ZIC1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力的影響

王杰鋒，李鵬飛，曹方，陸偉杰，丁厚中（.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 03；.江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院綜合外科，江蘇 昆山 5300）

ZIC1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力的影響

王杰鋒1，李鵬飛1，曹方2，陸偉杰2，丁厚中2
（1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院綜合外科，江蘇 昆山 215300）

目的：研究結(jié)直腸癌組織中小腦鋅指結(jié)構(gòu)1（zinc finger of the cerebellum 1，ZIC1）基因的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞增殖能力的影響。方法：構(gòu)建192例結(jié)直腸癌組織芯片，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織及相應(yīng)癌旁組織中ZIC1的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；構(gòu)建 pcDNA3.1-ZIC1表達(dá)載體（實(shí)驗(yàn)組）和 pcDNA3.1空載體組（陰性對(duì)照組），轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌 HCT-8細(xì)胞，蛋白質(zhì)印跡和 RT-PCR法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（常規(guī)無轉(zhuǎn)染培養(yǎng)）細(xì)胞 ZIC1的表達(dá)水平，MTT法檢測(cè) 3組細(xì)胞增殖能力的變化。結(jié)果：結(jié)直腸癌組織中 ZIC1的陽性表達(dá)率（41.1％）明顯低于癌旁組織（68.8％，χ2=29.550，P=0.000）；ZIC1的表達(dá)與Dukes分期、分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均＜0.05），而與年齡、性別無關(guān)（P＞0.05）。RT-PCR及蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞 ZIC1的表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組；MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組 HCT-8細(xì)胞增殖能力明顯下降。結(jié)論:ZIC1基因可能參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。

小腦鋅指結(jié)構(gòu)1；結(jié)直腸癌；免疫組織化學(xué)；蛋白質(zhì)印跡

［Abstract］Objective:To investigate the expression of zinc finger of the cerebellum 1（ZIC1）gene in the colorectal cancer tissue and its impact on the proliferation of colon cancer HCT-8 cells.Methods:Tissue microarray blocks containing 192 colorectal cancer tumor specimens were conducted.Expression of ZIC1 in colorectal cancer tumor specimens and adjacent cancer tissues was analyzed using immunohistochemistry；the relationship between ZIC1 expression and clinical pathological parameters was analysed.The pcDNA3.1-ZIC1 expression vector（experiment group）and pcDNA3.1 empty carrier group（negative control group）were constructed to transfect HCT-8 cells，Western blotting and RT-PCR were used to detect ZIC1 expression among the experiment group，negative control group and blank control group（no transfection cultivation）.The changes of cells proliferation of three groups were determined by MTT.Results:The positive expression rate of ZIC1 in colorectal cancer tissue was higher than adjacent cancer tissues（41.1％ vs 68.8％，P＜0.05）.The ZIC1 expression in colorectal cancer tissues was correlated with Dukes staging，degree of differentiation，infiltration depth and lymph node metastasis（P＜0.05），whereas incorrelated with age and gender（P＞0.05）.RT-PCR and Western blotting showed the expression of ZIC1 in experiment group was significantly higher than that in negative control group and blank control group；MTT showed the cell proliferation in experiment group reduced markedly.Conclusion:ZIC1 might participate in the development and progression of colorectal cancer.

［Key words］zinc finger of the cerebellum 1；colorectal cancer；immunohistochemistry；Western blotting

結(jié)直腸癌發(fā)病率目前占全球惡性腫瘤第 3位，病死率居第4位，Ⅰ期5年生存率（＞90％）明顯高于Ⅳ期（10％）［1］，早期診斷和治療仍是提高患者生存率的關(guān)鍵。小腦鋅指結(jié)構(gòu)1（zinc finger of the cerebellum 1，ZIC1）基因是 Aruga等［2］于1994年在成年鼠小腦中首次發(fā)現(xiàn)，其編碼鋅指結(jié)構(gòu)蛋白。研究報(bào)道ZIC1與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，如髓母細(xì)胞瘤［3］、卵巢腫瘤［4］、間質(zhì)腫瘤［5］、子宮內(nèi)膜癌［6］、胃癌［7］和甲狀腺癌［8］等。本研究旨在探討ZIC1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，以及轉(zhuǎn)染ZIC1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株及培養(yǎng)

