高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析油脂物證種屬特征

喬 杰，趙鵬程，許英健，韓 闖

（中國刑事警察學院，沈陽 110035）

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析油脂物證種屬特征

喬 杰，趙鵬程，許英健，韓 闖

（中國刑事警察學院，沈陽 110035）

目的 采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析確定人體以及七種動物油脂的甘油三酯種屬特征。方法 用丙酮溶解19種甘油三酯標準品，分析這19種標準甘油三酯特征峰，色譜柱條件為C18色譜柱，流動相是二氯甲烷-乙腈-冰乙酸（30：70：0.2，V/V/V），流速1.0 mL/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，以此得出特征標準峰，再對樣品進行分析；采集人體、七種動物 （ 豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚） 油脂，丙酮溶解后直接采用與標準品相同的條件進樣分析，分離各種甘油三酯，對比混合標準樣品特征峰處理各種譜圖數(shù)據(jù)。結(jié)果 人體油脂、七種動物油脂的譜圖數(shù)據(jù)特征性強，能夠區(qū)分人以及這七種動物。結(jié)論 甘油三酯可以作為鑒定人類和這七種動物油脂種屬的依據(jù)，為案件偵破指明方向。

甘油三酯；人體油脂；動物油脂；高效液相-蒸發(fā)光散射法

確定一些犯罪現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)的可疑油痕物證是人體油脂、還是動植物油脂，對于判斷案件性質(zhì)、推斷作案方式、鎖定作案工具至關(guān)重要。一些涉假肉類食品和食用油的案件也常涉及動物油脂的種屬鑒別。近年來，油脂種屬檢驗有一些新的報道［1，2］，這對于促進公共安全領域油脂物證檢驗技術(shù)發(fā)展具有重要意義［3-5］。史曉凡等［6-9］采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射方法（high performance liquid chromatography-evaporative light-scattering detector，HPLC-ELSD），對人和動物油脂的種屬特征進行分析對比，發(fā)現(xiàn)人體油脂具有獨特的色譜特征。本文在上述研究基礎上，利用甘油三酯（triglyceride）標準物質(zhì)對動物油脂中常見的甘油三酯進行分析。

1 材料和方法

1.1 油脂樣品

人體油脂樣品（解剖時取自人體的皮下脂肪）；豬油脂樣品12份；牛羊油脂樣品各6份；魚油脂樣品2份；雞、鴨、鵝油脂樣品各1份；魚脂肪3份（動物油脂為購自不同省市的樣本，冷凍保存）。

1.2 甘油三酯標準品

19種標準甘油三酯標準品（瑞典Laroda公司），分別為月桂酸甘油酯（LaLaLa）、硬脂酸甘油酯（StStSt）、油酸甘油三酯（OOO）、1，2-棕櫚酸-3-硬脂酸甘油酯（PPSt）、1，2-棕櫚酸-3-油酸甘油酯（PPO）、1，3-棕櫚酸-2-油酸甘油酯（POP）、1，2-硬脂酸-3-油酸甘油酯（StStO）、1，2-油酸-3-棕櫚酸甘油酯（OOP）、1，3-油酸-2-棕櫚酸甘油酯（OPO）、1，2-油酸-3-硬脂酸甘油酯（OOSt）、1，3-油酸-2-硬脂酸甘油酯（OStO）、1，2-亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯（LLP）、1，2-亞油酸-3-油酸甘油酯（LLO）、1-硬脂酸-2-棕櫚酸-3-油酸甘油酯（StPO）、1-棕櫚酸-2-亞油酸-3-硬脂酸甘油酯（PLSt）、1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯（POL）、1，2-豆蔻酸-3-棕櫚酸甘油酯（MMP）、1，3-硬脂酸-2-棕櫚酸甘油酯（StPSt）、1-硬脂酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油酯（POSt）。

1.3 樣品及標準品處理

1.3.1 甘油三酯標準品溶液的配制

分別稱取19種標準品各2.0 mg置于10.0 mL容量瓶中，用丙酮溶解、定容，配制成甘油三酯標準溶液，檢測時分別取等量混合制成混合標準樣品溶液，待測。

1.3.2 油脂樣品溶液的制備

分別稱取人、豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚油脂樣品各2.0 mg，加入0.5 mL丙酮，室溫下，超生震蕩輔助溶解，制成人體油脂、動物油脂溶液，待測。

1.4 儀器及條件

Agilent 1100series高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；色譜柱：C18柱（150 mm×3.9 mm，4 μm）；柱溫：30℃；流動相：二氯甲烷-乙腈-冰乙酸（30：70：0.2， V/V/V）；流速：1.0 mL/min；蒸發(fā)光散射檢測器（Model 1400ELSD）；漂移管溫度：70℃；霧化管溫度：30℃；光學池溫度：80℃；排氣管溫度：60℃；GAS：45-55P。

