不同人群乳頭瘤病毒DNA分型的檢測及其臨床意義

劉　洋，陳柯霖，李翔燕，李　清，李晶華

(1.北京天壇醫(yī)院皮膚科，北京 100050;2.北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050;3.北京天壇醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京 100050)

不同人群乳頭瘤病毒DNA分型的檢測及其臨床意義

劉洋1，陳柯霖2，李翔燕1，李清1，李晶華3

(1.北京天壇醫(yī)院皮膚科，北京 100050;2.北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050;3.北京天壇醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京 100050)

目的: 分析尖銳濕疣(CA)患者及無癥狀的高危自檢者、正常體檢者人乳頭瘤病毒(HPV)的DNA分型檢測結(jié)果及其臨床意義。方法: 選擇門診就診的CA患者527例(CA組)、高危性行為自檢者208例(HR組)和正常體檢者197名(PE組)，應(yīng)用凱普導(dǎo)流雜交技術(shù)對(duì)3組人群樣本進(jìn)行HPV DNA分型檢測，分析各組HPV檢出陽性率、HPV優(yōu)勢型別分布和HPV亞型多重感染情況。結(jié)果: CA組患者HPV檢出陽性率為98.29%，HPV感染的優(yōu)勢型別為6、11、33和52型；HR組患者HPV檢出陽性率為26.44%，HPV感染的優(yōu)勢型別為6、11、33和66型；PE組人群HPV檢出陽性率為5.58%，HPV感染的優(yōu)勢型別為6和11型。HR和PE組HPV檢出陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CA組患者HPV多重型別混合感染檢出陽性率為36.43%,HR組多重型別混合感染檢出陽性率為5.77%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；CA組患者多重型別混合感染以二重感染陽性率最高，為18.41%；三重混合感染率次之，為11.20%；最多重感染為七重型別混合感染，陽性率為0.38%。結(jié)論: 3組人群的HPV感染均以低危型6和11型最多見；高危自檢者與正常體檢者兩者在臨床上均無癥狀，但前者HPV檢出陽性率明顯高于后者；CA組患者HPV混合型別感染陽性率明顯高于HR組，且多以二重或三重型別混合感染形式多見。

尖銳濕疣; 人乳頭瘤病毒; 基因分型

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)可通過不潔性交經(jīng)受損的皮膚黏膜感染上皮細(xì)胞，其不僅是尖銳濕疣(clyloma acuminate,CA)的病原體，而且已被證實(shí)是誘發(fā)宮頸癌與生殖器癌的主要因素之一[1]。HPV很難在人工培養(yǎng)基上生長，且血清型繁多。既往一直無方便可靠的檢測方法用于臨床檢測。應(yīng)用基因芯片分型技術(shù)進(jìn)行HPV基因型別檢測，具有非常高的靈敏性和特異性，同一標(biāo)本可以同時(shí)檢測多個(gè)HPV基因型別的優(yōu)點(diǎn)，可為臨床診斷及治療提供可靠的客觀依據(jù)[2]。在近幾年的同類研究中，HPV的檢測與分型多是針對(duì)女性宮頸部位或是CA患者，對(duì)于無癥狀的亞臨床感染者和正常人群的研究較少。本研究將CA患者、高危自檢者及健康體檢者3組人群同時(shí)列入研究對(duì)象進(jìn)行HPV DNA分型對(duì)照研究,旨在為CA的預(yù)防、診斷和治療提供依據(jù)。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象 選擇2012年6月—2014年6月于北京天壇醫(yī)院皮膚性病科門診就診的CA患者、高危性行為自檢者和正常體檢者，年齡16～72歲，平均年齡35.5歲。CA組患者527例，其中男性285例，女性242例，所選患者臨床上符合CA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，排除非CA患者；高危性行為自檢者組(HR組)為未見疣體但可疑HPV感染者予以分泌物檢測，其中主要包括CA患者的配偶或性伴侶、非CA性病患者(患有淋病、梅毒、衣原體性尿道炎、宮頸炎和生殖器皰疹等患者)、有不潔性行為史的自檢者，其中男性109例，女性99例；正常體檢者(PE組)為婚前、孕前及定期健康體檢者，共197人，其中男性62人，女性135人。以上研究對(duì)象檢測前均填寫HPV分型檢測申請(qǐng)單。

1.2標(biāo)本采集 CA組患者可見疣體，常規(guī)消毒，用無菌小鑷子摘取0.1～0.5 mm3疣體組織；HR組和PE組受檢者無疣體，采樣使用專用的HPV采樣刷采集男性尿道口及冠狀溝，女性采集宮頸及外陰脫落細(xì)胞標(biāo)本。所有采集的標(biāo)本均立即應(yīng)用細(xì)胞保存液保存，4℃冰箱保存，3 d內(nèi)檢測。

