沉默NGAL基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞遷移及侵襲的影響

唐健 李捷 李少軍 李璟波 于長(zhǎng)海 尉承澤

肺癌，又稱(chēng)原發(fā)性支氣管肺癌，是肺部常見(jiàn)的惡性腫瘤。在全球，肺癌的發(fā)病率和死亡率均居癌癥之首，而且目前呈現(xiàn)出一種繼續(xù)上升趨勢(shì)[1]。NGAL基因的蛋白編碼產(chǎn)物是一種25 kDa的糖蛋白，是1993年由Kjeldsen等[2]在中性粒細(xì)胞中首先發(fā)現(xiàn)，是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（Lipocalln）家族的成員之一。腫瘤組織中，如肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌和胰腺癌等，均能夠檢測(cè)到NGAL基因高表達(dá)[3]。這提示NGAL可能與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[3-6]。本研究旨在探討NGAL在肺癌組織的表達(dá)，觀(guān)察小干擾RNA（siRNA）沉默NGAL基因表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院胸外科76例肺癌患者手術(shù)切除的肺癌及30例癌旁組織蠟塊（2010年5月-2014年4月），所有標(biāo)本均經(jīng)多聚甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。年齡45歲-72歲，平均年齡62.6歲。

1.2 試劑 高轉(zhuǎn)移的肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院，培養(yǎng)基RPMI-1640購(gòu)自Gbico公司，siRNA oligos購(gòu)自上海吉瑪公司，轉(zhuǎn)染試劑X-tremeGENE（Roche公司），鼠一抗NGAL、GAPDH、MMP-2、MMP-9抗體，兔一抗E-cadherin、Vimentin購(gòu)自Santa Cruz公司；Alex 594/488標(biāo)記羊抗兔二抗（Jackson公司），HRP標(biāo)記的二抗羊抗兔、HRP標(biāo)記的羊抗鼠（北京中杉金橋公司），TRIzol（Invitrogen公司），反轉(zhuǎn)錄試劑盒及定量PCR試劑盒（TAKARA公司）；倒置熒光顯微鏡為Zessis公司、移液器均為Eppendorf公司。免疫組化SP法試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞用RPMI-1640培養(yǎng)液，含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和0.1 mg/mL鏈霉素的培養(yǎng)液，置37 ℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。

1.3.2 免疫組織化學(xué) 60 ℃烤片20 min后，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；3% H2O2室溫孵育15 min，PBS沖洗3次（每次不少于5 min）；抗原修復(fù)后以羊血清工作液封閉，室溫孵育30 min加一抗于4 ℃過(guò)夜，用與一抗相應(yīng)的免疫血清IgG代替一抗作為陰性對(duì)照； 滴加生物素標(biāo)記二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗后滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，自來(lái)水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。

1.3.3 免疫熒光 石蠟切片脫蠟，水化5 min后，蒸餾水洗3次，3 min/次；微波抗原修復(fù)10 min，冷卻至室溫；滴加正常山羊血清，室溫孵育1 h，封閉抗原非特異性結(jié)合位點(diǎn)。滴加一抗兔抗Cadherin（1:1,000），Vimentin（1:1,000）（Santa Cruz公司）4 ℃孵育過(guò)夜。PBS洗3次，5 min/次；滴加Alex594/488標(biāo)記的羊抗兔IgG（1:1,000）二抗，室溫孵育1 h。PBS洗3次，5 min/次；滴加DAPI，孵育10 min，用來(lái)染細(xì)胞核；PBS洗3次，3 min/次；抗熒光淬滅封片劑封片。用與一抗相應(yīng)的免疫血清IgG代替一抗作為陰性對(duì)照。用Zessis熒光顯微鏡拍照。

