初診乙型肝炎患者外周血淋巴細胞散點圖參數(shù)變化的研究

徐 陽，張彥平，張 磊，王香玲，王金華

（西安交通大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，陜西西安710004）

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的，在各種類型的病毒性肝炎中，乙型肝炎對人類健康的危害最為嚴重。乙型肝炎病毒感染在成年后通常是自限性的，慢性持續(xù)性感染的病毒都是圍產(chǎn)期時獲得的?？刂聘腥竞透渭毎膿p傷都是嚴格依賴于保護性免疫反應，因為機體內(nèi)肝細胞最主要的作用之一就是消除細胞內(nèi)的病毒［1］。慢性乙型肝炎病毒感染者的疾病進展和遠期預后取決于其體內(nèi)的病毒水平，慢性乙型肝炎患者肝硬化、肝硬化失代償及原發(fā)性肝癌的發(fā)生率和血清病毒載量呈正相關(guān)［2］。Sysmex XE－2100血細胞分析儀，其采用專用檢測通道，加入特殊的白細胞計數(shù)分類溶血劑和聚次甲基熒光染色液（SFL）。DIFF通道中縱坐標表示側(cè)向熒光強度，反映每個細胞核酸含量；橫坐標表示側(cè)向散射光，反映每個細胞內(nèi)容物復雜程度。根據(jù)每個細胞的上述兩項數(shù)值，可得到中性粒細胞參數(shù)Neut－Y、Neut－X 和 淋 巴 細 胞 參 數(shù)Lymph－Y、Lymph－X。本研究旨在探討乙型肝炎病毒感染患者Sysmex XE－2100血細胞分析儀DIFF通道白細胞散點圖研究性參數(shù)的變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取2014年7～10月于西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院感染科門診初診為乙型肝炎病毒感染的96例患者作為觀察組，以乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性且乙型肝炎病毒DNA（HBV－DNA）＞1.0×102IU／mL為診斷標準，其中男56例（58.7%），女40例（41.3%）。同時隨機選取同期于本院體檢的健康同齡人100例作為對照組，HBsAg、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）等乙型肝炎血清學指標均為陰性且HBV－DNA＜1.0×102IU／mL，其中男43例（43.0%）、女57例（57.0%）。兩組在性別、年齡方面比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

1.2 儀器與試劑 主要儀器包括Sysmex XE－2100血細胞分析儀、羅氏Cobas8000全自動生化分析儀、PE－5700核酸擴增儀、雅培西門子i－2000（Architect i2000SR）。使用的試劑及試驗過程中所需要的標準液均為原裝配套。

1.3 方法 對所有乙型肝炎病毒感染患者和對照組人群進行血液采樣，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝管采集外周血2mL，在2h之內(nèi)采用Sysmex XE－2100血細胞分析儀進行檢測；本次研究的檢測方法均嚴格按照Sysmex XE－2100血細胞分析儀、羅氏全自動生化分析儀、PE－5700核酸擴增儀、雅培西門子i－2000的標準化操作規(guī)程（SOP）文件操作步驟嚴格操作。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以中位數(shù)及四分位數(shù)間距（P25，P75）表示，對觀察組和對照組間各項指標的比較采用非參數(shù)秩和檢驗（Mann－Whitney U 檢驗）；指標間相關(guān)性分析采用Spearman的rho非參數(shù)性相關(guān)分析；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 乙型肝炎患者組與健康對照組一般資料

2 結(jié) 果

2.1 兩組間各項指標的比較 觀察組與對照組間的差異性分析表明，觀察組與對照組間參數(shù)Lymph－Y 比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.030）；觀察組與對照組間HBV－DNA、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見表2。

表2 兩組間各項指標的比較

2.2 Lymph－Y 各項指標的相關(guān)性分析 乙型肝炎病毒感染患者淋巴細胞參數(shù)Lymph－Y 的變化與HBV－DNA、HBsAg的變化存在一定程度的相關(guān)性，淋巴細胞參數(shù)Lymph－Y 與HBV－DNA 呈正相關(guān)（r＝0.160，P＝0.026）；淋巴細胞參數(shù)Lymph－Y 與HBsAg 呈 正 相 關(guān)（r＝0.149，P＝0.037）。見表3。

表3 Lymph－Y 與4項血清學指標的相關(guān)性

3 討 論

一般認為乙型肝炎病毒感染者外周血中淋巴細胞百分率相對增高。健康人群中，異型淋巴細胞是極為少見的，但異型淋巴細胞在病毒感染中卻比較常見［3］。異型淋巴細胞的形態(tài)分析與比值對病毒感染的鑒別診斷有很大的指導意義。

已有的研究表明，異型淋巴細胞的增多與病毒感染有著很大的關(guān)系［4］。乙型肝炎病毒的感染及發(fā)病主要與患者的細胞免疫功能有關(guān)。在機體的免疫防御機制中，乙型肝炎病毒特異性細胞毒T 淋巴細胞（CTL）對清除肝細胞內(nèi)感染的乙型肝炎病毒可能具有重要作用。在Sysmex XE－2100 血液分析儀的檢測結(jié)果中如果有淋巴細胞百分率的增高及出現(xiàn)異性淋巴細胞增多的提示可以對病毒性肝炎臨床的診斷提供參考。

