雌激素受體α基因多態(tài)性與男性不育關(guān)系的 Meta分析

李天賦，周青，張翠，蔣衛(wèi)軍，吳秋月，李衛(wèi)巍，許豪勤，夏欣一，（.江蘇大學(xué)生命科學(xué)研究院，江蘇 鎮(zhèn)江0；.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院解放軍臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，江蘇 南京 000；.江蘇省計(jì)劃生育科研所，江蘇南京 009）

雌激素受體α基因多態(tài)性與男性不育關(guān)系的 Meta分析

李天賦1，周青1，張翠2，蔣衛(wèi)軍2，吳秋月2，李衛(wèi)巍2，許豪勤3，夏欣一1，2
（1.江蘇大學(xué)生命科學(xué)研究院，江蘇 鎮(zhèn)江212013；2.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院解放軍臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，江蘇 南京 210002；3.江蘇省計(jì)劃生育科研所，江蘇南京 210029）

目的：運(yùn)用 Meta分析的方法系統(tǒng)評(píng)價(jià)雌激素受體α基因多態(tài)性2位點(diǎn)（rs2234693和 rs9340799）與男性不育的相關(guān)性。方法：檢索 PubMed、EMABSE、萬(wàn)方、中國(guó)知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫(kù)，初篩得到文獻(xiàn) 24篇，對(duì)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)使用 Stata 11.0軟件在4個(gè)模型中進(jìn)行分析，計(jì)算優(yōu)勢(shì)比值及95％可信區(qū)間評(píng)價(jià)其關(guān)聯(lián)度，并進(jìn)行敏感性分析及發(fā)表偏倚的評(píng)估。結(jié)果：共納入6篇病例 對(duì)照研究，包括774名患者和841名健康對(duì)照者。Meta分析結(jié)果顯示rs2234693基因的3種模型CC vs.TT（OR=0.72，95％CI:0.54-0.96）、CT vs.TT（OR=0.74，95％CI:0.58-0.94）和（CC+CT）vs.TT（OR=0.73，95％CI:0.58-0.91）有明顯相關(guān)性，提示原發(fā)性不育的風(fēng)險(xiǎn)降低。而 rs9340799基因2種模型AA vs.GG（OR=1.67，95％CI:1.21-2.32）和 AA vs.（GA+GG）（OR=1.63，95％CI:1.32-2.03）也有明顯相關(guān)性，提示男性不育的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。結(jié)論:rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險(xiǎn)性，而rs9340799 AA基因型可能與男性不育相關(guān)。

雌激素受體α；男性不育；基因多態(tài)性

［Abstract］Objective:To analysis the relationship between two polymorphism genes of estrogen receptor α rs2234693 and rs9340799 and male infertility by Meta-analysis.Methods:We searched PubMed，EMABSE，CNKI and WanFang database，while 24 articles were concluded.Meta analysis was performed using Stata 11.0 software.Calculated the odds ratio and 95％ confidence interval and evaluated the strength of the associations，sensitivity and publication bias.Results:For the rs2234693，there were significant association in the comparison of CC vs.TT（OR=0.72，95％CI:0.54-0.96），CT vs.TT （OR=0.74，95％CI:0.58-0.94）and（CC+CT）vs.TT（OR=0.73，95％CI:0.58-0.91）with male infertility.For rs9340799 polymorphism，increased risks were observed for the comparison of AA vs.GG（OR=1.67，95％CI:1.21-2.32）and AA vs.（GA+GG）（OR=1.63，95％CI:1.32-2.03）.Conclusion:The rs2234693 CC genotype was associated with the decreased risk for male infertility；however，the rs9340799 AA genotype was associated with an increased risk for male infertility.