1.3.4 轉(zhuǎn)染 按Invitrogen公司提供的脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染程序進(jìn)行。將各組siRNA與轉(zhuǎn)染試劑混合物加入各個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞的六孔板，轉(zhuǎn)染24 h后，更換正常培養(yǎng)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。NGAL干擾序列為5′-ACATCCGGCAGGACAATGA-3′；對(duì)照序列為5′-AACGUACGCGGAAUACUUCGA-3′[7]。

1.3.5 qRT-PCR檢測(cè)A549細(xì)胞中NGAL mRNA的表達(dá) 分別收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)染及對(duì)照組A549細(xì)胞，按TRIzol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取細(xì)胞總RNA，用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定RNA濃度，根據(jù)吸光度（optical delnsity,OD）260和OD280的比值，判定其純度。分別取5 μg細(xì)胞總RNA，按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA 為模板應(yīng)用。反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)熱3 min，然后94 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，擴(kuò)增29個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)ImageJ圖像分析軟件分析各電泳條帶的灰度值，以目的條帶的灰度值與GAPDH內(nèi)參照條帶的灰度值的比值表示各目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。NGAL的上游引物為5′-GAAGACAAAGACCCGCAAAAG-3′，下游引物為5′-CTGGCAACCTGGAACAAAAG-3′。內(nèi)參GAPDH的上游引物為5′-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3′，下游引物為5′-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3′。

1.3.6 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)NGAL蛋白的表達(dá) 轉(zhuǎn)染24 h后，A549細(xì)胞中加入適量RAPI（PMSF）裂解液，碾碎勻漿，離心提取總蛋白，按照BCA法測(cè)定總蛋白濃度，上樣量為每孔30 μg總蛋白。按1:4加上樣緩沖液后，98 ℃變性10 min。100 V恒壓電泳，電泳后進(jìn)行濕式電轉(zhuǎn)。轉(zhuǎn)膜后用5%牛奶封閉液封閉1 h，一抗鼠來(lái)源的NGAL、MMP-2、MMP-9、GAPDH，兔來(lái)源的E-cadherin、Vimentin用0.05%TBST按1:1,000稀釋?zhuān)? ℃孵育過(guò)夜，0.05%TBST洗3次，每次5 min。二抗為HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG，羊抗鼠IgG（1:1,000），室溫孵育1 h，0.05%TBST洗3次，每次5 min。用ECL化學(xué)發(fā)光法來(lái)檢測(cè)，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.7 MTT檢測(cè)A549細(xì)胞球的生長(zhǎng)抑制率 轉(zhuǎn)染24 h后，取生長(zhǎng)良好的A549細(xì)胞球消化成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)并將細(xì)胞濃度調(diào)整到1×103/孔，接種于96孔板。培養(yǎng)24 h、48 h后，每孔加入10 μL（5 mg/mL）的MTT溶液，孵育4 h后，每孔加入100 μL Formanzan溶液，繼續(xù)孵育直至顯微鏡下觀(guān)察到Formanzan全部溶解。用酶標(biāo)儀在570 nm處檢測(cè)各孔OD，空白孔調(diào)零。細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)孔/對(duì)照孔×100%；細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/空白對(duì)照組OD值）×100%。

1.3.8 細(xì)胞侵襲及遷移實(shí)驗(yàn) 用無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液按1:5稀釋Matrigel膠，加人80 μL于Transwell板上室，將Transwell小室置于24孔板中，37 ℃孵育5 h待膠凝固。轉(zhuǎn)染24 h后，將細(xì)胞用0.25%胰酶消化，用無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮并計(jì)數(shù)。轉(zhuǎn)染NGAL-SiRNA及對(duì)照組A549細(xì)胞各取200 μL（5×105個(gè)/mL）加入上室，加入濾膜直徑為8 μm的Transwell小室中。下室加600 μL含有10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)12 h。取出Tanswell上室，PBS洗滌2次，用棉簽擦去上表面的細(xì)胞，加無(wú)水甲醇固定細(xì)胞30 min；用0.4%的結(jié)晶紫染色液染色2 h。在光學(xué)顯微鏡（×100）下計(jì)數(shù)穿過(guò)基膜的細(xì)胞數(shù)，每張膜隨機(jī)選取10個(gè)視野，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)樣品。侵襲率=（實(shí)驗(yàn)組侵襲細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)）×100%。遷移實(shí)驗(yàn)只是在Transwell上室不加Matrigel膠，遷移率=（實(shí)驗(yàn)組遷移細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)）×100%。

