電針治療功能性消化不良大鼠海馬體NMDA受體的調(diào)節(jié)機(jī)制＊

李躍兵 張 泓 李鐵浪 曾序求

湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，湖南省長(zhǎng)沙市 410208

功 能 性 消 化 不 良［1～3］（Functional dyspepsia，F(xiàn)D）是以消化道動(dòng)力與內(nèi)臟感覺異常為主要病理生理特征，并有多種癥狀重疊、多變或相互轉(zhuǎn)換以及反復(fù)發(fā)作、較難治愈等特點(diǎn)的一組消化系統(tǒng)疾病。海馬體［4～6］是大腦邊緣系統(tǒng)的主要組成部分，一方面接受內(nèi)外環(huán)境的刺激，及時(shí)做出反應(yīng)；另一方面接受體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的反饋信息，調(diào)整其狀態(tài)，產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)。NMDA 受體［7～9］，即為 N－甲基－D－天冬氨酸受體（N－methyl－D－aspartic acid receptor，NMDA），是離子型天冬氨酸受體的一個(gè)亞型，分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，藥理學(xué)性質(zhì)獨(dú)特，不僅在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要的生理作用，而且對(duì)神經(jīng)元回路的形成亦起著關(guān)鍵的作用。NMDA受體廣泛分布于突觸后膜，在對(duì)輸入海馬體的信號(hào)調(diào)節(jié)中，NMDA受體是唯一的突觸后處理場(chǎng)所。筆者將海馬體NMDA受體調(diào)節(jié)通路引入對(duì)功能性消化不良的研究觀察中，為探索胃腸病發(fā)病機(jī)制提供了新的研究層面。

1 實(shí)驗(yàn)材料

動(dòng)物健康SD大鼠60只，湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（SPF級(jí)）。飼養(yǎng)溫度20～25℃，濕度50%～70%，體重200～250g，雄性。

2 方法

2.1 分組 60只大鼠隨機(jī)分為4組，每組15只，分別為空白對(duì)照組（A組）、FD模型組（B組）、電針穴位＋模型組（C組）、電針＋MK－801干擾組（D組）（MK－801為NMDA受體拮抗劑）

2.2 造模 采用復(fù)合病因造模法［10］，將SD大鼠于每天上午9：00置于束縛盒中限制3h；下午2：00置于溫水（22±1）℃中游泳10min；隔日喂食（隔日禁食，隔日足量給食），連續(xù)3周。

2.3 取穴定位 參照“十一五”國(guó)家規(guī)劃教材《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》（中國(guó)針灸出版社，李忠仁主編，2007.1），大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜定位及擬人對(duì)照法定位。足三里：位于小腿外側(cè)，膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5mm；中脘：從胸劍聯(lián)合至臍中以松緊帶平均分為8等份（每一等份模擬大鼠同身寸1寸），中脘穴為臍上4寸。

2.4 電針?lè)椒?所有穴位均用直刺，選擇電針?lè)椒ā４笫笄逍压潭?，各穴均?0號(hào)1寸針，針刺深度0.2～0.3寸，進(jìn)針后，接華佗牌SDZ－Ⅱ電針治療儀（蘇州醫(yī)療用品有限公司），疏密波（20Hz，波頻率100Hz），強(qiáng)度以針柄輕微抖動(dòng)為度，每次留針20min，于造模第3天開始針刺，隔日1次，8次為1個(gè)療程，共2個(gè)療程（16次）。

2.5 MK－801注射方法 微量注射 MK－801溶液0.5μl（大鼠海馬體的注射位點(diǎn)：300～350g SDmale rats：AP＝－2.5L＝±4.4dv＝－7.9）。

3 實(shí)驗(yàn)步驟

造模完成后第2天，C、D兩組電針足三里、中脘穴和阿是穴，每日1次，每次留針20min，共14次，D組于大鼠海馬體微量注射 MK－801溶液0.5μl。造模完成后第36天，每組取8只直接斷頭取腦，無(wú)菌剝離海馬CA1區(qū)，BLA區(qū)，DG區(qū)存放于－70℃冰箱做RT－PCR。

4 檢測(cè)指標(biāo)

4.1 胃排空率的測(cè)定 治療結(jié)束后，各組大鼠禁食24h后，給予每只大鼠按1ml／100g灌胃容積灌服營(yíng)養(yǎng)性半固體糊 （羧甲基纖維素鈉5g、奶粉8g、糖4g、淀粉4g、活性炭3g、蒸餾水約150ml），30min后處死動(dòng)物，打開腹腔，分離出胃。沿胃幽門處剪取胃，拭干，稱全重（M1），再沿胃大彎處剪開胃，用生理鹽水洗凈內(nèi)容物，用濾紙拭干，稱胃凈重（M2），計(jì)算胃殘留率。胃殘留率（%）＝（M1－M2）／灌胃量×100%。

4.2 小腸推進(jìn)率的測(cè)定 治療結(jié)束后，各組大鼠禁食、灌胃方法同前，30min后處死動(dòng)物，打開腹腔，分離出腸。量小腸全長(zhǎng)（L1）以及幽門至炭末所達(dá)最前端的長(zhǎng)度（L2），計(jì)算腸推進(jìn)率，小腸推進(jìn)率（%）＝L2／L1×100%。

4.3 中樞神經(jīng)系統(tǒng)NMDA 受體通路：用免疫組化、RT－PCR檢測(cè)各組大鼠海馬體BLA區(qū)的NMDA受體亞基NR1、NR2變化。

5 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)均輸入計(jì)算機(jī)，用SPSS19.0windows軟件進(jìn)行處理。各檢測(cè)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，均數(shù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6 結(jié)果

C組、D組大鼠胃排空與B組相比，明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明C組對(duì)FD的治療有效，詳見表1。

表1 電針對(duì)FD大鼠胃排空、小腸推進(jìn)率和NMDA受體NR1、NR2的影響（±s）

表1 電針對(duì)FD大鼠胃排空、小腸推進(jìn)率和NMDA受體NR1、NR2的影響（±s）

注：C組與A組、B組、D組比較，P＜0.05。

組別 胃排空率（%）小腸推進(jìn)率（%）NR1含量（μmol／L）NR2含量（μmol／L）A組 89.00±7.59 49.00±2.59 0.14±0.0170.03±0.001 B組 48.20±10.17 48.20±1.17 0.22±0.028 0.02±0.015 C組 58.35±8.71 38.35±1.71 0.19±0.039 0.19±0.03 D組 56.39±17.47 46.39±1.47 0.13±0.0300.04±0.028

7 討論

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步明確電針具有改善FD胃腸動(dòng)力障礙、降低內(nèi)臟敏感性、良性調(diào)節(jié)胃腸功能紊亂等作用。也初步闡明電針治療功能性消化不良，可能是通過(guò)海馬體的NMDA受體這一通路對(duì)認(rèn)知情感中樞與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)進(jìn)行良性平衡調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)的。

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