淺談NF—kB信號在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用及臨床意義

陳玉婷　曹永芬

【摘要】目的：分析NF-kB信號在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床治療指導(dǎo)評價(jià)中應(yīng)用的意義。方法：選取60只雄性SD大鼠，0.1ml福氏完全佐劑注入右后足足墊皮內(nèi)，隨機(jī)平均分為對照組與治療1組、治療2組，空白組不予治療，治療1組艾灸治療，治療2組艾灸治療同時(shí)摘除腎上腺，對比3組NF-kB p65的活性。結(jié)果：對照組、治療1組、治療2組最終NF-kBp6 5吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，治療1組NF-kB p65吸光度值明顯優(yōu)于對照組（P<0.05），治療2組與對照組NF-kB p65吸光度值無明顯差異（P>0.05）。結(jié)論：艾灸療法可有效抑制NF-kB炎性信號通路、抗炎，但需要在HPAA完整性前提下才能實(shí)現(xiàn)。

【關(guān)鍵詞】NF-kB信號；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；臨床應(yīng)用

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是集骨纖維化、骨質(zhì)破壞、軟骨吸收、慢性炎性反應(yīng)于一體的慢性自身免疫性疾病，RA的產(chǎn)生主要因?yàn)轶w內(nèi)缺乏內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素。HPAA（下丘腦一垂體一腎上腺軸）在治療中發(fā)揮著調(diào)節(jié)免疫、抑制RA炎性反應(yīng)的重要作用。而艾灸被證實(shí)是RA臨床的有效治療方案，本研究分析了艾灸治療中NF-kB信號特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取60只健康的雄性SD大鼠，隨機(jī)平均分為對照組和2個(gè)治療組。對照組20只，體重（202.1±13.1）g；治療1組20只，體重（199.5±10.4）g；治療2組20只，體重（205.3±13.4）g。3組健康狀況和基礎(chǔ)資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05。

1.2 方法

首先將0.1ml福氏完全佐劑注入右后足足墊皮內(nèi)，對照組不予以治療。

治療2組摘除腎上腺：腹腔注射50mg/kg戊巴比妥鈉。按麻醉，俯臥，在兩側(cè)背部肋緣下1cm×1cm范圍去毛，清潔消毒，將肌肉分離后找準(zhǔn)雙側(cè)腎上腺，切除并縫合。

2個(gè)治療組均予艾灸治療。將大鼠固定于臺(tái)上后在足三里、腎俞等部位各麥粒灸5壯（每壯為艾絨5g），左右交替艾灸，1次/d，1療程為6天，連續(xù)治療3療程。

1.3 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

對比3組NF-kB p65的活性：先后以標(biāo)本固定液、石蠟包埋處理3組右側(cè)踝關(guān)節(jié)，制作滑膜組織切片并脫蠟、沖洗、PBS浸泡，去離子水孵育，山羊血清工作液滴加處理，孵育，辣根酶標(biāo)記、DAB顯色劑處理，蒸餾水沖洗、復(fù)染、水洗、脫水，透明處利后封片。以普通光鏡放大200倍觀察，NF-kB p65陽性表達(dá)即可見呈褐色，陽性越明顯、染色越深。視野由計(jì)算機(jī)攝像系統(tǒng)采樣、BioMias對圖像中信號特點(diǎn)處理分析，計(jì)算陽性染色面積、吸光度數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

本次數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件對本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，計(jì)數(shù)資料的對比應(yīng)用卡方檢驗(yàn)，而計(jì)量資料的對比應(yīng)用t檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對照組、治療1組、治療2組最終NF-kB p65吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，治療1組NF-kBp65吸光度值明顯優(yōu)于對照組（P<0.05），治療2組與對照組NF-kB p65吸光度值無明顯差異（P>0.05）。見表1。

3 討論

RA臨床治療多使用非甾體消炎藥、免疫抑制類藥物，內(nèi)源性GC的腎上腺皮質(zhì)經(jīng)典激素類療法也有理想的抗炎效果。

NF-kB是RA進(jìn)展中滑膜炎性反應(yīng)重要的炎性細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道，其可通過IKK的激活，激活I(lǐng)KB磷酸化修飾，促使p65與p50的大量產(chǎn)生，尤其可提升細(xì)胞核中上述物質(zhì)的含量，從而對炎性反應(yīng)的發(fā)生起到調(diào)控作用。NF-kB類蛋白在滑膜細(xì)胞核內(nèi)大量存在，若發(fā)生類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，患者患處滑膜內(nèi)就會(huì)有更多的NF-kB表達(dá)現(xiàn)象。本次研究關(guān)節(jié)炎大鼠模型相關(guān)操作中，福氏佐劑造模后會(huì)很快發(fā)生NF-kB表達(dá)現(xiàn)象。GC的存在會(huì)對NF-kB細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)錄過程產(chǎn)生干擾和抑制，從而達(dá)到理想的抗炎效果。而HPAA的保留是實(shí)現(xiàn)GC合理分泌、控制NF-kB轉(zhuǎn)錄工作的關(guān)鍵。

本研究分析了艾灸治療中NF-kB信號特點(diǎn)在足三里、腎俞等部位各麥粒灸5壯（每壯為艾絨5g），連續(xù)治療3療程共18d，最終檢測到對照組、治療1組、治療2組最終NF-kB p65吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，保留HPAA且規(guī)范艾灸的一組有很好的NF-kBp65吸光度結(jié)果，證實(shí)了治療的有效性。艾灸可改善HPAA功能，更好地對炎性細(xì)胞因子釋放產(chǎn)生調(diào)控，達(dá)到治療目的。艾灸的治療效果必須在HPAA保留的前提下才能得到保證，再次證明了HPAA功能正常情況下配合艾灸治療的必要性。