［Key words］estrogen receptor α；male infertility；polymorphisms

男性因素是造成20％～25％的家庭無(wú)法生育 的原因，其中約有一半是特發(fā)性不育［1］。男性不育患者中15％是由遺傳因素所致，包括染色體變異和基因突變，造成了精子發(fā)生障礙和精子質(zhì)量下降［2］。以往觀點(diǎn)認(rèn)為雌激素是“女性”激素，但近來(lái)越來(lái)越多的學(xué)者開始關(guān)注雌激素在男性生殖中的調(diào)節(jié)作用［3］。男性生殖系統(tǒng)中附睪、Sertoli細(xì)胞、Leydig細(xì)胞和生精細(xì)胞均存在雌激素［4］。研究發(fā)現(xiàn)［5］在發(fā)育過(guò)程中，補(bǔ)充雌激素會(huì)減少 Sertoli細(xì)胞數(shù)量并降低睪酮的生成，也會(huì)破壞胎兒的 Leydig細(xì)胞發(fā)育，抑制成人減數(shù)分裂后精子細(xì)胞的凋亡［6］。雌激素的生理功能在發(fā)育的不同階段受到雌激素受體（estrogen receptors，ER）的調(diào)控。ER位于人染色體6q25，分為α、β兩類，兩者在雄性生殖系統(tǒng)的分布有所不同，研究結(jié)果也不盡相同［7］。ERα有多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，其中位于內(nèi)含子區(qū)域的 rs2234693、rs9340799研究較多［8］。近年來(lái)研究顯示 ERα與精子發(fā)生障礙有密切關(guān)聯(lián)，但研究結(jié)果卻不一致。為了評(píng)估ERα基因多態(tài)性與男性不育的相關(guān)性，我們基于先前的研究進(jìn)行了 Meta分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

通過(guò)計(jì)算機(jī)檢索 PubMed、EMABSE、CNKI和萬(wàn)方等數(shù)據(jù)庫(kù)，搜集國(guó)內(nèi)外發(fā)表的關(guān)于 ERα基因多態(tài)性與男性不育相關(guān)性的文獻(xiàn)。中文數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索關(guān)鍵詞為ERα、雌激素受體、rs2234693、rs9340799、多態(tài)性、男性不育。英文檢索詞:ERα、estrogen receptors、rs2234693、rs9340799、polymorphism、male infertility。語(yǔ)種限定為英文和中文，檢索時(shí)間為建庫(kù)至2014年6月30日。同時(shí)輔以文獻(xiàn)追溯。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):①關(guān)于rs2234693、rs9340799多態(tài)性與男性不育關(guān)系的病例對(duì)照研究；②研究對(duì)象為人類；③數(shù)據(jù)齊全，有各基因型在病例組和對(duì)照組的頻數(shù)；④對(duì)照組基因型分布符合Hardy-Weinberg（H-W）遺傳平衡定律。排除標(biāo)準(zhǔn):①單純病例研究、病例報(bào)道、綜述等文獻(xiàn)；②數(shù)據(jù)質(zhì)量不可靠或重復(fù)發(fā)表。

1.3 資料提取

由兩位研究者獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選和資料提取，意見不一致時(shí)通過(guò)討論或由第三位研究者協(xié)助解決。提取數(shù)據(jù)包括:第一作者姓名、發(fā)表年份、種族、病例對(duì)照組基因型分布和對(duì)照組H-W平衡檢驗(yàn)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)照組基因型頻率數(shù)據(jù) H-W檢驗(yàn)使用在線工具（http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwal.pl）分析，P＜ 0.05表示該研究對(duì)照組 H-W檢驗(yàn)不平衡。使用Stata 11.0軟件計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及 95％可信區(qū)間（95％CI），分析ERα基因多態(tài)性與男性不育關(guān)聯(lián)度。共有3種基因型:野生純合型基因（WW）、雜合型基因（WR）和純合突變型基因（RR），計(jì)算顯性遺傳模型（WR+RR）vs.WW、隱性遺傳模型 RR vs. （WR+WW）、共顯性遺傳模型WR vs.RR及WW vs.RR的 OR值，并采用 Q檢驗(yàn)和 I2定量評(píng)估對(duì)納入研究進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)［9］。若各研究結(jié)果之間無(wú)顯著異質(zhì)性（P＞0.05），采用固定效應(yīng)模型 Mantel-Haenszel方法合并OR值；反之則選用隨機(jī)效應(yīng)模型 DerSimonian and Laird法進(jìn)行合并［10］，并對(duì)可能引起異質(zhì)性的因素進(jìn)行亞組分析。I2值在0～25％之間為無(wú)異質(zhì)性；25％～50％為輕度異質(zhì)性；＞50％為高異質(zhì)性。敏感性分析為依次排除單個(gè)文獻(xiàn)后重新進(jìn)行 Meta分析，估計(jì)綜合效應(yīng)大小。通過(guò) Begg秩相關(guān)法和Egger線性回歸法［11］檢驗(yàn)是否存在發(fā)表偏倚，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

