FN和MMP14蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及其臨床意義

唐微　孫奇

【摘要】目的探討鼻咽癌組織中纖維連接蛋白（FN）和基質(zhì)金屬蛋白酶14（MMP14）的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法選取56例鼻咽癌標(biāo)本作為觀察組，18例鼻咽炎標(biāo)本作為對照組，采用SP免疫組織化學(xué)法檢測兩組標(biāo)本中FN和MMP14的陽性表達(dá)情況，并分析二者的關(guān)系及其臨床意義。結(jié)果基底膜FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)低于鼻咽炎組織，間質(zhì)FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)高于鼻咽炎組織（P<0.05或0.01），而MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯高于鼻咽炎組織（P<0.01）；基底膜FN和MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)與年齡、性別無顯著性相關(guān)（P>0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)（P<0.01）；基底膜FN和 MMP14蛋白在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.478，P=0.000）。結(jié)論MMP14的高表達(dá)及FN的異常表達(dá)在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期中可能具有重要作用。

【關(guān)鍵詞】鼻咽癌；基質(zhì)金屬蛋白酶14；纖維連接蛋白

中圖分類號：R739.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.03.012

Expression and clinical significance of FN and MMP14

protein in nasopharyngeal carcinoma

TANG Wei，SUN Qi

（The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical UniversityLiuzhou

Workers Hospital，Liuzhou 545001，Guangxi，China）

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expressions of fibronectin（FN） and matrix metalloproteinases14 （MMP14） in nasopharyngeal carcinoma and their relationship with clinicopathologic characteristics.Methods56 cases of nasopharyngeal carcinoma specimens were selected as observation group，and 18 cases of nasopharyngitis specimens as control group.SP immunohistochemical method was used to detect positive expressions of FN and MMP14 of specimens in both groups.Meanwhile，the relationship between the expressions and clinical significance was also analyzed.Results In nasopharyngeal carcinoma tissues，the positive expression of basement membrance FN was significantly lower than that in the nasopharyngitis tissues，while that of interstitial FN was higher than that in nasopharyngitis tissues（P<0.05 or 0.01），and the positive expression of MMP14 was significantly higher than that in nasopharyngitis tissues（P<0.01）.The positive expressions of basement membrance FN and MMP14 had no significant correlation with gender and age （P>0.05），but they had close relationship with lymphatic metastasis and clinical stage（P<0.01）.Besides， the expressions of basement membrance FN was negatively correlated with MMP14 in nasopharyngeal carcinoma tissues （r=-0.478，P=0.000）.ConclusionHigh expression of MMP14 and aberrant expression of FN may play an important role in lymph node metastasis and clinical staging of nasopharyngeal carcinoma.

【Key words】nasopharyngeal carcinoma；MMP14；FN

鼻咽癌是我國南方及東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展是一個涉及多基因、多途徑和多階段的復(fù)雜生物學(xué)過程[1]。纖維連接蛋白（FN）是基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)主要的糖蛋白成分，在腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移中具有重要作用?；|(zhì)金屬蛋白酶14（MMP14）是鋅依賴性基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）家族的一員，可降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，MMP14的高表達(dá)在腫瘤進(jìn)展及浸潤轉(zhuǎn)移中同樣具有重要的作用[2]。本實驗通過研究鼻咽癌和鼻咽炎性組織中MMP14和FN的表達(dá)情況及其與鼻咽癌臨床預(yù)后的相關(guān)性，探討它們在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的意義。1材料與方法1.1材料 本實驗所用標(biāo)本均經(jīng)鼻咽部活檢病理確診，鼻咽癌標(biāo)本56例，鼻咽炎標(biāo)本18例，所有標(biāo)本均為病理科包埋好的石蠟切片。在56例鼻咽癌標(biāo)本中，男41例，女15例；年齡20～76歲，其中≥50歲33例，<50歲23例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；臨床分期在Ⅰ～Ⅱ期的22例，Ⅲ～Ⅳ期的34例。所有標(biāo)本均取自廣西柳州市工人醫(yī)院2012年5月至2014年8月的就診患者。endprint

