植物藥提取物影響腫瘤細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的研究進(jìn)展

姜福瓊 王劍松 鄧丹琪 王曉瓊

摘要：細(xì)胞凋亡是指在一定生理和病理情況下，機(jī)體為維護(hù)內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定，細(xì)胞對(duì)內(nèi)外信號(hào)刺激做出應(yīng)答，通過(guò)基因調(diào)控，誘導(dǎo)、啟動(dòng)和實(shí)施凋亡程序，使細(xì)胞主動(dòng)消亡的過(guò)程。腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞凋亡異常密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑主要有死亡受體介導(dǎo)的外源性通路、線粒體介導(dǎo)內(nèi)源性通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)通路等。天然藥物可以通過(guò)干擾腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝、增殖等過(guò)程，最終誘導(dǎo)觸發(fā)腫瘤細(xì)胞分化發(fā)生凋亡。其中植物藥提取物作用于凋亡信號(hào)途徑中的一些重要因子可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是中醫(yī)藥抗腫瘤的分子機(jī)制之一。本文是關(guān)于植物藥提取物通過(guò)作用于凋亡通路中的重要因子，誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡的抗腫瘤研究進(jìn)展的綜述。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞凋亡；植物藥；腫瘤；治療

中圖分類(lèi)號(hào)：R273

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007 - 2349（2015）03 - 0087 - 05

細(xì)胞凋亡（apoptosis）是1972年Kerr等[1]提出的一種不同于細(xì)胞壞死的細(xì)胞死亡方式，又稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡（ pro-grdmmed cell death，PCD）。細(xì)胞凋亡指在一定生理和病理情況下，機(jī)體為維護(hù)內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定，細(xì)胞對(duì)內(nèi)外信號(hào)刺激做出應(yīng)答，通過(guò)基因調(diào)控，誘導(dǎo)、啟動(dòng)和實(shí)施凋亡程序，使細(xì)胞主動(dòng)消亡的過(guò)程。生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，不但依賴(lài)細(xì)胞的增殖和分化，也依賴(lài)于細(xì)胞的凋亡。從80年代末期開(kāi)始，細(xì)胞凋亡成為了腫瘤病岡學(xué)、病理學(xué)研究熱點(diǎn)，近幾年的研究在凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、凋亡的生化反應(yīng)機(jī)制以及凋亡的基因調(diào)控等方面都取得了顯著的進(jìn)展。但隨著對(duì)凋亡發(fā)生分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)逐漸深人，人們也發(fā)現(xiàn)這一過(guò)程遠(yuǎn)非原來(lái)想象的那樣簡(jiǎn)單，而是包含了復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制。腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞原癌基因的激活和（或）抑癌基因的失活有關(guān)，細(xì)胞凋亡的缺陷或受阻擾亂正常細(xì)胞的增殖、分化和死亡可能是腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)之。Hanahan等[2]提出惡性腫瘤細(xì)胞的6大特征，即生長(zhǎng)信號(hào)的自身滿足、抑制生長(zhǎng)信號(hào)的鈍化、細(xì)胞凋亡的逃避、潛在的無(wú)限復(fù)制性、持續(xù)血管生長(zhǎng)及組織入侵和轉(zhuǎn)移。1992年英國(guó)科學(xué)家Hickman J A等[3]首次提出誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可作為腫瘤治療研究中的主要目標(biāo)和手段以來(lái)，治療性細(xì)胞凋亡干預(yù)作為一種發(fā)展中的疾病治療手段，20世紀(jì)末已逐漸成為國(guó)內(nèi)外腫瘤治療研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