1.3檢測方法 采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)檢測21種HPV亞型。檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行(試劑由潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供)。提取樣本DNA；PCR擴(kuò)增；核酸分子快速導(dǎo)流雜交；酶標(biāo)顯色，根據(jù)芯片上HPV基因型分布相應(yīng)著色位點(diǎn)來判斷基因型別，如出現(xiàn)多點(diǎn)陽性，即為多重型別混合感染。21種HPV基因型分為高危型、低危型和中國人群常見的中危型3類。高危型HPV包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型13種，低危型HPV包括6、11、42、43、44型5種，中危型HPV包括53、66和cp830型3種。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。不同人群HPV 檢出陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)　果

2.13組人群HPV檢出陽性率CA組患者HPV檢出陽性率為98.29%，HR組HPV檢出陽性率為26.44%,PE組HPV檢出陽性率為5.58%,CA組和HR組HPV檢出陽性率高于EP組(P<0.05)。見表1。

表1　3組人群HPV檢出陽性率

*P<0.05 compared with PE group.

2.23組人群HPV亞型感染情況和優(yōu)勢型別對(duì)21種常見的HPV基因型分型檢測，多重型別混合感染者可重復(fù)計(jì)數(shù),CA組患者HPV各型別檢出陽性率由高至低(取前10位)依次為HPV6型53.32%(281例)、HPV11型38.33%(202例)、HPV33型26.18%(138例)、HPV52型22.01%(116例)、HPV53型16.32%(86例)、HPV66型15.18%(80例)、HPV31型11.00%(58例)、HPV39型8.35%(44例)、HPV16型4.93%(26例)、HPV18型2.66%(14例);HR組HPV型別檢出陽性率由高至低(取前10位)依次為HPV6型14.42%(30例)、HPV11型8.17%(17例)、HPV33型4.37%(9例)、HPV66型2.88%(6例)、HPV53型1.44%(3例)、HPV52型0.96%(2例)、HPV39型0.96%(2例)、HPV43型0.96%(2例)、HPV16型0.48%(1例)、HPV18型0.48%(1例);PE組HPV型別檢出陽性率為HPV6型3.55%(7例)、HPV11型2.03%(4例)。3組人群HPV優(yōu)勢型別的比較見表2。

2.3HPV亞型多重感染情況527例CA患者中HPV感染陽性518例，其中單一亞型感染為326例，感染率為61.86%；多重亞型混合感染為192例，感染率為36.43%。在單一亞型感染中主要以低危型別為多見。多重亞型混合感染主要以二重、三重感染為主，且以高、低危混合型感染多見，最高可至七重型別混合感染，結(jié)果見表3。HR組208例，HPV感染陽性55例，其中單一亞型感染43例，感染率為20.67%；多重亞型混合感染12例，感染率為5.77%，多以中、低危型二重感染為主。CA患者組多重型別混合感染率高于HR組(χ2=69.93，P<0.01)。PE組197名中HPV感染陽性11例，均為單一型別感染，感染型別主要為HPV6和11型。

表23組人群HPV優(yōu)勢型別

Tab.2HPV preponderancy types in population in three groups [n(η/%)]

表3　CA 患者組HPV亞型多重感染情況

“-”：No data.

3　討　論

HPV是CA的病原體，依據(jù)HPV致病能力的不同，將其分為高、中和低危型。高危型HPV主要包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68等型，與宮頸癌和生殖器癌的發(fā)生有關(guān)；低危型HPV主要包括6、11、42、43和44等型，常引起生殖器濕疣和宮頸上皮低度病變；中危型HPV主要有53、66和cp830型，其危險(xiǎn)性介于高危型和低危型之間[4]。國內(nèi)外此類研究多見于針對(duì)婦女感染HPV的研究，在健康婦女人群中，HPV的感染率為10%～46%。俞青松等[5]關(guān)于健康和宮頸病變婦女HPV感染情況分析中健康女性HPV感染率為11.35%，有宮頸病變組HPV感染率為26.29% 。本研究中PE組HPV檢出陽性率為5.58%，這種結(jié)果的差異與選取的樣本不同有關(guān)。本研究中CA組患者的HPV檢出陽性率為98.29%，HR組HPV檢出陽性率為26.44%，這一結(jié)果與國內(nèi)唐勇等[6]報(bào)道結(jié)果接近。HR組與PE組人群在臨床表現(xiàn)上均未見疣體，但2組人群的HPV檢出陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明不潔性行為是CA重要的傳染途徑之一。但高危人群臨床表現(xiàn)未見疣體，無法進(jìn)行組織活檢，早期診斷缺乏客觀依據(jù)，因此，應(yīng)用HPV感染分型檢測，有助于及早、及時(shí)發(fā)現(xiàn)CA潛伏期或隱匿感染，這對(duì)CA的早期診斷、治療及阻斷傳染源有重要的臨床意義。