2 結(jié)果與討論

2.1 甘油三酯混合標準溶液分析

在最佳分析條件下，對單個甘油三酯標準品進行HPLC-ELSD分析，均得到較好地分離。在實驗中，發(fā)現(xiàn)脂肪酸種類相同但是在甘油三酯中所處位置不同的甘油三酯樣品的保留時間相同。對19種甘油三酯標準品混合溶液進行分析，只有StStSt溶解性不好，有時不出峰；同分異構(gòu)的甘油三酯為重疊峰，四個重疊峰分別是OOP和OPO， PPO和POP，OOSt和OStO， StPO和POSt（見圖1）。

圖1 18種甘油三酯標準物質(zhì)混合溶液的HPLC-ELSD譜圖Fig.1 Chromatogram of mixture of 18 types of triglycerides’standards by HPLC-ELSD

2.2 常見家畜類動物油脂樣品種屬特征分析

對豬、牛、羊三種胎生家畜類脂肪所含的甘油三酯進行比較分析表明，三種不同種屬家畜類動物油脂中甘油三酯的組成特征差異明顯。從甘油三酯種類上講，豬脂、牛脂、羊脂甘油三酯種類數(shù)目分別是10、14、12種，其中， OOP或OPO相對含量均為最高，POP或PPO和StPO或 POSt兩種甘油三酯的相對含量在牛、羊脂肪中相對較高，但在豬脂中含量并不高（見圖2）。

對不同地區(qū)豬、牛油脂進行HPLC-ELSD分析，對比不同地區(qū)同種種屬的動物脂肪中的同種甘油三酯，結(jié)果表明這些樣品中甘油三酯的組成成分相同，但是各種甘油三酯的相對含量存在差異。具體的差異通過選取三種地區(qū)豬脂肪、牛脂肪前五種甘油三酯的峰面積占總峰面積的百分比的數(shù)值進行比對，同種甘油三酯在不同地區(qū)不同個體的同種物種中相對含量有波動，見表1、表2，但不影響物種間的區(qū)分。

圖2 不同種屬家畜類動物油脂甘油三酯特征圖。2-1：豬脂肪；2-2：牛脂肪；2-3：羊脂肪。Fig.2 Chromatogram of triglycerides of fats from different species of livestock by HPLC-ELSDk.2-1: pig fat； 2-2: cattle fat；2-3: sheep fat.

表1 不同地區(qū)豬脂肪五種甘油三酯的峰面積相對百分比Table1 Relative percentage of the peak area of fi ve triglyceride of pig fat from different regions（%）

地 區(qū) LLO LLP MMP POL OPO/OOP河南鄭州 0.874 1.307 5.578 5.143 2.684內(nèi)蒙古 1.528 1.524 4.731 5.911 2.127貴州貞豐 1.015 0.814 1.525 3.937 2.389

2.3 家禽（及魚）類動物油脂樣品的種屬特征分析

圖3 不同種屬家畜（及魚）類動物油脂的甘油三酯特征圖。3-1：雞脂肪；3-2：鴨脂肪；3-3：鵝脂肪；3-4：魚脂肪。Fig.3 Chromatogram of triglycerides of fats from different species of fowl and fi sh by HPLC-ELSD.3-1: chicken fat； 3-2: duck fat； 3-3: geese fat； 3-4: fi sh fat.

對雞、鴨、鵝、魚四種卵生動物油脂進行HPLC-ELSD分析，其譜圖結(jié)構(gòu)特別相近，但仍然存在種屬性差異見圖3。雞、鴨、鵝和魚脂肪所含甘油三酯的種類數(shù)目分別是12、11、14、15種，魚脂肪的甘油三酯種類相對較多，本文只把通過對比混標得到的甘油三酯的種類標注出來，其余峰未知其甘油三酯種類。在雞、鴨、鵝、魚脂肪中， OOP或 OPO、POL、 MMP三種甘油三酯的相對含量很高。對比家畜類動物與家禽類動物油脂譜圖，兩者含量較高的甘油三酯種類相同，都為OOO、POL、MMP、OPO/ OOP、PPO/POP。二者最大的區(qū)別就是實驗中的四種卵生動物均不含胎生動物油脂中的PLSt。

2.4 人體油脂的種屬特征

在人體油脂中，LLP、POL、LLO三種甘油三酯的相對含量較高，見圖4。與豬、牛、羊三種胎生動物相比，人體油脂甘油三酯出峰時間較早，且在保留時間7.5～10 min之間有兩個未知峰；人體油脂甘油三酯的種類（9種）比豬牛羊少；含量相對較高的甘油三酯種類也不相同，人體油脂中甘油三酯含量較高的是LLP、POL、LLO，豬、牛、羊油脂中則是OPO/OOP、StPO/POSt，可以明顯區(qū)別人體油脂和豬牛羊的油脂。對比卵生動物，人體油脂相對卵生動物油脂出峰時間較早，人體油脂甘油三酯的種類（9種）比雞、鴨、鵝、魚的甘油三酯種類少；含量相對較高的甘油三酯種類也不相同，人體油脂是LLP、POL、LLO，雞、鴨、鵝、魚則是OPO/OOP、POL、MMP。分析結(jié)果表明，人體油脂和卵生動物油脂的種屬區(qū)別較大。