目前，抗腫瘤藥物產(chǎn)品已發(fā)展形成為抗代謝藥物、天然植物類(lèi)、烷化劑類(lèi)、抗生素類(lèi)、激素類(lèi)、調(diào)節(jié)免疫功能類(lèi)、鉑類(lèi)及其他等7大類(lèi)，160多個(gè)品種。植物藥是以植物初生代謝產(chǎn)物如蛋白質(zhì)、多糖和次生代謝物如生物堿、酚類(lèi)、萜類(lèi)為有效成分的原料藥、制劑。植物藥在天然藥物中占主導(dǎo)地位。近年來(lái)，由于其在治療上的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)（來(lái)自大自然，毒副作用?。涸谥委煱滩〉纫呻y雜癥上有廣闊的前景）而倍受重視。在一些西歐國(guó)家（如德國(guó)）植物藥、保健飲品已廣為大眾接受；美國(guó)已通過(guò)修改FDA的有關(guān)條款放寬對(duì)植物藥的限制；而韓國(guó)、日本、臺(tái)灣等國(guó)家和地區(qū)更是植物藥的生產(chǎn)大戶(hù)；香港斥巨資組建中藥港；國(guó)內(nèi)植物藥的應(yīng)用是勿庸質(zhì)疑的。在1997年出臺(tái)的國(guó)家知識(shí)創(chuàng)新工程中，植物藥的研究倍受重視；昆明、上海等地的天然藥物研究或篩選中心紛紛入選創(chuàng)新工程，勢(shì)將大力推動(dòng)國(guó)內(nèi)的天然藥物研究與開(kāi)發(fā)。

細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑主要有死亡受體介導(dǎo)的外源性通路、線粒體介導(dǎo)內(nèi)源性通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)通路。植物藥提取物通過(guò)作用于凋亡信號(hào)通路上一些關(guān)鍵基因，干擾腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝、增殖等過(guò)程，最終誘導(dǎo)觸發(fā)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，是中醫(yī)藥抗腫瘤的分子機(jī)制之一。本文就關(guān)于細(xì)胞凋亡機(jī)制及各種植物藥作用于凋亡通路上的主要基因進(jìn)行抗腫瘤治療研究進(jìn)展綜述如下。1 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主要信號(hào)通路1.1 外源性途徑（死亡受體途徑） 主要通過(guò)死亡受體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，通過(guò)細(xì)胞外配體結(jié)合并激活細(xì)胞膜上的死亡受體激活細(xì)胞凋亡。腫瘤壞死因子受體（ TNF - Rs）是具有代表性的最大的死亡受體家族，主要包括TNFR I（p55，CD120a）、TNFRⅡ（p75，CD120b）等。其共同特點(diǎn)是：胞內(nèi)區(qū)都具有轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞死亡信號(hào)所必需的一段高度同源性的氨基酸序列，即DD（ death domain）。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白主要包括Fas相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白（Fas associated death domainprotein，F(xiàn)ADD）、TNFR I相關(guān)死亡域結(jié)合蛋白（TNFRI - asso-（ciated death domain protein，TRADD）、相互作用受體蛋白（re-ceptor-interacting protein.RIP）等。TNFR I信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中最重要的分子是TRADD，它介導(dǎo)TNFR I的凋亡信號(hào)，也介導(dǎo)了TNFR I誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄核因子- KB（ NF - KB）和活性蛋白（activatorprotein -1，AP -1）活化的信號(hào)[4]。當(dāng)配體TNF與TNFRs結(jié)合，TNFR I三聚體化，并激活TNFR I在質(zhì)膜表面局部招募TRADD。TRADD可以引起兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活：1.通過(guò)招募FADD誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：TNFR I胞漿區(qū)的死亡結(jié)構(gòu)域與TRADD羧基端的死亡結(jié)構(gòu)域結(jié)合，TRADD向TNFR I胞漿區(qū)招募FADD，F(xiàn)ADD再通過(guò)DED又進(jìn)一步招募procaspase -8；procaspase -8發(fā)生同源活化，其下游caspase的級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。2.通過(guò)腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白2（ tumor necrosis factor receptor - associated factors 2，TRAF2）和RIP誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子活化：TRAF2和RIP使NF - KB誘導(dǎo)激酶（ NF - KB inducing kinase，NIK）活化。NIK使IkB發(fā)生磷酸化，并促進(jìn)其分解和釋放出NF - KB.使NF - KB發(fā)生活化，并進(jìn)入細(xì)胞核，激活一系列基因表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡發(fā)生[5]。TRAF和RIP還可以直接或間接地活化有絲分裂原/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ mitogen - activated protein kinase kinase kinase1，MEKKl）或相關(guān)的絲裂原活化蛋白激酶（mitogen - activatedprotein kinase kinase kinase，MAPKKK），后者使c- Jun氨基末端激酶（c - Jun N- tenminal Kinase，JNK）和P38三肽區(qū)的蘇氨酸/酪氨酸雙磷酸化而激活JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使細(xì)胞色素-c（ cytochrome c，cyt -c）釋放，即通過(guò)線粒體介導(dǎo)通路，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡6]。