1.3.9 細(xì)胞劃痕 在24孔板中加入約5×105個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)24 h后用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線(xiàn)劃痕。用PBS洗細(xì)胞3次，加入完全培養(yǎng)基，37 ℃、5%CO2條件下再培養(yǎng)24 h后取樣，拍照。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，取平均值。

1.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。Western blot條帶灰密度用ImageJ軟件進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化檢測(cè)NGAL蛋白在肺癌組織中的表達(dá) 通過(guò)免疫組化檢測(cè)NGAL在肺癌中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NGAL在癌旁組織中表達(dá)率為13.3%（4/30），而在肺癌組織中NGAL的陽(yáng)性信號(hào)主要定位于胞質(zhì)（圖1），其陽(yáng)性表達(dá)率為76.32%（58/76），明顯高于癌旁組織中NGAL的表達(dá)水平（P＜0.01），提示NGAL與肺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)系。

2.2 干擾NGAL的效率 A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染NGAL-siRNA 24 h后，用qRT-PCR和Western blot檢測(cè)干擾NGAL的效果，發(fā)現(xiàn)control-siRNA轉(zhuǎn)染組NGAL mRNA的表達(dá)量為1.05±0.09，NGAL-siRNA轉(zhuǎn)染組NGAL mRNA的表達(dá)為的0.35±0.08，明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，圖2A）。與NGAL mRNA表達(dá)相一致，NGAL-siRNA轉(zhuǎn)染組NGAL的蛋白表達(dá)量較對(duì)照組的表達(dá)量降低（圖2B）。結(jié)果提示，NGAL特異性SiRNA從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平高效抑制NGAL表達(dá)。

2.3 干擾NGAL抑制A549細(xì)胞的增殖 轉(zhuǎn)染后，分別培養(yǎng)24 h、48 h后，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默NGAL后，A549細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組相比，受到明顯的抑制。24 h、48 h細(xì)胞存活率為64.92%、56.58%；抑制率分別為35.08%、43.42%，與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖3）。

2.4 干擾NGAL表達(dá)抑制A549 細(xì)胞的體外遷移和侵襲 應(yīng)用Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在接種細(xì)胞24 h后，A549細(xì)胞穿過(guò)8 μm孔徑膜的細(xì)胞數(shù)，對(duì)照組為每視野248.0±16.1，而NGAL-SiRNA組穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)為每視野190.7±14.6（P＜0.05）。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，在接種細(xì)胞24 h后，A549細(xì)胞穿過(guò)Matrigel膠的細(xì)胞數(shù)，對(duì)照組為每視野152.3±11.4，而NGAL-SiRNA實(shí)驗(yàn)組穿過(guò)Matrigel膠侵襲的細(xì)胞數(shù)為74.3±11.9（P＜0.01）。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，干擾組的細(xì)胞遷移較對(duì)照組和空質(zhì)粒組緩慢，劃痕后24 h，對(duì)照組細(xì)胞遷移明顯，而干擾組遷移不明顯。A549細(xì)胞對(duì)照組細(xì)胞遷移率為81.05%±4.36%，干擾組為41.33%±5.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖4）。以上結(jié)果表明下調(diào)NGAL基因的表達(dá)后，A549細(xì)胞的遷移及侵襲能力明顯被抑制。

