瑜光）；北京中醫(yī)藥大學(xué)在讀碩士研究生（孟昊、賈秋蕾）

胡元會，E-mail:huiyuhui55@sohu.com

10．3969/j．issn．1672－5301．2015．02．009

R541.4

A

1672-5301（2015）02-0129－05

2014-08-18）