另一典型的死亡受體是Fas（又稱(chēng)CD95或Apo -1），多表達(dá)于激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞，是一個(gè)同源三聚體，每個(gè)三聚體分子結(jié)合三Fas分子，與三聚體的配體相集合后，F(xiàn)as通過(guò)細(xì)胞內(nèi)段的DD結(jié)合胞質(zhì)中的Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域（ FADD），F(xiàn)ADD氨基端含有的死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域（DED），其與半胱氨酸蛋白酶-8（caspase -8）原域中的DED相互作用，F(xiàn)as FADD及caspase -8形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體（death - in-ducing signaling complex，DISC），caspase -8酶原自我剪切活化成為活性caspase -8，啟動(dòng)下游的caspase通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[7]?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)有兩種Fas介導(dǎo)的凋亡：一種是細(xì)胞內(nèi)生成高濃度DISC，進(jìn)一步活化caspase -8；另一種是細(xì)胞內(nèi)DISC生成量少，活化的caspase -8量也少，caspase -8催化Bid斷裂為tBid，tBid最終誘導(dǎo)促凋亡蛋白自線粒體中釋放[8]。1.2內(nèi)源性途徑1.2.1線粒體為核心成分介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑 線粒體主要有內(nèi)質(zhì)、內(nèi)膜、外膜和膜間隙組成。內(nèi)膜含有ATP酶、電子傳遞鏈、腺苷酸轉(zhuǎn)位子；外膜含有電壓依賴(lài)的陰離子通道；膜間隙含有細(xì)胞色素C、caspase酶原、腺苷酸激酶和凋亡誘導(dǎo)因子。BCL -2家族在線粒體通路上起到核心的作用，該蛋白位于線粒體外膜上，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)20多種家族成員。Bcl-2家族包括Bcl -2、Bax、Bcl -X、Bcl -w、Bak、Bad、Al、NR - 13 Bid和Mcl -l，其中Bax、Bak、Bid、Bcl - Xs是促凋亡因子。促凋亡蛋白和拮抗蛋白的比率決定細(xì)胞是否生存。Bcl -2基因即細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因是研究最早的與凋亡有關(guān)的基因，是一種凋亡抑制基因，它可使DNA受損的細(xì)胞能長(zhǎng)期生存，又稱(chēng)長(zhǎng)壽基因，是維持癌細(xì)胞無(wú)限制生長(zhǎng)的主要基因。Bcl -2對(duì)細(xì)胞周期無(wú)明顯影響，而對(duì)細(xì)胞死亡的干擾有選擇性，阻止了細(xì)胞死亡的最后途徑，包括核苷酸內(nèi)切酶對(duì)DNA的降解。BCL-2家族成員的一個(gè)顯著特征是形成同源或異源二聚體，Bax是Bcl -2的一種同源蛋白，Bax既可以形成同聚體，又可與Bcl -2形成異二聚體（Bcl - 2/BCl -2、Bcl - 2/bax、bax /bax），通過(guò)它們之間的不同比例來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[16]。位于胞漿的Bid被caspase -8切割成截?cái)嗟腂id（trun-cated Bid， tBid），tBid有很強(qiáng)的促凋亡活性，將凋亡信號(hào)傳遞至線粒體，造成線粒體損傷并激發(fā)線粒體通透性增加，釋放細(xì)胞色素C[9-10]。細(xì)胞色素C是線粒體釋放的前凋亡分子，導(dǎo)致線粒體膜電位降低。細(xì)胞色素C（ Cyt -c）從線粒體釋放后，在dATP和ATP作用下與細(xì)胞漿中的凋亡蛋白酶激活因子（Apaf -1）形成多聚復(fù)合物，通過(guò)復(fù)合物氨基末端的caspase募集域募集細(xì)胞質(zhì)中的procaspase -9，使其剪切活化，啟動(dòng)caspase通路[11]。大量證據(jù)表明，細(xì)胞色素C從線粒體釋放至胞質(zhì)是引發(fā)凋亡關(guān)鍵步驟。凋亡過(guò)程中細(xì)胞色素C的釋放是線粒體外膜通透性增高的結(jié)果。關(guān)于細(xì)胞色素C釋放的具體機(jī)制，目前主要有兩種假說(shuō)：①線粒體外膜蛋白聚合形成膜通透轉(zhuǎn)運(yùn)孔（PTP）復(fù)合體，導(dǎo)致外膜非特異性斷裂；②Bcl -2家族蛋白形成通道，調(diào)控細(xì)胞色素C釋放[12-13]。