結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞株購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。細(xì)胞采用含10％胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的完全培養(yǎng)基，置于 37℃、5％CO2恒溫箱中培養(yǎng)；待細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)皿70％～80％時(shí)，0.25％胰蛋白酶消化，選取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 臨床標(biāo)本

收集2003年1月至 2010年12月于江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院行結(jié)直腸癌根治術(shù)192例患者臨床資料。其中，男116例，女76例，年齡39～76歲，中位年齡60歲；術(shù)中取結(jié)直腸癌組織和癌旁相對(duì)正常的2處組織標(biāo)本，手術(shù)標(biāo)本均經(jīng) 2名以上病理科醫(yī)師確認(rèn)，高分化34例，中分化75例，低分化83例；浸潤深度:漿膜內(nèi)33例，漿膜外159例；Dukes分期:A +B期65例、C+D期127例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移70例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移122例。經(jīng)病理證實(shí)沒有癌細(xì)胞的相對(duì)正常組織為癌旁組織。所有患者均無腸癌家族遺傳史，術(shù)前均未接受過放化療。

1.3 組織芯片制備

根據(jù) HE切片選取存檔的結(jié)直腸癌組織蠟塊，用組織芯片制作儀在空白受體蠟塊上打孔，再用組織取樣針從192例標(biāo)本的取樣位點(diǎn)上取組織蠟芯，依次有序地移入受體蠟塊中，制作成組織芯片蠟塊。最后石蠟切片機(jī)連續(xù)切片，厚4 μm。在距離腫塊邊緣2 cm以上取正常黏膜組織作為癌旁組織，每個(gè)病例均含有1個(gè)原發(fā)灶腫瘤組織和1個(gè)癌旁組織，通過組織芯片構(gòu)建儀制成芯片。

1.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè) ZIC1蛋白的表達(dá)

利用構(gòu)建的組織芯片，按照SP免疫組織化學(xué)試劑盒說明書進(jìn)行操作，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固；ZIC1羊抗人單克隆抗體稀釋度為1∶100，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷采用陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分與陽性信號(hào)評(píng)分相結(jié)合的方法［9］，高倍鏡視野下觀察組織切片，每張切片均在 5個(gè)視野下進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分即根據(jù)陽性細(xì)胞所占的5個(gè)以上高倍鏡視野比例計(jì)數(shù):陽性細(xì)胞數(shù)＜5％為0分，5％～25％為1分，26％～50％為2分，51％～75％計(jì) 3分，＞75％為 4分。陽性信號(hào)評(píng)分:淡黃色為1分，黃色或深黃色為 2分，褐色或棕褐色為3分。上述陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和陽性信號(hào)評(píng)分相乘≥1分為陽性，＜1為陰性。

1.5 質(zhì)粒的擴(kuò)增與抽提

含ZIC1基因的重組質(zhì)粒大腸埃希菌購于上海吉?jiǎng)P公司。吸取大腸埃希菌液 20～40 μL、LB培養(yǎng)基3 mL、卡那霉素5 μL（5 μg/mL），37℃300 r/min恒溫培養(yǎng)，搖床搖菌過夜（12～16 h）；室溫12 000 r/ min，離心1 min，棄上清液；按照質(zhì)粒提取試劑說明書逐步操作，紫外分光光度計(jì)定量其質(zhì)量及純度，提取的質(zhì)粒于4℃短期保存（-70℃長期保存）。

1.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

將結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ZIC1質(zhì)粒），陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染 pcDNA 3.1空質(zhì)粒）和空白對(duì)照組（常規(guī)無轉(zhuǎn)染培養(yǎng)），以（1～2）×105/孔的密度接種于 6孔板中，待細(xì)胞生長至85％～90％時(shí)，按試劑盒要求將 pcDNA3.1-ZIC1質(zhì)粒及 pcDNA3.1空質(zhì)粒與脂質(zhì)體混合后加入 6孔板中；輕微混勻，置于 37℃孵箱中培養(yǎng)；轉(zhuǎn)染4～6 h，加入完全 DMEM繼續(xù)培養(yǎng)；24 h消化傳代，部分用于mRNA和蛋白檢測(cè)，部分用于細(xì)胞增殖。