2.5 干擾NGAL抑制上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（epithelialmesenchymal transition, EMT）相關(guān)蛋白E-cadherin和Vimenntin的表達(dá)，同時(shí)也抑制MMP蛋白的表達(dá) 轉(zhuǎn)染后再培養(yǎng)24 h，用免疫熒光及Western blot檢測(cè)細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、Vimentin的表達(dá)情況。免疫熒光結(jié)果顯示，干擾NGAL后E-cadherin表達(dá)的熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于對(duì)照組；而Vimentin的表達(dá)強(qiáng)度低于對(duì)照組（圖5A）。Western blot檢測(cè)顯示，干擾NGAL后A549細(xì)胞中E-cadherin蛋白的表達(dá)水平明顯于高于對(duì)照組，為對(duì)照組的2.27倍；Vimentin的表達(dá)較對(duì)照組明顯降低，為對(duì)照組的0.23倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖5）。干擾NGAL后，用Western blot檢測(cè)了A549細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)確實(shí)能夠抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)，分別為對(duì)照組的0.37倍和0.26倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率在我國(guó)呈上升和年輕化趨勢(shì)，其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均涉及極其復(fù)雜的多基因調(diào)控異常過(guò)程[1]。因此，研究肺癌的病因、發(fā)病機(jī)制具有重要的臨床意義。

圖 1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)NGAL在癌旁組織（A）及肺癌（B）組織中的表達(dá)（×400）Fig 1 The expression of NGAL in adjacent mucosa (A) and lung cancer (B) was detected by immunochemistry (×400)

圖 2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)干擾NGAL的表達(dá)情況。A：qRT-PCR檢測(cè)表明NGAL mRNA在NGAL-siRNA轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞中的表達(dá)明顯下調(diào)；B：Westem blot檢測(cè)表明NGAL蛋白在NGAL-siRNA轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞中表達(dá)水平明顯下調(diào)。Fig 2 The expression of NGAL mRNA and protein treated with NGAL-SiRNA. A: NGAL mRNA was down-regulated treated with NGAL-SiRNA in A549 cells by qRT-PCR; B: NGAL protein was down-regulated treated with NGAL-SiRNA in A549 cells by Western blot.

圖 3 干擾NGAL后細(xì)胞在24 h、48 h的增殖情況。與對(duì)照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01。Fig 3 NGAL downregulation reduced cell proliferation treated with NGAL-SiRNA after 24 and 48 h. Compared with control group, *P＜0.05, #P＜0.01.

NGAL是由Kjeldsen等[2]在1993年在人中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。NGAL是Lipocalin家族成員之一。NGAL是分子量為25 kDa的多肽鏈，含有178個(gè)氨基酸殘基，定位于人染色體9q34上，全長(zhǎng)5,869 bp。近年來(lái)，一些研究提示NGAL在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要功能，是人類(lèi)的一種新癌基因。

本研究通過(guò)檢測(cè)NGAL蛋白在肺癌及癌旁組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)NGAL在肺癌中陽(yáng)性表達(dá)率遠(yuǎn)高于癌旁組織，說(shuō)明NGAL的表達(dá)與肺癌發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)聯(lián)。已有研究[3,4]發(fā)現(xiàn)NGAL高表達(dá)肺癌，且于分化程度有關(guān)。這與我們報(bào)道的結(jié)果一致。

有研究發(fā)現(xiàn)在肺癌、乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等腫瘤都有NGAL的表達(dá)，但沒(méi)有進(jìn)一步闡明NGAL在其中究竟發(fā)揮著何種作用。為了研究NGAL對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力的影響，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)轉(zhuǎn)染NGAL-SiRNA降低肺癌細(xì)胞中NGAL的表達(dá)，同時(shí)利用MTT、Transwell方法檢測(cè)抑制NGAL的表達(dá)后，肺癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力的變化，結(jié)果顯示干擾NGAL表達(dá)的肺癌細(xì)胞增殖能力明顯低于對(duì)照組；侵襲遷移能力顯著降低。我們進(jìn)一步利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抑制NGAL的表達(dá)后，肺癌細(xì)胞的劃痕愈合能力明顯下調(diào)。這些結(jié)果都表明NGAL在肺癌細(xì)胞的侵襲遷移過(guò)程中起著非常重要的作用。許多研究證實(shí)在其他癌癥中，如乳腺癌、甲狀腺癌，干擾NGAL后，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移，而過(guò)表達(dá)NGAL后能夠增強(qiáng)癌細(xì)胞的遷移增殖能力[5,6]。NGAL蛋白的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的S期分?jǐn)?shù)和增殖指數(shù)Ki67正相關(guān)[7]。提示NGAL不僅與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，還在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中具有一定作用，但其作用機(jī)制目前尚未明確。