1.2.2內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路中Ca2起到非常重要的作用，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子平衡的破壞或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白增多都會(huì)誘導(dǎo)caspase-12表達(dá)，進(jìn)而激活caspase-12剪切caspase -3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。此外，Bax抑制因子-1（Baxinhibitor -l，BI -1），調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路和鈣離子的釋放。Bl-1的過(guò)度表達(dá)減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，從而減少線粒體內(nèi)鈣離子聚集，抑制細(xì)胞凋亡。相反，細(xì)胞內(nèi)BI一1不足或缺乏，使Bax表達(dá)增強(qiáng)，啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2，線粒體內(nèi)Ca2+過(guò)度聚集使PTP開(kāi)放，cyt-c釋放，進(jìn)入線粒體介導(dǎo)凋亡途徑[14]。

外源性及內(nèi)源性通路最終分別活化caspase -8、9（啟動(dòng)因子），活化的caspase -8、9依次激活caspase -3、6、7（執(zhí)行因子），激活的caspase -3、6、7啟動(dòng)caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終降解細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白，引起細(xì)胞凋亡。在caspase家族中，caspase -2在細(xì)胞程序化死亡中起到重要的作用，它即是啟動(dòng)子，也是一個(gè)效應(yīng)caspase[15]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路與線粒體通路、死亡受體通路之間存在著密切的關(guān)系，不能截然將其區(qū)分開(kāi)來(lái)，各種岡素作用于這些凋亡信號(hào)通路中的蛋白、基因都可能啟動(dòng)凋亡的發(fā)生。2 植物藥對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的作用機(jī)制

中藥與細(xì)胞凋亡研究不斷深入，目前已由凋亡現(xiàn)象觀察過(guò)渡到基因水平、分子水平的研究，使植物藥提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡信號(hào)通路的影響研究也有了進(jìn)展，如姜黃素、槲皮素、苦參堿、大蒜素、蘆薈大黃素、喜樹(shù)堿、重樓皂苷五味子多糖、丹皮酚、微囊藻毒素、三七皂苷、金雀異黃素、紫草索、欖香烯乳、卡瓦胡椒素B、小檗堿、胡桃醌等植物提取物抗腫瘤的機(jī)制也有進(jìn)展。2.1 影響信號(hào)通路中癌基因或抑癌基因的表達(dá)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的癌基因或抑癌基因起重要的調(diào)控作用，其中的某些基因發(fā)生缺失、突變或過(guò)度表達(dá)，可導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖失控或凋亡受阻，因此，如何調(diào)控這些癌基因、抑癌基因或其相應(yīng)產(chǎn)物，使異常表達(dá)的基因得到逆轉(zhuǎn)、關(guān)閉或降低其表達(dá)水平即可達(dá)到治療腫瘤的目的2.1.1 bcl -2基因家族 人參皂甙（Ginsenosides）是從五加科植物人參的根莖葉中提取精制而成，能夠通過(guò)抑制凋亡基因Bcl -2基因表達(dá)，降低Bcl -2 /bax比率來(lái)誘導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡[16.36-38]。淫羊藿甙（icarrin，ICA）來(lái)源于淫羊藿的干燥地上部分，能夠誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡，其機(jī)理可能與下調(diào)Bcl -2和c- myc.基因mRNA和蛋白表達(dá)水平密切相關(guān)[17]。王志紅等[18-19]研究，發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿可通過(guò)下調(diào)bcl -2的表達(dá)而達(dá)到對(duì)HL - 60細(xì)胞的誘導(dǎo)分化目的，劉躍亮等[20]用雙氫青蒿素作用于人骨肉瘤細(xì)胞143B后發(fā)現(xiàn)，雙氫青蒿素具有較明顯的抑制人骨肉瘤細(xì)胞的增殖且促進(jìn)其凋亡的作用，可能通過(guò)下調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白PCNA、Bcl-2和上調(diào)促凋亡蛋白Bad和Caspase -3，啟動(dòng)凋亡程序，致143B細(xì)胞發(fā)生凋亡。梁向華等[21]發(fā)現(xiàn)雷公藤內(nèi)酯醇在體外能抑制人絨癌細(xì)胞株JAR增殖，誘導(dǎo)其凋亡；凋亡調(diào)控蛋白BCL-2/BAX表達(dá)水平的變化可能是TP誘導(dǎo)JAR細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制。