添加烏骨雞肌肉對(duì)小白鼠早期生長(zhǎng)發(fā)育的影響

李思　張福平　林家棟　潘蘭兵　易恒潔　李維

摘要：選擇健康、生長(zhǎng)發(fā)育良好的赤水烏骨雞母雞、飼養(yǎng)條件相同的普通母雞各4羽，采胸肌烘干后制粉備用。選擇200只雌性健康斷奶小白鼠，隨機(jī)分成5組，A組為對(duì)照組，只飼喂小白鼠專(zhuān)用飼料，B、C組每日分別按體質(zhì)量灌服普通雞肌肉粉1.2、2.4 g/kg；D、E組每日分別按體質(zhì)量灌服赤水烏骨雞肉粉1.2、2.4 g/kg。試驗(yàn)期為4周，每周測(cè)定各組增質(zhì)量。在第4周末期測(cè)定小白鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，進(jìn)行負(fù)重游泳和缺氧試驗(yàn)，測(cè)定各組小白鼠血液中溶菌酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶3類(lèi)血清酶的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加烏骨雞肌肉對(duì)小白鼠增質(zhì)量、負(fù)重游泳時(shí)間、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響顯著比添加普通雞肌肉好，各組酶指標(biāo)E>D>C>B>A。耐缺氧時(shí)間長(zhǎng)短分別為E>D>C>B>A。以上結(jié)果說(shuō)明，赤水烏骨雞肉具有良好的保健效果，對(duì)增強(qiáng)小白鼠的體質(zhì)和免疫力均有促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：烏骨雞肌肉；小白鼠；早期發(fā)育

中圖分類(lèi)號(hào)： S873 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0220-03

烏骨雞原產(chǎn)于我國(guó)，是營(yíng)養(yǎng)豐富的滋補(bǔ)食品，又具有特殊的藥用價(jià)值，聞名古今中外?，F(xiàn)在，由烏骨雞加工的藥品多種多樣，其系列產(chǎn)品有：烏雞白鳳丸、烏雞白鳳片、烏骨白鳳補(bǔ)精、烏雞婦康糖漿、烏雞補(bǔ)酒、烏雞桂風(fēng)酒、烏雞桂園補(bǔ)酒、烏雞酒、烏雞調(diào)經(jīng)丸、烏雞鴨精等[1]。國(guó)內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)描述出烏骨雞的營(yíng)養(yǎng)保健功能，主要有補(bǔ)血、抗衰老[3]、抗氧化和清除自由基、抗誘變、抗紫外線和金屬離子的富集等作用[2-8]。烏骨雞作為生活中常見(jiàn)、經(jīng)濟(jì)的保健食品，生產(chǎn)高品質(zhì)烏骨雞具有廣大的市場(chǎng)前景和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)通過(guò)研究烏骨雞肉對(duì)小鼠早期發(fā)育的影響探討赤水烏骨雞的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，旨在為提高烏骨雞的保健和藥用價(jià)值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

同源赤水烏骨雞、普通肉雞各4羽，取自貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院養(yǎng)雞場(chǎng)。14～18 g初生雌性小白鼠200只，購(gòu)自貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室。

1.2 主要儀器設(shè)備

小鼠飼養(yǎng)籠、小鼠灌胃針、烘箱、離心粉碎機(jī)、溶菌酶（lysozgme）檢測(cè)試劑盒、過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）測(cè)試盒（購(gòu)自南京建成試劑公司）、分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、電子天平、秒表等常用試驗(yàn)器具。

1.3 試驗(yàn)步驟

1.3.1 雞肉樣品制備

普通雞與烏骨雞用窒息法處死，去毛、洗凈，剝離雞肉、骨頭、內(nèi)臟，雞肉砍碎后放在干燥箱內(nèi)，在100 ℃條件下烘約4 h，然后在80 ℃條件下烘干后粉碎，裝袋標(biāo)記備用。

1.3.2 小鼠分組飼養(yǎng)

初生小白鼠自購(gòu)買(mǎi)后預(yù)飼3 d，第4 d開(kāi)始試驗(yàn)前期操作，即分組分梯度飼喂小白鼠，稱(chēng)質(zhì)量按體質(zhì)量一致原則隨機(jī)分為5個(gè)組。每個(gè)組20只小鼠，分別為：A組（對(duì)照組）：喂食正常飼料；B組（普通雞肉Ⅰ組）：每日喂食烘干普通雞肉1.2 g/kg，相當(dāng)于60 kg的人每天食用普通雞肉濕重約240 g；C（普通雞肉Ⅱ組）：每日喂食烘干普通雞肉 2.4 g/kg；D組（烏骨雞肉Ⅰ組）：每日喂食烘干赤水烏骨雞肉1.2 g/kg；E組（烏骨雞肉Ⅱ組）：每日喂食烘干赤水雞肉 2.4 g/kg。飼料為配合專(zhuān)用顆粒小鼠料（購(gòu)自貴陽(yáng)康牧獸藥飼料），其飼料成分見(jiàn)表1。小鼠灌胃第1天開(kāi)始，每天早上取空腹小鼠使用電子天平稱(chēng)質(zhì)量，以精確計(jì)算所需灌胃雞肉粉質(zhì)量。