1.7 反轉(zhuǎn)錄 PCR檢測(cè) ZIC1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平

基因組RNA抽提試劑盒購自BioTeKe公司，TaKaRa Ex TaqTMPCR及反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自大連TaKaRa公司。通過 miRBase及基因庫查找基因序列，Primer 5.0軟件進(jìn)行相關(guān)引物設(shè)計(jì)。ZIC1引物序列:上游，5′-AAACTGGTTAACCACATCCGC-3′，下游，5′-CTCAAACTCGCACTTGAAGG-3′；內(nèi)參照物GAPDH引物序列:上游，5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′，下游，5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′，引物由上海吉?jiǎng)P基因公司合成。PCR反應(yīng)條件: 95℃預(yù)變性30 s，再行94℃30 s、60℃ 30 s、72℃90 s，共 30個(gè)循環(huán)，最后 72℃延伸10 min，4℃保存。產(chǎn)物行1.5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定，Quantity-One圖像處理軟件行灰度分析，比較空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組結(jié)腸癌 HCT-8細(xì)胞 ZIC1 mRNA的表達(dá)情況。

1.8 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè) ZIC1蛋白的表達(dá)

HCT-8細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，PBS沖洗，加入300 μL蛋白裂解液，冰上裂解10 min，然后移入1.5 mL EP管，4℃ 12 000 r/min離心 30 min，取上清，BCA法行蛋白定量。10.5％SDS-PAGE分離蛋白樣品，250 mA電轉(zhuǎn)移2 h至硝酸纖維素膜；5％脫脂奶粉封閉1 h；加入 ZIC1一抗（1∶1 000），4℃過夜；TBST洗膜后，加入二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h；洗膜3次，ECL顯色。采用 GADPH（1∶5 000）為內(nèi)參。實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組 ZIC1相對(duì)表達(dá)量為其條帶光密度與 GADPH的比值。

1.9 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖

HCT-8細(xì)胞轉(zhuǎn)染 pcDNA3.1-ZIC1 24 h后，胰酶消化計(jì)數(shù)；按每孔1×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，將同等條件下的 pcDNA3.1空載體設(shè)為陰性對(duì)照組，未轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ZIC1設(shè)為空白對(duì)照組；每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，于 37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)，分別檢測(cè)24、48、72 h細(xì)胞的增殖情況。MTT法檢測(cè)具體步驟如下:每孔加入 MTT 10 μL（5 mg/mL），孵育4 h；棄培養(yǎng)液，加入二甲基亞砜150 μL，振蕩10 min；酶聯(lián)免疫儀測(cè)定 492 nm波長處光密度（D）值，取6孔平均值，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，D值為縱坐標(biāo)繪圖。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用配對(duì) χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料的多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用 LSD-t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ZIC1蛋白在結(jié)直腸癌和癌旁組織中的表達(dá)

ZIC1蛋白陽性表達(dá)呈淡黃色至棕黃色，在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率為41.1％（79/192），明顯低于癌旁正常組織（68.8％，132/192），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義χ2=29.550，P=0.000）。見圖1。

2.2 ZIC1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中ZIC1蛋白表達(dá)與浸潤深度、分化程度、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與年齡和性別無關(guān)（P＞0.05），見表1。

2.3 腸癌細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后 ZIC1的表達(dá)量

蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組 ZIC1的表達(dá)較空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組增強(qiáng)，與 RT-PCR顯示的實(shí)驗(yàn)組 ZIC1 mRNA增高的結(jié)果一致。見圖2，圖3。

圖1 結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中 ZIC1蛋白的表達(dá)（免疫組織化學(xué) ×400）