韓瑩等[22]發(fā)現(xiàn)β-欖香烯能夠有效抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖，并且能夠通過(guò)調(diào)控Bax和Br.1-2蛋白表達(dá)，從而達(dá)到誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的目的。仇風(fēng)啟等[23]白藜蘆醇能誘導(dǎo)MDA - MB - 231細(xì)胞凋亡增加，這可能與白黎蘆醇激活Caspase -3蛋白同時(shí)抑制凋亡相關(guān)蛋白Bel -2和Bel -xl表達(dá)有關(guān)。江皓等[24]重樓皂甙I能抑制PC9細(xì)胞的體外增殖，且抑制作用表現(xiàn)出時(shí)效和量效關(guān)系，其機(jī)制可能與G2/M期阻滯、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、降低Bcl -2蛋白表達(dá)、增加Bax及caspase -3蛋白表達(dá)有關(guān)。2.1.2

p53基因 P53基因作為重要的抗癌基因，日益受到人們的重視。P53基因與細(xì)胞凋亡有密切的關(guān)系，正常的P53基因，即野生型P53基因（wtP53）與突變型P53基岡均參與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，但二者的作用不同，wtP53對(duì)凋亡具有促進(jìn)作用，其主要生物學(xué)功能足：誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯于Gl期，DNA損傷后誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡；而突變型P53則對(duì)凋亡有抑制作用。故P53基因的功能狀態(tài)是影響細(xì)胞凋亡的主要因素，野生型P53是某些細(xì)胞內(nèi)DNA損傷無(wú)法修復(fù)時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡發(fā)生的重要調(diào)控基因，而突變型P53不僅失去正常的腫瘤抑制基因的作用，而且部分出現(xiàn)癌基因的促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，使突變細(xì)胞逃避凋亡途徑而發(fā)生腫瘤。實(shí)驗(yàn)證明[25]，大蒜素通過(guò)促進(jìn)抑癌基因p53和p21的表達(dá)誘導(dǎo)人早幼粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞和胃癌BGC- 823細(xì)胞凋亡。2.1.3 C - myc基因 C- myc基因是細(xì)胞凋亡調(diào)控中又一個(gè)重要的相關(guān)基因，其表達(dá)產(chǎn)物既可推進(jìn)細(xì)胞周期，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化，抑制細(xì)胞分化，又可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。C-myc誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡發(fā)生在細(xì)胞周期的不同時(shí)期，并與細(xì)胞的種類(lèi)、細(xì)胞的生長(zhǎng)條件以及引起C-myc不當(dāng)表達(dá)的原因等有關(guān)，并不為所有類(lèi)型的細(xì)胞凋亡所必需。C- myc原癌基因編碼一種DNA結(jié)合蛋白，是轉(zhuǎn)錄因子，具有雙重效應(yīng)，常與其他細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白一起對(duì)細(xì)胞的凋亡起調(diào)控作用。通常，C-myc基因表達(dá)與其他促癌條件共存時(shí)，起促細(xì)胞增殖的作用；與其他抑癌條件共存時(shí)，就反過(guò)來(lái)導(dǎo)致細(xì)胞走向死亡。甘草、半邊旗提取物6F可下調(diào)腫瘤細(xì)胞c- myc表達(dá)[26]。謝超等[27]研究發(fā)現(xiàn)曲古抑菌素A（ TSA）、淫羊藿甙（ICA）誘導(dǎo)急性非淋巴細(xì)胞白血病HL - 60細(xì)胞株分化過(guò)程中引起c- myc基因的表達(dá)下調(diào)，G - CSF基因表達(dá)上調(diào)，從而影響細(xì)胞凋亡。2.2影響信號(hào)通路中蛋白或者酶的表達(dá)2.2.1 caspase家族 覃紅斌等[28]研究姜黃素對(duì)人胃癌BGC - 823細(xì)胞的影響時(shí)見(jiàn)到姜黃素對(duì)人胃癌BGC - 823細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，呈濃度依賴(lài)性促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這種生物學(xué)效應(yīng)可能與激活Bax蛋白表達(dá)、抑制Bcl -2蛋白表達(dá)而活化Caspase -3的信號(hào)通路有關(guān)。姜黃素能抑制胃癌KATO - Ⅲ和結(jié)腸癌HCT - 116細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)理是導(dǎo)致PARP斷裂，激括caspase -8活性，啟動(dòng)Fas凋亡途徑[29]。