Sysmex XE－2100全自動血液分析儀是通過半導體激光流式細胞儀原理結(jié)合細胞化學熒光染色技術(shù)對血細胞進行檢測。DIFF通道根據(jù)不同類型及不同成熟度的白細胞對熒光染料著色能力的差異，檢測散射光信號可以區(qū)分出淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞。橫坐標是側(cè)向散射光，反映細胞內(nèi)容物復雜程度，如核和顆粒等；縱坐標是側(cè)向熒光強度，反映細胞內(nèi)DNA 和RNA 的含量［5］。本次研究發(fā)現(xiàn)淋巴細胞參數(shù)Lymph－Y 與異型淋巴細胞的成熟度有一定的關(guān)系，即異型淋巴細胞中的幼稚型淋巴細胞數(shù)增多時淋巴細胞參數(shù)Lymph－Y 會有明顯的增高。

感染乙型肝炎病毒后，患者外周血淋巴細胞中T 細胞約占75%，B細胞占10%～15%。T 細胞受抗原刺激后，轉(zhuǎn)化為體積較大的母細胞，形態(tài)不整齊，胞漿增多變寬，常出現(xiàn)胞漿空泡，核增大，染色質(zhì)疏松。B細胞受抗原刺激后，在T 細胞的輔助下增殖分化為漿細胞，產(chǎn)生抗體參與體液免疫。在這過程中可表現(xiàn)為細胞體積增大、大小不一，胞漿變寬而多，胞漿顆粒增多，核增大染色質(zhì)疏松等一列變化［6］。乙型肝炎病毒感染者淋巴細胞主要變化就是向著細胞變大、漿內(nèi)顆粒增多變粗的方向發(fā)展［7］。異型淋巴細胞的增多在Sysmex XE－2100 全血細胞分析儀中的Lymph－Y 參數(shù)會有一些相應體現(xiàn)，所以對照組和觀察組Lymph－Y 參數(shù)比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＝0.030）。

淋巴細胞是一種免疫細胞，當異常淋巴細胞絕對值增高時，人體的免疫力就會相對減弱，這個時期很容易感染一些疾病，早期發(fā)現(xiàn)淋巴細胞形態(tài)學的變化對乙型肝炎的治療可以提供一種參考，而且淋巴細胞散點圖對乙型肝炎患者體內(nèi)病毒復制及疾病進程判斷及藥物治療轉(zhuǎn)歸也是一種方便的監(jiān)測指標。

本研究基于Lymph－Y 參數(shù)在初診乙型肝炎患者與健康人群中的橫斷面進行分析，展現(xiàn)出乙型肝炎病毒感染對機體外周血白細胞參數(shù)的影響。初步顯示出乙型肝炎病毒會引起反映淋巴細胞熒光強度的Lymph－Y 參數(shù)的增高。以往的觀點認為，病毒與細菌感染機體，外周血細胞分析的主要區(qū)別在于淋巴細胞百分率和中性粒細胞百分率的變化。然而，新型的全自動血細胞分析儀運用流式細胞儀和核酸染色原理進行白細胞分類檢測時，可提供出其量化形式的研究性參數(shù)（如：Neut－X、Neut－Y、Lymph－X、Lymph－Y 等），但這些參數(shù)在臨床運用中缺乏實際的證據(jù)支持。本研究著眼于常見且易于確診的病毒種類（乙型肝炎病毒）進行了相關(guān)探討。發(fā)現(xiàn)Lymph－Y 指標比傳統(tǒng)細胞分類百分率，如淋巴細胞百分率，變化更為敏感。這與病毒侵襲機體而引發(fā)的免疫反應有一定的關(guān)系。另則，Lymph－Y 增高提示外周血異型淋巴細胞增多，這已經(jīng)量化地提示出淋巴細胞形態(tài)學方面的改變，而且功能上提示機體免疫系統(tǒng)針對乙型肝炎病毒產(chǎn)生免疫反應。誠然，本研究存在一定的局限性，缺乏縱斷面乙型肝炎病毒感染患者不同病情臨床分期，以及治療前后的分析；缺乏其他肝炎病毒（如丙型肝炎）的比較研究。這些將在日后的觀察研究中進行補充。

綜上所述，現(xiàn)代檢驗技術(shù)的發(fā)展為臨床疾病的診療提供大量準確的信息，血細胞分析（血常規(guī)）報告已經(jīng)不單單是一種細胞數(shù)量檢測的項目，更應該提供給臨床醫(yī)生關(guān)于血細胞形態(tài)學方面的信息，往往這些形態(tài)改變的信息與疾病的發(fā)生、變化，以及疾病的治療預后有非常重要、緊密的關(guān)聯(lián)，需要檢驗工作者更多地去發(fā)掘這些良好的指標、參數(shù)。

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