圖4 人體脂肪甘油三酯特征圖Fig.4 Chromatogram of triglycerides of human fat by HPLC-ELSD

3 結(jié) 論

采用高效液相-蒸發(fā)光散射器法區(qū)分動物油脂種屬特征的方法十分有效，可以將該方法用于涉假動物油脂的鑒別，為確定制假方式提供科學證據(jù)。另外，由于人與其它動物油脂的色譜特征差異明顯，所以人體油脂的種屬鑒定可以為焚尸案件的偵破提供依據(jù)。

［1］ 丁軍凱，范垂昌.瞬時裂解甲基化技術(shù)—一種快速鑒別人體脂肪及動植物油脂的色譜分析方法［J］.刑事技術(shù)，1996（3）:5.

［2］ 丁軍凱，閆福寧，喻曉光，等.同時裂解甲基化氣相色譜法快速鑒別人體脂肪及動植物油脂［J］.中國法醫(yī)學雜志，1998，13（4）:227-230.

［3］ 蘭慶豐，梁敏.氣相色譜法鑒別摻假食用油的研究［J］.刑事技術(shù)， 2006（1）:37-39.

［4］ 張炳謙，王季中，孫桂進.人體脂肪及動植物油脂的GCMS/MS法分析［J］.中國人民公安大學學報:自然科學版，2004（4）:10-12.

［5］ 王繼芬，姚琳桃，張桂霞.痕量動物油和植物油的區(qū)分檢驗研究［J］.化學研究與應用， 2008（11）:1514-1519.

［6］ 姜紅，許英健，王景翰，等.高效液相色譜法鑒別指甲油的種類［J］.刑事技術(shù)，2011（3）:25-27.

［7］ 劉濤，尹春華，譚天偉.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定脂肪酸和甘油酯的含量［J］.中國油脂， 2005（9）:50-53.

［8］ 王磊，史曉凡，許英健，等.人體脂肪的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射分析［J］.中國司法鑒定，2013（3）:29-32.

［9］ 史曉凡，周欣欣，王磊，等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析人和動物油脂種屬［J］.中國法醫(yī)學雜志，2013，28（2）:116-118.

引用本文格式：喬杰， 趙鵬程， 許英健， 等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析油脂物證種屬特征 ［J］.刑事技術(shù)，2015，40（5）:400-403.

Species-characteristic Analysis of Animal Fat by HPLC-ELSD

QIAO Jie， ZHAO Pengcheng， XU Yingjian， HAN Chuang
（National Police University of China，Shenyang 110035， China）

Objective To explore the species characteristics of fat from human and seven kinds of animals （pigs， cattle，sheep， chickens， ducks， geese， fi sh） by the analysis of triglycerides using high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector （HPLC-ELSD）.Methods 19 kinds of triglycerides standards were dissolved in acetone and analyzed by HPLC-ELSD.Chromatography was achieved using a C18 column and an isocratic mobile phase consisting of methylene chloride/acetonitrile/ice acetic acid （30/70/0.2， V/V/V） at a fl ow rate of 1 mL/min， and ELSD detection was performed at 70°C for the drift tube.Fat of human and seven kinds of animals was subjected to the same treatment as that of triglycerides standards in identical conditions， and the resultant chromatograms being compared with those of triglycerides standards to determine the types of triglyceride.Results Human fat has 9 types of triglyceride， and the fat from pig， cattle， sheep， chic ken，duck， goose and fi sh has 10， 14， 13， 12， 11， 14， 15 types of triglycerides， respectively.All of these fats have their own special triglyceride types as their species’ characteristics.For the fats of same species animals raised in different area， the types of triglyceride， though various in content， have shown the same characteristics.Conclusions Types of triglycerides are reliable for identifying whether the fat is from human and seven kinds of animals tested in this study， and this can provide useful information for case investigation.

triglyceride； human fat； animal fat； high performance liquid chromatography-evaporative light-scattering detector

DF795.1

A

1008-3650（2015）05-0400-04

10.16467/j.1008-3650.2015.05.013

公安部應用創(chuàng)新計劃項目（No.2012YYCXXJXY128）

喬 杰（1991—），女，河南周口人，碩士研究生，研究方向為微量物證分析。 E-mail: JOYCCPC@163.com

2015-01-26