烏龍茶多酚誘導(dǎo)人組織淋巴瘤U937細(xì)胞凋亡時(shí)發(fā)現(xiàn)，烏龍茶多酚可通過(guò)釋放細(xì)胞色素C，活化caspase -9、caspase -3來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究均提示誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是通過(guò)觸發(fā)細(xì)胞色素C從線粒體向胞質(zhì)的釋放，伴有一些caspase激活而實(shí)現(xiàn)的，并可見(jiàn)上調(diào)bax表達(dá)和下調(diào)bcl -2蛋白表達(dá)[30]。2.2.2拓?fù)洚悩?gòu)酶喜樹(shù)堿是一種植物抗癌藥物，從中國(guó)中南、西南分布的喜樹(shù)中提取得到，喜樹(shù)堿對(duì)腸胃道和頭頸部癌等有較好的近期療效。喜樹(shù)堿是拓?fù)洚悩?gòu)酶I的阻斷劑，能夠誘導(dǎo)白血病、結(jié)腸癌、前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞凋亡。羥基喜樹(shù)堿抗癌活性超過(guò)喜樹(shù)堿，對(duì)肝癌和頭頸部癌也有明顯療效，對(duì)胃癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的作用，可誘導(dǎo)三株不同分化程度的胃癌細(xì)胞SGC-7901（中分化）、MKN-45（低分化）、MKN-28（高分化）凋亡，其誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡率與胃癌的分化程度有關(guān)[31]。小檗堿同時(shí)具有Topo I及TopoⅡ雙重靶點(diǎn)，從而干擾DNA復(fù)制、重組和基因表達(dá)而發(fā)揮療效[19]。2.2.3對(duì)端粒酶活性的影響 端粒酶可能是目前已知的最為廣譜的惡性腫瘤分子標(biāo)記物，并且與細(xì)胞周期和腫瘤凋亡基因表達(dá)關(guān)系密切。鑒于端粒酶在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中所扮演的重要的角色，端粒酶活性的抑制可能是某些抗癌藥物發(fā)揮作用的機(jī)制。何松等[32]實(shí)驗(yàn)證明，肝癌細(xì)胞株中大多有端粒酶活性表達(dá)，并利用PCR-ELISA法定性檢測(cè)了不同濃度的苦參堿對(duì)肝癌細(xì)胞HepG -2端粒酶活性的影響。結(jié)果顯示苦參堿對(duì)HepG-2的端粒酶活性有一定的抑制作用。周喜漢等[33]研究喜樹(shù)堿對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116細(xì)胞的影響時(shí)采用2TRAP- ELISA測(cè)端粒酶活性，半定量RT-PCR法檢測(cè)hTERT mRNA表達(dá)。結(jié)果見(jiàn)到喜樹(shù)堿能通過(guò)下調(diào)hTERT表達(dá)而有效地抑制SW1116細(xì)胞端粒酶活性，從而抑制其增殖。2.2.4蛋白激酶某些中藥誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的機(jī)理還與蛋白激酶（PKC）、cAMP等信息分子有關(guān)，PKC可拮抗皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞凋亡，槲皮素作為PKC的拮抗劑，可逆轉(zhuǎn)這種作用，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬能力，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。槲皮素能降低PTK活性，抑制cAMP和cGMP的磷酸二酯酶，增加cAMP水平，降低cGMP水平，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)二者的比值，控制細(xì)胞凋亡的蛋白磷酸化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡34J。人參皂苷G-Rh2為人參皂苷的主要成分，具有抑制癌細(xì)胞向其他器官轉(zhuǎn)移，增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用，它能通過(guò)細(xì)胞內(nèi)Caspase-類(lèi)半胱氨酸蛋白酶進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)而誘導(dǎo)人黑色素腫瘤A375-S2細(xì)胞發(fā)生凋亡[35-38]。3結(jié)語(yǔ)

中藥誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是一個(gè)新興的課題，闡明中藥誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制有助于醫(yī)學(xué)臨床和科研工作的深入，其重要意義已為廣大學(xué)者所認(rèn)同。人們對(duì)凋亡機(jī)制的研究取得了十分迅速的進(jìn)展，但仍有很多問(wèn)題需要更進(jìn)一步的了解，要想通過(guò)精致的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)完全清楚凋亡的復(fù)雜機(jī)制在目前看來(lái)仍尚需時(shí)日。植物藥提取物能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制是多環(huán)節(jié)、多途徑的，但其最根本的機(jī)制是什么，有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：[1] Kerr JFR ，Wyllie AH，Currie AR. Apoptosis：a basic biological phenom-enon with wide ranging implications in tissue kinetics[J].Br J Cancer，1972，26：239 - 245.