檢索到相關(guān)文獻(xiàn)24篇，初步排除16篇，通過(guò)閱讀全文排除1篇數(shù)據(jù)重復(fù)的文獻(xiàn)和1篇缺少具體數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)，最終納入 6篇［3，12-16］。全部為英文文獻(xiàn)，其中4篇來(lái)自歐洲人群［3，13，15，16］，2篇來(lái)自亞 洲黃 種人［12，14］。除文獻(xiàn)［14］外對(duì)照組均符合 H-W平衡。除文獻(xiàn)［13］其余各研究均使用聚合酶鏈反應(yīng) 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的方法（polymerase chain reaction -restriction fragment length polymorphism，PCRRFLP）進(jìn)行基因多態(tài)性鑒定。所有研究對(duì)照組來(lái)源均為健康人群，根據(jù)WHO第5版指南，各項(xiàng)精液指標(biāo)合格。病例組均為不育男性，精液檢查確診為無(wú)精子癥和嚴(yán)重少精子癥，各研究基本情況見表1。

2.2 分析結(jié)果

對(duì)于rs2234693基因，Meta分析顯示歐洲人中CC vs.TT、CT vs.TT和（CC+CT）vs.TT三種模型結(jié)果有明顯相關(guān)性，亞洲人中CC vs.TT、CT vs.TT和（CC+CT）vs.TT三種模型結(jié)果有明顯相關(guān)性，提示 可 能 會(huì) 降 低 不 育 的 風(fēng) 險(xiǎn) 性 （表 2）。對(duì)rs9340799，AA vs.GG和 AA vs.（GA+GG）則增加了不育的風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)，根據(jù)種群進(jìn)行的亞組分析也提示在歐洲人中 AA vs.GG和AA vs.（GA+GG）兩種模型以及亞洲人中AA vs.（GA+GG）模型結(jié)果均有相關(guān)性（表3）。

表1 納入文獻(xiàn)的基本情況

表 2 rs2234693多態(tài)性與男性不育的遺傳易感性分析

表 3 rs9340799多態(tài)性與男性不育的遺傳易感性分析

2.3 異質(zhì)性與敏感性分析

在rs2234693和 rs9340799這兩個(gè)位點(diǎn)的文獻(xiàn)分析中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的異質(zhì)性（P＞0.05）。敏感性分析:剔除不符合H-W平衡的文獻(xiàn)［14］后，顯性遺傳模型合并效應(yīng)量無(wú)改變；依次單獨(dú)剔除1篇文獻(xiàn)后，各遺傳模型合并效應(yīng)量仍無(wú)明顯改變。

2.4 發(fā)表偏倚

通過(guò)Begg漏斗圖和 Egger線性回歸法檢驗(yàn)是否存在發(fā)表偏倚。漏斗圖的形狀并沒有顯示明顯的不對(duì)稱，Egger線性回歸檢驗(yàn)也提示沒有發(fā)表偏倚（圖1、圖2、表4）。

圖1 rs2234693基因多態(tài)性發(fā)表偏倚的漏斗圖（CC vs.TT）

圖2 rs9340799基因多態(tài)性發(fā)表偏倚的漏斗圖（AA vs.GG）

3 討論

大量研究表明，雄性動(dòng)物的血清和睪丸網(wǎng)中都存在一定量的雌激素［17］。雌激素是生殖細(xì)胞的關(guān)鍵因素，參與誘導(dǎo)DNA的氧化損傷，異常的雌激素水平還會(huì)導(dǎo)致精子發(fā)生障礙［18］。雌激素可以通過(guò)增加核呼吸因子1（NRF-1）的表達(dá)調(diào)控線粒體的功能，通過(guò)與 NRF-1啟動(dòng)子區(qū)域的雌激素效應(yīng)器交互作用從而實(shí)現(xiàn)對(duì)線粒體的調(diào)控［3］。以乳房細(xì)胞MCF-7為模型的體外實(shí)驗(yàn)表明，雌激素可以調(diào)控NRF-1的轉(zhuǎn)錄并且增加線粒體的合成［19］。這個(gè)發(fā)現(xiàn)表明ERα的多態(tài)性可以通過(guò) NRF-1的轉(zhuǎn)錄增加線粒體活性，并使精子活動(dòng)力增加［15］。受試者基因多態(tài)性導(dǎo)致ER功能改變的機(jī)制尚不清楚。研究表明基因多態(tài)性通過(guò)核苷酸序列的改變以及由此引起的ER mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變，可以引起mRNA功能的改變［20］。

