固相萃取—高效液相色譜法測(cè)定雞蛋中蘇丹紅染料

馮輝等

摘要 建立了雞蛋中蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ殘留測(cè)定的高效液相色譜方法。樣品經(jīng)蘇丹紅專(zhuān)用SPE小柱凈化、濃縮，Waters SymmetryShield C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定。本方法的檢測(cè)限為0.1 mg/kg，4種蘇丹紅染料在濃度1～1 000 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈線(xiàn)性相關(guān)。在空白雞蛋中添加20～600 mg/kg濃度下，4種蘇丹紅的平均回收率為88.6%～101.0%，結(jié)果表明，該法簡(jiǎn)單、靈敏、特異性強(qiáng)，縮短了分析時(shí)間，提高靈敏度，節(jié)約試劑，降低成本，適用于雞蛋中蘇丹紅染料殘留的測(cè)定。

關(guān)鍵詞 雞蛋；蘇丹紅；固相萃??；高效液相色譜

中圖分類(lèi)號(hào) O652.63；TS207.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）14-0291-01

蘇丹紅屬偶氮系列染料，是一種有毒色素，并非食品添加劑，目前已確認(rèn)了其有機(jī)偶氮染料的毒性?！凹t心鴨蛋”事件之后，我國(guó)已經(jīng)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)包括鮮雞蛋在內(nèi)的各類(lèi)蛋制品，而蘇丹紅是其中一項(xiàng)重點(diǎn)檢測(cè)的內(nèi)容[1-5]。迄今為止，主要通過(guò)高效液相色譜法、GC-MS分析法檢測(cè)食品中蘇丹紅染料，《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法（GB/T 19681-2005）》主要適用于辣椒及其制品、香腸等肉制品中蘇丹紅染料的檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，雞蛋中4種蘇丹紅染料的回收率不理想，達(dá)不到雞蛋中蘇丹紅檢測(cè)的要求。因此，本研究旨在通過(guò)改善提取凈化條件，建立一種操作步驟簡(jiǎn)單，同時(shí)提高雞蛋中4 種蘇丹紅染料回收率的液相色譜測(cè)定方法[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 供試材料。試驗(yàn)材料為雞蛋。

1.1.2 儀器與試劑。美國(guó)Waters 2695型液相色譜儀帶Waters2475型熒光檢測(cè)器，SC-8L-150型固相萃取儀，美國(guó)OA-SYS氮吹儀，德國(guó)IKA GENIUS 3漩渦混合器，上海科導(dǎo)SK5200H超聲波清洗機(jī)，美國(guó)梅特勒-托利多ML204電子天平，德國(guó)賽多利斯超純水儀，上海安譜公司蘇丹紅專(zhuān)用SPE小柱（500 mg/6 mL）。德國(guó)DR.公司蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 標(biāo)準(zhǔn)品（99.6%）。二氯甲烷、正己烷、乙腈為色譜純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品配制。具體包括：①標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制。精密稱(chēng)取按其純度折算為100%質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)品各0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg/mL溶液[1-5]。4 ℃冰箱保存。②標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：根據(jù)需要準(zhǔn)確移取相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[1-7]。

1.2.2 提取。稱(chēng)取均勻試樣2 g（精確至0.001 g），加入3 mL正己烷漩渦混合10 s，待凈化。

1.2.3 凈化洗脫濃縮。蘇丹紅專(zhuān)用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化。將待凈化液上樣到小柱上，然后再用2 mL正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，也上樣到柱上，保持1.0 mL/min流速過(guò)柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液棄去。用5 mL二氯甲烷洗脫小柱，收集洗脫液，40 ℃氮?dú)獯蹈桑? mL乙腈定容，超聲1 min，漩渦混合10 s，過(guò)0.22 μm親水PTTE針式濾器過(guò)濾，上機(jī)檢測(cè)[4-6]。

1.3 色譜條件

Waters SymmetryShield C18 色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫35 ℃，流動(dòng)相為乙腈，流量1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)485 nm，進(jìn)樣量10 μL[7-9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取小柱的選擇

試驗(yàn)比較了安譜蘇丹紅專(zhuān)用SPE小柱和人工填裝的中性氧化鋁柱。采用商業(yè)固相萃取柱，與自己填裝的氧化鋁柱相比，不需要進(jìn)行復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測(cè)試，節(jié)省大量時(shí)間，穩(wěn)定性好，整個(gè)檢測(cè)操作時(shí)間不超過(guò)1 h，溶劑使用量少，回收率較高。標(biāo)準(zhǔn)品、空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品圖譜如圖1所示。

2.2 流動(dòng)相的確定

采用甲醇—水、乙腈—水、100%乙腈、100% 甲醇等作為流動(dòng)相，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)比較，最后采用100%乙腈作為流動(dòng)相。這是因?yàn)榇藯l件下流動(dòng)相配制簡(jiǎn)單，分離效果較好，且保留時(shí)間適中。

2.3 未知樣品中蘇丹紅的含量測(cè)定

利用本方法對(duì)市售的10種樣品進(jìn)行檢測(cè)，由分析結(jié)果可知，蘇丹紅均未檢出。

2.4 檢出限、線(xiàn)性范圍、回收率和精密度

按3倍信噪比計(jì)算，方法的檢出限約為0.1 mg/kg。根據(jù)上述色譜條件對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣分析，以峰面積定量，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積之間的線(xiàn)性回歸方程，如表1所示。取空白雞蛋樣品8份，按3個(gè)加標(biāo)水平加標(biāo)，按上述條件前處理和色譜條件上機(jī)測(cè)試，測(cè)定蘇丹紅的加標(biāo)回收率88.6%～101.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，精密度良好，滿(mǎn)足分析要求。

3 結(jié)論與討論

本方法采用成品商業(yè)固相萃取柱對(duì)雞蛋中蘇丹紅染料進(jìn)行凈化、提取，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，快速、準(zhǔn)確率高、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，線(xiàn)性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度均理想，能更好地滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室分析檢測(cè)，具有較高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

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