[2] Hanahan D，Weinberg RA. The hallmarks of cancer[J].Cell，2000，100（1）：57 -70.[3] Hickman JA. Apoptosis induced by anticancer drugs[J].Cancer Metastasis Rev，1992，11（2）：121 -139.[4] Sharma V，Tewari R，Sk UH，et al.Ebselen sensitizes glioblastom a cellsto tumor necrosis factor（ TNF alpha） - induced apoptosis through tw。distinct pathways involving NF-kappa B down regulation and Fas mecliated formation of death induc，ing signaling complex[J].Int J Cancer，2008 ，123（9）：2204 - 12.[5] Futosi K，F(xiàn)odor S，M6csai A.Reprint of Neutrophil cell surface receptors and their jjUracellular signal transduction pathways[J].Int Immu-nopharmac01，2013 Dec，17 （4）：1185 - 97.[6] DOJidelinger Y， Aguileta MA， Goossens V，et al.RIPK3 contributes to TNFRI - mediated RIPKl kinase - dependent apoptosis in conditions of cIAPl/2 depletion or TAKl kinase inhibition[J].Cell Death Differ， 2013 ，20（10）：1381- 92.[7] Scihneider - Brachert W， Heigl U， Ehrenschwender M.Membrane traf-ficking of death receptors：implications on signaling[J].Int J Mol Sci， 2013 ，14（7）：14475-503.[8] Sessler T， Healy S，Samali A， et al.Structural determinants of DISC function：new insights into death receptor - mediated apoptosis signa-ling[J].Pharmacol Ther，2013 ，140（2）：186 - 99.[9] Parys JB. The lP3 Receptor as a Hub for Bcl -2 Family Proteins in Cell Death Control and Beyond[J].Sci Signal，2014，7（312）：pe4.[10] C.hen J， Li HM，Zhang XN，et al.Dioscin-induced apoptosis of hu-man LNCaP prostate carcinoma cells through activation of caspase -3 and modulation of Bcl-2 protein family[J].J Huazhong Univ Sci Te.chnolog Med Sci，2014 ，34（1）：125 - 30.[11] Cillies LA，Kuwana T Apoptosis regulation at the mitochondrial outer membrane[J].J Cell Biochem ，2014，115 （4）：632 - 40.[12]Trokar T， Ulk：ny J. The machematical model of the Bcl -2 family medi-ated MOMP regulation can perform a non - trivial pattern recognition [J]. PLoS One，2013，8（12）：e81861.[13] Parys JB. The IP3 Receptor as a Hub for Bcl -2 Family Proteins in Cell Dealh Control and Beyond[J].Sci Signal，2014，7（312）：pe4.[14] Gillies LA，Kuwana T. Apoptosis regulation at the mitochondrial outer membrane[J].J Cell Biochem，2014，115 （4）：632 - 40.[15] Tokar T， Ulicny J. The mathematical model of the Bcl -2 family medi- ated MOMP regulation can perform a non - trivial pattern recognition[J]. PLoS One，2013，8（12）：e81861.[16]馀曉軍，石淑文，湯永民，等.人參皂苷Rh -2抗白血病多藥耐藥細(xì)胞K562/VCR作用研究[J].中草藥，2010 ，07：1131-1135.[17]顧欣，楊丹丹，王麗，等.淫羊藿甙誘導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞系SW579的分化及惡性表型逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展.2012 ，07：505 - 509.[18]王志紅，林菁.