本研究對(duì)3組人群采取疣體或分泌物、脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV型別檢測結(jié)果顯示：3組人群共有的優(yōu)勢型別是HPV6、11型,這表明HPV6、11型是人類感染HPV的最常見型別，其中HPV6感染的優(yōu)勢更明顯，這與國外Potocnik 等[7]及國內(nèi)周宏等[8]報(bào)道結(jié)果相一致 。本研究中CA組除HPV6、11型占優(yōu)勢外，HPV33、HPV52所占優(yōu)勢也很明顯，而常見的與女性宮頸病變相關(guān)性很高的HPV16、18型未在優(yōu)勢型別中，在以往的研究[9-10]中 ，HPV16、18型多為優(yōu)勢亞型，這種結(jié)果的差異可能與研究對(duì)象的不同及地域的差異有關(guān)，因此，HPV型別檢測為CA的流行病學(xué)提供了客觀依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示：13種高危型別中CA組以HPV33、52、16、31、39型感染為主，而且其多以與低危型混合感染的形式存在，多重型別混合感染多以二重、三重感染形式多見，其中高-低危型混合二重感染率最高，為12.90%，三重感染率次之，為10.25%；高-高危型二重混合感染率為2.85%，三重混合感染率為0.38%，在CA組中有2例樣本出現(xiàn)了HPV型別的七重混合感染。HR組HPV多重混合感染率為5.77%，且多以中-低危型二重混合感染為主。CA組HPV多重型別混合感染率明顯高于HR組,因此，本文作者推測：在局部皮膚黏膜受損可見疣體的情況下更有利于多種亞型的HPV的感染，但多重型別混合感染的機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。女性HPV多重型別混合感染與宮頸病變呈正相關(guān)關(guān)系，單一HPV感染使宮頸癌的患病風(fēng)險(xiǎn)增加19.9倍，而多重型別HPV混合感染使該風(fēng)險(xiǎn)再增加2倍[11-12]。宮頸部位的CA并不少見，醋白實(shí)驗(yàn)對(duì)其診斷意義不大，所以有必要對(duì)患者進(jìn)行HPV分型檢測，尤其對(duì)高危型感染者或多重型別混合感染者應(yīng)要求長期隨訪,預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。因此，在臨床工作中對(duì)于久治不愈或頻繁復(fù)發(fā)的高危型CA患者有必要長期進(jìn)行定期隨訪觀察，以防止HPV相關(guān)腫瘤的發(fā)生。本研究結(jié)果提示：HPV分型檢測使預(yù)防工作更具有針對(duì)性和有效性。

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Detection of human papillomavirus DNA genotypes in different populations and its clinical significance

LIU Yang1, CHEN Kelin2, LI Xiangyan1, LI Qing1, LI Jinghua3

(1.Department of Dermatology, Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China;2. Department of Laboratory Medicine,Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China;3. Department of Gynaecology and Obstetrics,Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050,China)

ObjectiveTo analyze the detection results and clinical significance of human papillomavirus(HPV) DNA genotypes in the patients with condyloma acuminate(CA) and high risk(HR) population of CA and normal population of physical examination(PE). Methods527 cases of CA patients (CA group), 208 cases of HR (HR group) and 197 cases of normal PE (PE group) in the outpatient were selected. The human HPV DNA genotypes in 932 samples of different population were examined with HybriMax; the positive detection rates, the preponderance types of HPV and the multiple genotype infection in three groups were analyzed. ResultsThe HPV positive rate in CA group was 98.29% and the preponderance types were HPV 6,11,33,and 52 genotypes. The HPV positive rate in HR group was 26.44% and the preponderance types were HPV 6,11,33,and 66 genotypes. The HPV positive rate in PE group was 5.58% and the preponderance types were HPV 6 and 11 genotypes. The difference in the positive detection rates of HPV between HR and PE groups had statistical significance(P<0.05).The positive rates of multiple genotype infection in CA group and HR group were 36.43% and 5.77%, respectively, and there was significant difference (P<0.01);the positive rate of double infection was the highest (18.41%), followed by the positive rate of triple heavy infection (11.20%) and the positive rate of septuple heavy infection (0.38%). ConclusionThe HPV 6 and HPV 11 of low-risk HPV genotypes are the most common genotypes in different population. The HR group and PE group are all asymptomatic but the positive detection rate of HPV in HR group is higher than that in PE group. The positive rate of HPV multiple genotypes infection in CA group is higher than that in HR group, and the double infection or triple heavy infection are the most common infection.

condyloma acuminata; human papillomavirus; genotype

1671-587Ⅹ(2015)06-1211-04

10.13481/j.1671-587x.20150622

2015-06-15

國家自然科學(xué)基金資助課題(81101969)

劉洋(1972-)，女，吉林省四平市人，醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事皮膚病和性病方面的研究。

李晶華，副主任醫(yī)師(Tel：010-67096610，E-mail：jhlee0927@163.com)

R446.52

A