中藥復方理囊散對奶牛子宮復舊期間生殖激素的影響

王銀龍　谷新利　木爾扎提·阿勒騰別克　吳學林　伍輝　賽務加甫

摘要：為探討中藥理囊散對產后奶牛生殖激素的影響，使20頭荷斯坦奶牛于產后0、15 d口服中藥理囊散，統(tǒng)計受胎率，通過酶聯(lián)免疫法（ELISA）分析理囊散對產后奶牛血清中促黃體素（LH）、促卵泡素（FSH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）含量的影響。結果顯示，試驗組（A組）45 d內的受胎率為70%，顯著高于對照組（B組）。血清中FSH含量于產后15、30 d達到最大值，LH含量于產后20 d達到最大值，E2含量于產后20、30 d達到最大值，均極顯著高于對照組同時期FSH、LH、E2的含量（P<0.01）。P4含量從產后15 d開始上升，于產后20 d達到最大值，極顯著高于對照組（P<001），并于產后30 d下降，極顯著低于對照組（P>0.05）。理囊散能刺激卵巢活動，提高產后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2分泌水平，提升早期受胎率，縮短產犢間隔，對產后奶牛子宮機能的恢復具有顯著作用。

關鍵詞：理囊散；子宮復舊；奶牛；生殖激素

中圖分類號： S858.237.2+3 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2015）07-0203-03

奶牛子宮復舊是指產后子宮恢復到未孕時形態(tài)和功能的生理過程[1]，子宮復舊的過程和狀態(tài)決定著奶牛產后首次發(fā)情的受胎率，若產后發(fā)情時間推遲，產犢間隔就會延長。我國僅有小部分中、小型奶牛場的產犢間隔天數(shù)可達365～380 d，90%的母牛產犢間隔在400 d以上，有的甚至達到455 d，有半數(shù)產后母牛的空懷時間在90～120 d，嚴重影響奶牛場的經濟效益，制約著我國奶牛業(yè)的健康發(fā)展[2，5]。為縮短奶牛的產犢間隔，不僅要對產后母牛進行科學的飼養(yǎng)管理，還應進行產后早期的相應處理。中藥具有療效確切、無殘留、毒副作用小等優(yōu)點，因此開發(fā)利用中草藥促進產后奶牛子宮恢復具有重要意義。本試驗通過理囊散對產后奶牛的處理，加快子宮恢復時間，提高早期受胎率，縮短產犢間隔，檢測理囊散對產后奶牛子宮復舊期間生殖激素的影響，為中獸藥治療產后疾病提供一定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 于2013年4—11月在新疆志翔牧業(yè)奶牛場、西部牧業(yè)奶牛場進行臨床試驗。在排除傳染病、寄生蟲病、肉眼可見的生殖道疾病、先天性因素的基礎上，選擇產犢胎次不同的荷斯坦奶牛40頭并分為2組，每組各20頭。A組為試驗組，即灌服理囊散治療組；B組為對照組，即自然恢復健康組。

1.1.2 儀器與設備 PowerWave XS2 BioTek型酶標儀；-80 ℃ 超低溫冰箱；Eppendorf Research型移液器（艾本德中國有限公司）。

1.1.3 主要藥品與試劑 LH、FSH、E2、P4 ELISA試劑盒購于上海藍基生物科技有限公司，其中LH、FSH、P4的靈敏度為0.1 ng/mL，E2的靈敏度為1 pg/mL。理囊散由女貞子、熟地黃、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中藥組成。

1.2 方法

1.2.1 投藥及采血時間 試驗組每頭奶牛于分娩完成4 h后灌服理囊散400 g，每天1次，連續(xù)1個療程（5 d），觀察 10 d 后繼續(xù)灌服1個療程。灌服理囊散前第1次采血，第1個療程結束后第2次采血，每隔5 d采血1次，共采血10次，采血時間為09：00—10：00。奶?？崭箷r于尾靜脈采取血液10 mL，并于室溫下靜置，血清自然析出后分裝于1.5 mL離心管中，置于-80 ℃冰箱保存待檢。對照組每次灌服無菌生理鹽水400 g，灌服天數(shù)、采血時間均與試驗組相同。

1.2.2 激素含量的測定 上述所采集血清中的LH、FSH、E2、P4含量均采用酶聯(lián)免疫法測定，按試劑盒使用說明書操作。

1.2.3 療效判定 經直腸檢查，子宮基本恢復正常大小且沒有惡露排出，可判定為有效。經直腸檢查，子宮龐大或子宮壁腫脹，仍有惡露或膿性分泌物排出，子宮復原差且弛緩，含有大量液體，按摩子宮體、子宮頸、陰道前部會促使惡臭分泌物流出陰門，則判定為無效。用藥療程結束后，產后0～45 d內未發(fā)情則判定為無效；產后0～60 d進行人工授精，未受孕者則判定為無效。

1.2.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。試驗數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 理囊散對產后奶牛子宮復舊的治療效果

