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    臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)中藥復(fù)方對(duì)血管平滑肌抑制作用

    2015-08-20 09:14:38王萌楊曉琨
    云南中醫(yī)中藥雜志 2015年3期
    關(guān)鍵詞:慢性腎臟病

    王萌 楊曉琨

    摘要:目的觀察辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方對(duì)慢性腎臟病心血管危險(xiǎn)因素的改善作用。方法大鼠按每天15 g/kg劑量,灌胃給藥,連續(xù)灌服10(1,于最后一次給藥后2~3h,股動(dòng)脈放血,分離血清,即為中藥血清,經(jīng)560C,30 min滅活后,分別配成含10、20、30%中藥血清的培養(yǎng)液備用,以正常大鼠血清為對(duì)照。用含辛通暢絡(luò)中藥處方不同濃度血清培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞,用臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)法及四甲基偶氮唑藍(lán)(MrIr)法分別檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:24 h.72 h經(jīng)不同藥物濃度血清培養(yǎng)后,與對(duì)照組相比,培養(yǎng)24 h后,20%藥物組.30%藥物組均較其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P<0.01);培養(yǎng)72 h后培養(yǎng)24 h后,10%藥物組較對(duì)照組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P<0.05),20%藥物組.30%藥物組均較其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(Jp<0.01),結(jié)論 揭示辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖,從而防治慢性腎臟病早期動(dòng)脈粥樣硬化所致的血管重構(gòu)。

    關(guān)鍵詞:慢性腎臟病;辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方;血管重構(gòu)

    中圖分類號(hào):R285.5

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1007 - 2349( 2015) 03 - 0060 - 02

    心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)是慢性腎臟病( chronic kidney disease,CKD)患者中最常見的并發(fā)癥,相關(guān)資料顯示,CKD病人死于CVD者在其總死亡率中高達(dá)30%~50%[1]。目前,如何干預(yù)CKD患者的CVD,尚缺乏足夠的循證醫(yī)學(xué)依據(jù)。因此,在中醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)尋求有效的治療方法和藥物,是基礎(chǔ)與臨床領(lǐng)域面臨的重要課題。依據(jù)辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方可以有效改善FSGS大鼠腎臟功能指標(biāo),減輕腎臟病理形態(tài)學(xué)損害,同時(shí)辛通暢絡(luò)法中藥復(fù)方具有調(diào)節(jié)大血管重構(gòu)的作用,本實(shí)驗(yàn)通過確定辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方對(duì)體外血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響,以期從細(xì)胞、分子水平解析該中藥復(fù)方防治動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)大血管重構(gòu)減少心血管并發(fā)癥的機(jī)制,為該復(fù)方臨床應(yīng)用提供更充分的理論依據(jù)。1 實(shí)驗(yàn)材料及方法1.1 辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方藥物血清的制備①辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方的組成:柴胡12g,黃芩10g,生黃芪30g,當(dāng)歸10g,女貞子15g,澤蘭15g,水蛭10g,細(xì)辛3g;②上8味藥共煎煮3次,濃縮成100mL,汁液(4g生藥/mL),無菌裝瓶密封,以上各藥均經(jīng)天津市藥品檢驗(yàn)所核定;③實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用Spragoe -DawlPg( SD)遠(yuǎn)交系健康大鼠48只,均為雄性,體重(250 -300)g,SPF/VAF'級(jí),南北京華阜康生物科技股份有限公司提供(合格證號(hào):SCXK京2009 - 0007);④實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑:實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑:胎牛血清、臺(tái)盼藍(lán)、四甲基偶氮唑藍(lán)、胰蛋白酶、DMEM均由天津子涵生物科技有限公司提供。

    實(shí)驗(yàn)方法:大鼠按每天15g/kg劑量,灌胃給藥,連續(xù)灌服10天,于最后一次給藥后2~3 h,股動(dòng)脈放m,分離血清,即為中藥m清,經(jīng)56℃,30 min滅活后,分別配成含10、20、30%中藥血清的培養(yǎng)液備用,以正常大鼠血清為對(duì)照。1.2 血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定 用組織貼塊法培養(yǎng)VSMC,經(jīng)α-actin免疫組化鑒定為VSMC,第3-5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。2 實(shí)驗(yàn)生化檢測(cè)指標(biāo)和方法