1.4 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.4.1 體質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

體質(zhì)量指標(biāo)采第1天、第7天、第14天、第21天、第28天的數(shù)據(jù)，按組別總體質(zhì)量除以小鼠數(shù)量的平均體質(zhì)量為參考。

1.4.2 負(fù)重游泳試驗(yàn)

末次喂養(yǎng)后1 d進(jìn)行游泳試驗(yàn)。每組小鼠各取體質(zhì)量相近的7只小鼠，在其尾根部綁上負(fù)荷占其體質(zhì)量5%的鉛皮，置游泳箱（50 cm×50 cm×40 cm）中游泳，水溫（25±1.0）℃，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至沉下水8 s不浮起，即小鼠游泳時(shí)間（min）。

1.4.3 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測(cè)定

連續(xù)灌胃4周后，小鼠稱(chēng)質(zhì)量后頸椎脫臼處死，取脾臟和胸腺，去盡筋膜，稱(chēng)質(zhì)量。根據(jù)免疫器官指數(shù)的計(jì)算公式：免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（kg），得出免疫器官指數(shù)。

1.4.4 耐缺氧試驗(yàn)測(cè)定方法

取小鼠7只，放入廣口瓶中，蓋上瓶蓋，與一氧化碳發(fā)生裝置連接，秒表計(jì)時(shí)開(kāi)始，直至小白鼠死亡，作為小白鼠耐低張性缺氧時(shí)間。

1.4.5 血清中溶菌酶總酶活性的測(cè)定

采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定。小鼠眼眶采血，輪胎式離心機(jī)離心30 min，取上層血漿進(jìn)行測(cè)定。

1.4.6 血液中過(guò)氧化氫酶（CAT）的測(cè)定 采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定。小鼠眼眶采血，取50 μL全血加蒸餾水至5 mL充分混勻放置10 min，用分光光度計(jì)在405 nm處測(cè)定絡(luò)合物生成量，計(jì)算CAT活力。

1.4.7 小鼠全血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的測(cè)定

采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定。小鼠眼眶采血，取肝抗凝素全血用雙蒸水分別配成1 ∶49和1 ∶99的血溶液測(cè)定酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，求出酶活力。但是這2個(gè)底物在沒(méi)有酶的條件下，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)（稱(chēng)非酶促反應(yīng)），所以最后計(jì)算時(shí)必須減去非酶促反應(yīng)的部分[9]。

1.4.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

對(duì)測(cè)定的數(shù)據(jù)輸入Excel電子表格，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，對(duì)得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，評(píng)判各組數(shù)據(jù)優(yōu)劣，得出結(jié)論。

2 結(jié)果與分析

2.1 體質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

各組增質(zhì)量差異極顯著。添加普通雞肉和添加烏骨雞肉的小鼠增質(zhì)量與對(duì)照組相比均顯著增加，D組與B組、E組與C組增質(zhì)量相比差異極顯著；C組與B組、E組與D組增質(zhì)量相比差異不顯著（表2）。說(shuō)明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠增質(zhì)量，增加雞肉劑量對(duì)小鼠增質(zhì)量有一定效果，但差異不顯著。

2.2 負(fù)重游泳試驗(yàn)

添加普通雞肉和添加烏骨雞肉的小鼠游泳時(shí)間與對(duì)照組相比均顯著增加，各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比體質(zhì)量均有增加（表3），小鼠體質(zhì)量變化也可能是影響小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的因素之一。

添加同一種雞肉的試驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量變化不顯著。而D組與B組相比游泳時(shí)間顯著增加，E組與C組相比顯著增加。這表明添加烏骨雞肉比添加普通雞肉更能夠增強(qiáng)小鼠體力，有抗疲勞作用。

2.3 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測(cè)定

添加普通雞肉和烏骨雞肉的小鼠與對(duì)照組相比脾臟指數(shù)均極顯著增加。D組與B組相比脾臟指數(shù)顯著增加，E組與C組相比顯著增加 （表4），說(shuō)明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠脾臟指數(shù)。此外，添加烏骨雞肉組與添加普通雞肉組及對(duì)照組相比，胸腺指數(shù)顯著增加，添加普通雞肉組與對(duì)照組相比胸腺指數(shù)有所增加，但差異不顯著（表4），說(shuō)明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠胸腺指數(shù)。