A組奶牛30、45 d內的發(fā)情率高于B組奶牛，且45 d內的受胎率、有效比均高于B組奶牛（表1）。經產奶牛的產后恢復時間短于第1、2胎奶牛。

2.2 理囊散對產后奶牛血清中生殖激素的影響

根據(jù)表2、表3中數(shù)據(jù)繪制各激素的變化曲線（圖1至圖4）。A組中經理囊散2個療程處理的產后奶牛，在產后15、30 d，血清中FSH、E2含量均出現(xiàn)2個高峰期，極顯著高于B組同時期FSH、E2的含量（P<0.01），B組奶牛血清中FSH含量在產后20、30 d出現(xiàn)2個高峰期，而E2含量在子宮復舊期間僅出現(xiàn)1個高峰期。A組奶牛血清中LH含量在產后 10 d 開始上升，并于產后20 d達到最大值，極顯著高于B組同時期LH的含量（P<0.01）。A組奶牛血清中P4含量在產后15 d開始升高，并于產后20 d達到最大值，產后35 d后持續(xù)高含量水平，極顯著高于B組同時期P4的含量（P<001）?？梢?，A組奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的含量比B組提前5 d達到最大值，總體變化規(guī)律基本與魏學良[6]、高樹等[7]的研究結論相符。

3 討論

3.1 理囊散對產后奶牛血清中FSH、LH水平的影響

試驗結果表明，A、B組奶牛子宮復舊期間血清中FSH、LH均處于較低水平。魏學良、高樹等研究發(fā)現(xiàn)，奶牛產后2周內血清中LH濃度水平較低，于3周后上升，呈劇烈的活動變化，而FSH在產后12 d內均處于較低水平[6-7]，本試驗結論與之基本一致。可能的原因為產后2周內促性腺激素釋放激素（GnRH）的釋放脈沖頻率尚未恢復，致使FSH、LH的水平較低，并由于FSH、LH對GnRH的分泌反應不同所致。低頻率的GnRH可引起FSH的釋放，而僅當GnRH脈沖頻率高達1次/h才可釋放LH[8]。經理囊散處理后，A組奶牛產后15、30 d發(fā)情頭數(shù)明顯多于B組，直腸檢查發(fā)現(xiàn)卵巢上卵泡活動頻繁，檢測結果顯示血清中FSH含量在產后15、30 d達到最大值。血清中LH的含量在產后15 d開始逐漸上升，并于產后20 d達到最大值，表明卵巢上的卵泡退化后形成正常黃體?，F(xiàn)代中獸醫(yī)理論認為，理囊散可使產后奶牛卵巢提前活動，并提高奶牛機體內FSH、LH的分泌水平，是由于母畜的性周期變化受下丘腦-垂體-卵巢軸的調節(jié)[9]。據(jù)報道，補腎中藥可降低促乳素分泌水平[10-11]，而理囊散中的熟地黃、女貞子、附子、甘草均屬于補腎、益精、填髓的藥物，可使產后奶牛的促乳素水平下降，解除高水平促乳素對下丘腦-垂體-卵巢軸的抑制作用，從而刺激卵巢活動。

3.2 理囊散對產后奶牛血清中P4、E2水平的影響

P4在產后15 d內處于較低水平，從產后20 d開始逐漸上升，于產后25 d達到最大值，并于產后30 d達到最小值，產后35 d后趨于平穩(wěn)上升（圖3）。P4由黃體與胎盤產生，P4含量隨分娩后妊娠黃體的退化而急劇下降，產后0 d左右降到基礎水平，并維持在較低水平直至產后第1次排卵，從產后15 d開始明顯上升，并于產后25 d達到峰值，其原因是第1次排卵結束后形成黃體并出現(xiàn)短暫的周期，產后35 d后A組明顯趨于平穩(wěn)上升，經直腸檢查部分奶牛已受孕，卵巢上形成妊娠黃體，分泌P4水平增加，促使整體水平提高。經理囊散處理后，A組奶牛血清中E2含量不僅顯著高于同時期B組，且分泌時間提前5 d（圖4）。據(jù)報道，切除卵巢的動物，其子宮對催產素的敏感性很低，而經E2處理的子宮敏感性則很高，微量催產素即可引起子宮肌的有力收縮，從而加強子宮的早期恢復[12]。E2可增強子宮的收縮能力，有促進子宮復舊的作用，E2還可刺激子宮黏膜產生大量催產素受體，利于催產素對子宮的收縮作用，加快產后奶牛子宮內惡露的排放，減少子宮炎癥等疾病的發(fā)生，為人工授精提供良好的子宮環(huán)境。影響產后奶牛子宮機能恢復的因素較為復雜，其中卵巢是影響E2分泌水平最主要的因素之一。母畜性周期變化受下丘腦-垂體-卵巢軸的調節(jié)，E2是此調節(jié)系統(tǒng)中的關鍵激素[13]，而理囊散中的熟地黃可上調雌性小鼠老化進程中E2的含量[14]，且理囊散中的醇溶性成分可促進小鼠子宮發(fā)育，具有明顯的促孕活性[15]。

4 結論

理囊散具有添加小劑量外源E2的作用，通過下丘腦-垂體-卵巢軸的調節(jié)促進和提高產后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的分泌水平，進而加快產后奶牛惡露的排放、發(fā)情時間及子宮形態(tài)的恢復，從而提高受胎率，縮短產犢間隔期。理囊散具有奶牛產后保健作用，可加快產后奶牛生殖機能的恢復。

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