鹽酸小檗堿對(duì)HL-60細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及其作用機(jī)制[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006 ，02：165-168.[19]廖霞，李彩虹，丁航，黃連提取物鹽酸小檗堿對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株增殖的影響[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2011，02：344 - 346.[20]劉躍亮，羅進(jìn)勇，張彥，等.雙氫青蒿素對(duì)人骨肉瘤細(xì)脆株143B增殖和凋亡的作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012 ，12：1719-1723.[21]梁向華，黃驍吳雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)人絨毛膜癌細(xì)胞株JAR增殖凋亡及凋亡調(diào)控蛋白BCL - 2/BAX表達(dá)的影響[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2011，02：166 - 169，240.[22]韓瑩，張玲，吳瑤.B一欖香烯對(duì)人胃癌scc-7901細(xì)胞增殖抑制作用及對(duì)Bax和Bcl -2蛋白表達(dá)的影響[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，06：748 - 750.[23]仇鳳啟，孫大鵬，趙丹，等，白藜蘆醇對(duì)乳腺癌MDA - MB - 231細(xì)胞凋亡及Bcl -2蛋白表達(dá)的影響[J].解剖科學(xué)進(jìn)展，2012，01：46 - 49.[24]江皓，蘇丹，馬勝林.重樓皂甙I對(duì)肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C9增殖及凋亡的影響[J].腫瘤學(xué)雜志，2012，03：166-169[25]李清春，張景強(qiáng)，余煥玲.大蒜的抗癌作用[J].中國(guó)調(diào)味品2011，02：4-6，10.[26]洪衛(wèi)，張沂平，郭勇.中藥誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，07：451-454.[27]謝超，董偉，溫培娥，等，曲古霉素A和淫羊藿甙誘導(dǎo)HL–60細(xì)胞分化過(guò)程中nm23和c-myc及G-CSF表達(dá)變化的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2008，07：481 -486[28]覃紅斌，魏蕾，張京偉，等姜黃素誘導(dǎo)胃癌BGC細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，l l：1227-1230[29] Clutterbuck AL，Allaway D，Harris P，et al_Curcumin reduces FJrosta-glandin E2，matrix metalloproteinase -3 and proteoglyCan release in the secretome of interleukin ip - treated articularCartilage[J].F1000Res，2013，2：147.[30] Lin JK，Lin-Shiau SY. MeChanisms of hypolipidemir and anti -ohe- sity effects of tea ancl tea polyphenols[J].Mol Nulr Food Res，2（X）6， 50（2）：211 -7.[31]胡文晉，胡巍，方蕓.喜樹(shù)堿類(lèi)藥物抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展[J]，中國(guó)藥房，2012.27：2581 - 2584.[32]何松，左國(guó)慶，張燕，等.苦參堿對(duì)肝癌細(xì)胞HepC2端粒酶活性調(diào)控的體外研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2008，03：291 - 292，295.[33]周喜漢，韋星，黃贊松，等.苦參堿對(duì)結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞增賄及端粒酶活性的影響[J].中藥材，2009，06：923-925[34]劉彥芳，秦莉，張達(dá)，等.槲皮素的生物學(xué)活性研究進(jìn)展[J].國(guó)際眼科雜志，2009，05：941 - 943.[35]劉艷紅，章秀麗，陳少文，等.人參皂苷Rh2誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，12：2011-2013[36]程汝濱，葛宇清，黃真.人參皂苷Rh_2抗腫瘤轉(zhuǎn)移的功能研究進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2013，03：211 - 213.[37] Xia X，Jiang B， Liu W，et aI.Anci - tumor activity of three novel clerivatives of ginsenoside on colorectal cancer cells[J].Steroids.2014 ，80：24 -9.[38] Chen B，Jia XB. Apoptosis-inducing effect of ginsenoside Rg6nn hu-man lymphocytoma JK cells[J].Molec：ules，2013 ，18（7）：8109-19

（收稿日期：2014 - 12 - 18）