表1 ZIC1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

圖2 各組細(xì)胞 ZIC1蛋白的表達(dá)

圖3 各組細(xì)胞 ZIC1 mRNA的表達(dá)

2.4 HCT-8細(xì)胞增殖能力的變化

MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，3組HCT-8細(xì)胞24、48 h D值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F24 h=1.661，P=0.223；F48 h=0.763，P=0.484）；72 h D值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=732.642，P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較，實(shí)驗(yàn)組 D值明顯低于與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組P=0.000），而空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組間D值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.098），提示實(shí)驗(yàn)組 HCT-8細(xì)胞的增殖能力在72 h時(shí)明顯下降，見圖4。

圖4各組 HCT-8細(xì)胞增殖力的比較

3 討論

ZIC1是 Aruga等［2］在1994年篩選小腦富含的cDNA中最先發(fā)現(xiàn)并克隆得到，位于3q24，具有3個(gè)外顯子結(jié)構(gòu)和C2H2型鋅指區(qū)域，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為重要的C末端鋅指轉(zhuǎn)錄因子，可結(jié)合一些富含 GC序列的靶基因并形成共同作用的“復(fù)合體”，從而影響靶基因的轉(zhuǎn)錄過程。文獻(xiàn)報(bào)道，ZICl與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中細(xì)胞增殖和分化［2，10-11］密切相關(guān)，Aruga［11］認(rèn)為ZIC1過表達(dá)可促進(jìn)小鼠顆粒神經(jīng)元細(xì)胞的增殖。ZIC1的異常表達(dá)與多種腫瘤密切相關(guān)。Pourebrahim等［12］研究顯示，ZIC1和ZIC4在硬纖維瘤，Dupuytren′s病和肥大性瘢痕中高表達(dá)，而在正常組織中不表達(dá)。ZIC1蛋白在脂肪肉瘤中的表達(dá)明顯高于脂肪瘤和正常脂肪組織［5，13］，而在其他腫瘤如卵巢腫瘤［4］、子宮內(nèi)膜癌［6］、胃癌［7］、甲狀 腺癌［8］中 呈低表達(dá)，此表達(dá)差異的機(jī)制目前尚不清楚。亦有研究表明，ZIC1與腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，如 Wang等［7］發(fā)現(xiàn) ZIC1過表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，其可能與 Shh信號(hào)通路有關(guān)。近來，Qiang等［8］研究表明，ZIC1可能通過阻斷 PI3K/ Akt和 MAPK信號(hào)通路及增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子 FOXO3a的轉(zhuǎn)錄從而介導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡，與 Zhong等［14］的結(jié)論一致，即在胃癌中 ZIC1過表達(dá)可導(dǎo)致Shh，PI3K和MAPK信號(hào)通路失活。

此外，關(guān)于ZIC1與結(jié)直腸癌的關(guān)系 Gan等［15］有類似研究，其通過分析 40例結(jié)直腸癌患者中ZIC1基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，ZIC1在結(jié)直腸癌中呈低表達(dá)，其機(jī)制可能與基因啟動(dòng)子甲基化相關(guān)。由于ZIC1在不同的腫瘤組織中表達(dá)各異，且Gan等的研究例數(shù)較少，因此本研究通過擴(kuò)大病例數(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證了ZIC1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中 ZIC1的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁正常組織；此外，ZIC1的低表達(dá)與Dukes分期、分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與年齡、性別無關(guān)，說明 ZIC1的低表達(dá)與結(jié)直腸癌的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。

為進(jìn)一步驗(yàn)證 ZIC1在結(jié)直腸癌發(fā)生過程中的作用，我們比較結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞轉(zhuǎn)染 ZIC1質(zhì)粒前后的變化，RT-PCR及蛋白質(zhì)印跡顯示實(shí)驗(yàn)組ZIC1的表達(dá)高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組，MTT結(jié)果顯示在72 h實(shí)驗(yàn)組 HCT-8細(xì)胞增殖能力較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯下降，進(jìn)而說明 ZIC1抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，該結(jié)果與 Gan等［15］在 HCT116、SW480等結(jié)腸癌細(xì)胞株中的研究類似。

綜上所述，ZIC1與結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關(guān)，并可抑制結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的增殖，提示ZIC1在結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用，但能否應(yīng)用于臨床還有待于進(jìn)一步的研究。

［1］Brenner H，Kloor M，Pox CP.Colorectal cancer［J］.Lancet，2014，383（9927）:1490-1502.