表4 ERα兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn) Egger檢驗(yàn)結(jié)果

ERα基因多態(tài)位點(diǎn)（rs2234693和rs9340799）通過(guò)作用于 CYP19調(diào)節(jié)雌激素，CYP19編碼芳香化酶的表達(dá)，導(dǎo)致精子數(shù)量的下降并引起男性不育［21］。一些研究也證實(shí)特定的 ERα基因多態(tài)會(huì)生成低性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）從而影響雌激素的結(jié)合，影響男性精子發(fā)生［22］。SHBG還參與了性激素的傳遞以及血清中雌、雄激素的濃度控制。Pavlovich等［23］發(fā)現(xiàn)與健康人相比，嚴(yán)重少精子癥患者伴有低水平的雄激素及高水平的雌二醇。

本研究納入了6篇病例對(duì)照研究，包括774名患者和841名健康對(duì)照者。合并結(jié)果表明rs9340799 AA基因型可能會(huì)增加男性不育的危險(xiǎn)性，而 rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險(xiǎn)性。引起這種差異的原因可能在于不同人種間遺傳因素及其生活環(huán)境的不同。異質(zhì)性是影響研究結(jié)果可靠性的主要因素，本研究在總?cè)巳褐芯窗l(fā)現(xiàn)明顯異質(zhì)性。H-W平衡是遺傳學(xué)研究中的基本定律，我們對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行了檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1項(xiàng)研究不符合，剔除后結(jié)果無(wú)明顯改變。我們采用Begg漏斗圖和Egger線性回歸檢驗(yàn)分別定性和定量評(píng)估發(fā)表偏倚，發(fā)現(xiàn)4個(gè)遺傳模型均無(wú)發(fā)表偏倚，證明結(jié)論可靠。

本研究存在以下不足:納入文獻(xiàn)質(zhì)量一般，樣本量較小，遺傳關(guān)聯(lián)性研究只有大量樣本才能真實(shí)反映基因和疾病之間的關(guān)聯(lián)。其次患者的其他信息（如生活方式、工作、年齡等）無(wú)法收集，需要進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)相關(guān)性。綜上所述，ERα rs2234693 和rs9340799基 因多態(tài) 性與男 性 不育有 關(guān)。rs2234693 CC基因型可以降低男性不育的危險(xiǎn)性，而rs9340799 AA基因型則可能增加男性不育的風(fēng)險(xiǎn)。ERα基因多態(tài)性與男性不育的關(guān)聯(lián)性尚需大樣本量、多中心研究及依據(jù)不育類型、種族和環(huán)境等分層分析進(jìn)一步證實(shí)。

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Meta analysis the association of polymorphisms in estrogen receptor α with male infertility

LI Tian-fu1，ZHOU Qing1，ZHANG Cui2，JIANG Wei-jun2，WU Qiu-yue2，LI Wei-wei2，XU Hao-qin3，XIA Xin-yi1，2
（1.Institute of Life Sciences，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.PLA Research Institute of Clinical Laboratory Medicine，
Nanjing General Hospital of Nanjing Military Region，Nanjing Jiangsu 210002；3.Jiangsu Province Research Institute of Planned Parent
hood，Nanjing Jiangsu 210029，China）

R698.2

A

1671-7783（2015）01-0057-05

10.13312/j.issn.1671-7783.y140285

江蘇省科技專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目（BM2013058）

李天賦（1986—），男，碩士研究生；夏欣一（通訊作者），博士，副主任醫(yī)師，副教授，E-mail:xiaxy@gmail.com；許豪勤（通訊作者），E-mail:1325825613@qq.com

2014-11-04 ［編輯］何承志