    用臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞汁數(shù)法檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)日細(xì)胞以1.0×105個(gè)/L的密度種于24孔板,培養(yǎng)24h后以無血清DMEM靜息24h,換成8%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,分為對(duì)照組和不同濃度加藥組,每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)24 h、72 h后,分別以0. 25%胰蛋白酶消化細(xì)胞,取50μL,細(xì)胞懸液與50μL0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液混勻,臺(tái)盼藍(lán)溶液終濃度為0.2%。取一滴混勻懸液加入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)。3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,總體數(shù)據(jù)進(jìn)行組間單因素方差分析 (One Way ANOV),顯著性差異水平設(shè)定為P<0.05。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:24 h、72 h經(jīng)不同藥物濃度血清培養(yǎng)后,與對(duì)照組相比,培養(yǎng)24 h后,20%藥物組、30%藥物組均較其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P<0.01);培養(yǎng)72 h后培養(yǎng)24 h后,10%藥物組較對(duì)照組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P<0.05),200藥物組、30%藥物組均較其在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P

    揭示辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖,從而防治慢性腎臟病早期動(dòng)脈粥樣硬化所致的血管重構(gòu)6討論

    腎臟病患者往往同時(shí)存在高血壓、高血脂、蛋白尿、低蛋白血癥、血尿、貧血、鈣磷失調(diào)等,戰(zhàn)在慢性腎臟病的早期出脫動(dòng)脈粥樣硬化和動(dòng)脈硬化,從而導(dǎo)致血管病變即血管重構(gòu)。血管重構(gòu)是指機(jī)體在生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老和疾病過程中,血管為適應(yīng)內(nèi)、外環(huán)境(特別是力學(xué)環(huán)境)的變化而發(fā)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的一系列適應(yīng)性改變,足機(jī)體對(duì)血流動(dòng)力學(xué)長(zhǎng)期改變而發(fā)生的一種適應(yīng)性反應(yīng)和病理生理學(xué)過程[2],血管重構(gòu)的中心環(huán)節(jié)是血管平滑肌細(xì)胞的增殖、凋亡和重組。動(dòng)脈重構(gòu)是一此心血管疾病共同的重要的病理生理改變和發(fā)病基礎(chǔ),故而抑制動(dòng)脈重構(gòu)是減少慢性腎臟病心血管疾病的的重要環(huán)節(jié),對(duì)降低其發(fā)病率和病死率具有重要意義。在慢性腎臟病的早期往往已出現(xiàn)心血管并發(fā)癥,其發(fā)生率隨腎功能進(jìn)展而增加,至終末期腎病( ESRD)時(shí)達(dá)最高峰。

    依據(jù)FSGS及其心血管病變足以氣推動(dòng)力虛損,樞機(jī)不利,濕濁瘀毒蘊(yùn)結(jié),心腎脈絡(luò)損傷為基本病機(jī),本課題以辛通暢絡(luò),益氣和血為法,篩選組合既往臨床觀察具有療效優(yōu)勢(shì)的中藥復(fù)方為中醫(yī)干預(yù)觀察藥物。

    辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方建立的以疏利少陽法為主,融益氣養(yǎng)陰,清熱利濕,辛通暢絡(luò)、活血化瘀為一體的中藥復(fù)方制劑。在證實(shí)了腎絡(luò)寧能有效改善FSCS大鼠腎臟功能指標(biāo),減輕腎臟病理形態(tài)學(xué)損害等實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上[3],本研究針對(duì)慢性腎臟病患者近半數(shù)死于嚴(yán)重心血管并發(fā)癥的這一嚴(yán)重社會(huì)問題,探討腎絡(luò)寧對(duì)防治動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)大血管重構(gòu)的作用機(jī)制,為減少慢性腎臟病患者心血管并發(fā)癥的發(fā)生、提高CKD患者生存率和生活質(zhì)量提供理論依據(jù)。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明辛通暢絡(luò)中藥復(fù)方能夠抑制平滑肌細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)大血管重構(gòu),提示腎絡(luò)寧具有可推遲動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的作用,從而降低心血管疾病的危險(xiǎn)性,揭示了該藥物不僅僅是通過改善腎功能異常來減少心血管病發(fā)病的危險(xiǎn)性,同時(shí)本身具有減少慢性腎臟病的心血管疾病的作用,最終提高慢性臟病患者生存率和生活質(zhì)量。研究辛通暢絡(luò)中約復(fù)方改善慢性腎臟病心血管疾病的機(jī)制及擴(kuò)大使用范圍奠定基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn):[1] Bleumink GSS,An11dFCS,Miriam CJM,et al.Genetic polymorphism andheart failure. GenetMed ,2004,6(6):465-474.[2]李元,龔文輝.血管重建及影響因素[J].滁州學(xué)院學(xué)報(bào),2002,7(1):117 -120[3]楊曉琨,辛通暢絡(luò)法對(duì)FSGS腎病大鼠心血管的重構(gòu)作用及機(jī)制研究[博十學(xué)位論文].天津:天津中醫(yī)藥大學(xué),2010

    (收稿日期:2014-10-21)

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