2.4 小鼠耐缺氧試驗(yàn)結(jié)果分析

試驗(yàn)組小白鼠曲張性耐缺氧時(shí)長(zhǎng)高于對(duì)照組，添加烏骨雞肉組相比普通雞肉組差異顯著，且E組比D組也有顯著差異（表5）。

2.5 溶菌酶的測(cè)定結(jié)果分析

添加普通雞肉能顯著提高小鼠血清中的溶菌酶含量，添加烏骨雞肉的小鼠血清中溶菌酶含量明顯高于添加普通雞肉的小鼠（表6）。

2.6 過(guò)氧化氫酶活力的測(cè)定結(jié)果分析

添加普通雞肉能顯著提高小鼠血液中的CAT活力，而添

加烏骨雞肉的小鼠血液中的CAT活力極顯著高于對(duì)照（P<001）（表7），說(shuō)明添加烏骨雞肉對(duì)增加小鼠血液中的CAT活力好于添加普通雞肉。

2.7 小鼠全血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的測(cè)定結(jié)果分析

添加雞肉能明顯提高小鼠血液中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力，尤其是E組谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力極顯著高于對(duì)照（表8）。與添加普通雞肉相比，同等添加量情況下添加烏骨雞肉增加谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的幅度更大。

3 討論

小鼠生長(zhǎng)迅速，且與人的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程相似，所以小鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)的結(jié)果對(duì)人有一定的參考價(jià)值。由于試驗(yàn)組較對(duì)照組增加了蛋白質(zhì)的供應(yīng)量，所以添加雞肉組與對(duì)照組相比的結(jié)果可比性較差，而比較烏骨雞組與普通雞組間的差異更具有參考意義。

在增質(zhì)量試驗(yàn)中，C組與B組相比增質(zhì)量不顯著，E組與D組相比增質(zhì)量不顯著，說(shuō)明增加雞肉劑量對(duì)小鼠增質(zhì)量差異不顯著，但也可能是添加雞肉的劑量超過(guò)了小鼠的消化吸收能力。D組與B組相比增質(zhì)量極顯著增加，E組與C組相比也極顯著增加，說(shuō)明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠增質(zhì)量，進(jìn)一步證實(shí)了烏骨雞促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的生物學(xué)作用。

在負(fù)重游泳試驗(yàn)中，添加烏骨雞肉和添加普通雞肉的小鼠與對(duì)照組相比小鼠游泳時(shí)間均極顯著增加，但也可能受小鼠體質(zhì)量變化的影響，由于各試驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量變化不顯著，因此可以通過(guò)比較烏骨雞組與普通雞組間的差異，分析對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響。D組與B組相比負(fù)重游泳時(shí)間顯著增加，E組與C組相比也顯著增加。說(shuō)明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，這表明添加烏骨雞肉能夠增強(qiáng)小鼠體力，有抗疲勞作用。

在脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測(cè)定試驗(yàn)中，D組與B組相比脾臟指數(shù)極顯著增加，E組與C組相比脾臟指數(shù)也極顯著增加；對(duì)于胸腺指數(shù)，烏骨雞肉組和普通雞肉組相比，胸腺指數(shù)顯著增加。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，說(shuō)明烏骨雞肉能增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

在缺氧試驗(yàn)中，B組耐缺氧時(shí)長(zhǎng)較A組無(wú)顯著差異，C組、D組較A組有顯著提高（P<0.05），E組較對(duì)照組有極顯著高（P<0.01），說(shuō)明添加烏骨雞肉有提高小鼠體質(zhì)的功能，且與添加量呈正相關(guān)。

小鼠血清溶菌酶含量測(cè)定中，B組小白鼠血清溶菌酶含量較A組無(wú)顯著差異，C組較對(duì)照組小白鼠有顯著提高，D組較A組小白鼠也顯著提高（P<0.05），E組較A組含量提高極顯著。過(guò)氧化氫酶活力測(cè)定中，B組、C組較A組顯著提高，D組、E組較A組極顯著提高。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力測(cè)定中，B組、C組、D組較A組小白鼠顯著提高，E組較A組極顯著提高。以上3種酶是動(dòng)物機(jī)體抗衰老、抗病能力、抗病毒能力等的指標(biāo)之一。小白鼠飼喂烏骨雞肉1個(gè)月以后血液中3種酶的含量、活力均高出未食用雞肉和食用普通雞肉的小鼠，證明赤水烏骨雞肉具有能增強(qiáng)抗病能力、增強(qiáng)體質(zhì)、延緩細(xì)胞衰老等保健功能。

通過(guò)上述研究，我們初步證實(shí)了赤水黑羽烏骨雞肉能增強(qiáng)小白鼠的體質(zhì)和免疫力，其保健價(jià)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)普通雞肉。本研究為進(jìn)一步探究烏骨雞的保健價(jià)值、藥用方法及開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

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