［2］Aruga J，Yokota N，Hashimoto M，et al.A novel zinc finger protein zic is involved in neurogenesis especially in the cell lineage of cerebellar grannule cells［J］.J Neurochem，1994，63（5）:1880-1890.

［3］Yokota N，Aruga J，Takai S，et al.Predominant expression of human zic in cerebellar granule cell lineage and medulloblastoma［J］.Cancer Res，1996，56（2）: 377-383.

［4］Huang RL，Gu F，Kirma NB，et al.Comprehensive methylome analysis of ovarian tumors reveals hedgehog signaling pathway regulators as prognostic DNA methylation biomarkers［J］.Epigenetics，2013，8（6）:624-634.

［5］林玲，范欽和，張玉梅，等.ZIC1、cyclinD1和p16在脂肪肉瘤中的表達(dá)及臨床意義［J］.診斷病理學(xué)雜志，2012，19（3）:206-209，212.

［6］Wong YF，Cheung TH，Lo KW，et al.Identification of molecular markers and signaling pathway in endometrial cancerin Hong Kong Chinese women by genome wide gene expression profiling［J］.Oncogene，2007，26（13）: 1971-1982.

［7］Wang LJ，Jin HC，Wang X，et al.ZIC1 is downregulated through promoter hypermethylation in gastric cancer［J］. Biochem Biophys Res Commun，2009，379（4）:959-963.

［8］Qiang W，Zhao Y，Yang Q，et al.ZIC1 is a putative tumor suppressor in thyroid cancer by modulating major signaling pathway and transcription factor FOXO3a［J］. J Clin Endocrinol Metab，2014，99（7）:E1163-1172.

［9］朱榮，曹方，王闊，等.Kiss-1基因在人乳腺癌組織中的表達(dá)及意義［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2013，23 （5）:450-451，456.

［10］Aruga J，Inoue T，Hoshino J，et al.Zic2 controls cerebellar development in cooperation with Zic1［J］.J Neurosci，2002，22（1）:218-225.

［11］Aruga J.The role of ZIC genes in neural development［J］.Mol Cell Neurosci，2004，26（2）:205-221.

［12］Pourebrahim R，Van Dam K，Bauters M，et al.ZIC1 gene expression is controlled by DNA and histone methylation in mesenchymal proliferations［J］.FEBS Lett，2007，581（26）:5122-5126.

［13］Brill E，Gobble R，Angeles C，et al.ZIC1 overexpression is oncogenic in liposarcoma［J］.Cancer Res，2010，70（17）:6891-6901.

［14］Zhong J，Chen S，Xue M，et al.ZIC1 modulates cellcycle distributions and cell migration through regulation of sonic hedgehog，PI（3）K and MAPK signaling pathways in gastric cancer［J］. BMC Cancer，2012，12:290.

［15］Gan L，Chen S，Zhong J，et al.ZIC1 is downregulated through promoter hypermethylation，and functions as a tumor suppressor gene in colorectal cancer［J］.PLoS One，2011，6（2）:e16916.

ZIC1 expression in colorectal cancer tissue and its effect on colon cancer cell proliferation

WANG Jie-feng1，LI Peng-fei1，CAO Fang2，LU Wei-jie2，DING Hou-zhong2
（1.School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.Department of General Surgery，Kunshan Hospital Affiliated to Jiangsu University，Kunshan Jiangsu 215300）

R735.3

A

1671-7783（2015）01-0010-04

10.13312/j.issn.1671-7783.y140307

王杰鋒（1987—），男，碩士研究生；丁厚中（通訊作者），教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail:dinghouzhong@163.com

2014-12-05 ［編輯］劉星星