圖 4 干擾NGAL后，A549細(xì)胞遷移侵襲能力的檢測(cè)。A：干擾NGAL后，細(xì)胞遷移能力的比較（P＜0.05）；B：干擾NGAL后，細(xì)胞侵襲能力的比較；C：干擾NGAL后，對(duì)細(xì)胞劃痕損傷愈合能力的影響。與對(duì)照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01。Fig 4 The ability of magration and invasion treated with NGAL-SiRNA or NGAL-Control SiRNA on A549 cells. A: The cell numbers of transwell migration treated with NGAL-SiRNA; B: The ability of invasion treated with NGAL-SiRNA; C: Effect of NGAL-SiRNA transfection on the wound healing ability of A549. Compared with control group, *P＜0.05, #P＜0.01.

圖 5 干擾NGAL后，EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)。A：免疫熒光檢測(cè)干擾NGAL后，E-cadherin和Vimentin的表達(dá)；B：Western blot檢測(cè)干擾NGAL后，E-cadherin和Vimentin的表達(dá)；C：Western blot檢測(cè)干擾NGAL后，MMP-2和MMP-9的表達(dá)。Fig 5 Expression of EMT related marker protein treated with NGAL-SiRNA. A: E-cadherin and vimentin expression was detected by immunoflouresence after treated with NGAL-SiRNA; B: E-cadherin and vimentin expression was detected by Western-blot after treated with NGALSiRNA; C: MMP-2 and MMP-9 expression was detected by Western blot after treated with NGAL-SiRNA. EMT: epithelial-mesenchymal transition.

EMT在生物的發(fā)育、組織修復(fù)和腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，是癌癥發(fā)展和腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程的重要標(biāo)志性轉(zhuǎn)變EMT的發(fā)生是以E-cadherin、細(xì)胞角蛋白等上皮性標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)，Vimentin、N-cadherin等間葉性標(biāo)志物表達(dá)上調(diào)為特點(diǎn)，而且發(fā)生EMT的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞間遷移和侵襲能力增強(qiáng)[8]。本研究發(fā)現(xiàn)在抑制NGAL的表達(dá)時(shí)，Vimentin蛋白表達(dá)降低，而E-cadherin蛋白表達(dá)明顯升高，說(shuō)明抑制NGAL的表達(dá)可抑制A549細(xì)胞的EMT轉(zhuǎn)化，進(jìn)而抑制細(xì)胞遷移和侵襲移動(dòng)。在乳腺癌的研究中同樣發(fā)現(xiàn)，干擾NGAL能夠下調(diào)E-鈣粘蛋白表達(dá)，參與表皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的EMT，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[9]。而多項(xiàng)研究[10,11]表明NGAL促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲行為的另一可能機(jī)制是NGAL蛋白能夠與MMP-9形成復(fù)合物，增加MMP-9活性，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，促進(jìn)新生血管的形成，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的能力。本研究也證實(shí)了敲減NGAL后，MMP-2及MMP-9蛋白表達(dá)水平顯著降低。還有研究[12,13]表明NGAL蛋白是一種新的鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)載體，可以和鐵高親和力結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。

綜上所述，NGAL可作為肺癌發(fā)生、進(jìn)展、遷移和侵襲等過(guò)程中一個(gè)重要的檢測(cè)指標(biāo)及潛在靶點(diǎn)，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制和意義還有待進(jìn)一步深入研究。