1.2試劑及方法所有標(biāo)本均經(jīng)中性福爾馬林固定，乙醇脫水及石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，免疫組織化學(xué)技術(shù)采用SP法，按SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。多克隆兔抗人FN抗體、單克隆鼠抗人MMP14抗體及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3結(jié)果判斷在光學(xué)顯微鏡下對兩組免疫組化片染色情況進(jìn)行評估，F(xiàn)N抗體表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：根據(jù)著色的表達(dá)形態(tài)評分，完全缺失計0分，碎片狀或顆粒狀計1分，斷續(xù)線狀或條索狀計2分，連續(xù)線狀或偶有中斷計3分。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計分，陽性細(xì)胞率<10%為0，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分，按著色形態(tài)和陽性細(xì)胞所占百分比兩項得分相乘劃分為兩組：弱表達(dá)或陰性為0～4分，陽性表達(dá)為6～9分。MMP14抗體的表達(dá)根據(jù)著色的強弱程度評分，不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計分，陽性細(xì)胞率<10%為0，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分，按著色強度和陽性細(xì)胞所占百分比兩項得分相乘劃分為兩組：弱表達(dá)或陰性為0～4分，陽性表達(dá)為6～9分。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，應(yīng)用χ2檢驗分析FN、MMP14在鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中的表達(dá)情況及其與患者臨床病理特征之間的關(guān)系；應(yīng)用Spearman等級相關(guān)分析FN與MMP14表達(dá)之間的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中FN和MMP14的表達(dá)FN主要分布在各種基底膜及間質(zhì)，根據(jù)其表達(dá)部位分為間質(zhì)FN和基底膜FN，F(xiàn)N在正常鼻咽黏膜上皮基底膜及間質(zhì)纖維結(jié)締組織中，陽性表達(dá)呈纖維狀或連續(xù)線狀分布（見圖1A）。FN在鼻咽癌的表達(dá)主要為斷續(xù)或條索狀，或呈碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失（見圖1B）。間質(zhì)FN在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為73.21%及44.44%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；基底膜FN在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為32.14%及83.33%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。MMP14主要表達(dá)于鼻咽癌細(xì)胞或癌旁間質(zhì)，陽性細(xì)胞在靠近癌細(xì)胞巢邊緣及浸潤性生長區(qū)域較多，且染色較深（見圖2）；MMP14在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為82.14%及22.22%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

圖1FN在不同鼻咽黏膜的表達(dá)情況（SP：×40）。A：在正常鼻咽黏膜上皮

基底膜及間質(zhì)纖維結(jié)締組織中的表達(dá)；B：在鼻咽癌組織中的表達(dá)。

圖2MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)（SP：×40）。

表1 FN及MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)[n（%）]

組別n間質(zhì)FN弱表達(dá)/陰性陽性基底膜FN弱表達(dá)/陰性陽性MMP14弱表達(dá)/陰性陽性鼻咽癌組5615（26.79）41（73.21）38（67.86）18（32.14）10（17.86）46（82.14）鼻咽炎組1810（55.56）8（44.44）3（16.67）15（83.33）14（77.78）4（22.22）χ2-5.040014.446822.3184P-0.02480.00000.0000

2.2基底膜FN及MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系基底膜FN及MMP14蛋白的表達(dá)與鼻咽癌的性別、年齡無顯著性相關(guān)（P>0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期顯著相關(guān)（P<0.01），在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中，基底膜FN的表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。而MMP14在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中的表達(dá)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 基底膜FN及MMP14的表達(dá)與鼻咽癌不同臨床病理特征的關(guān)系

觀察指標(biāo)因素n基底膜FN弱表達(dá)/

陰性陽性χ2PMMP14弱表達(dá)/

陰性陽性χ2P性別男4128130.04310.83558330.01980.8881女15105213年齡≥50歲3323100.12470.72406270.07760.7805<50歲23158419臨床分期Ⅰ～Ⅱ期2271521.57730.000091310.66620.0011Ⅲ～Ⅳ期34313133淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無2161523.77540.000091211.71940.0006有35323134

2.3基底膜FN與MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性鼻咽癌組織MMP14陽性表達(dá)的46例中，基底膜FN陽性表達(dá)的有10例；MMP14弱表達(dá)或陰性表達(dá)的10例中，基底膜FN弱表達(dá)或陰性表達(dá)的有2例；鼻咽炎組織MMP14陽性表達(dá)的4例中，基底膜FN亦陽性表達(dá)的有2例；MMP14弱表達(dá)或陰性表達(dá)的14例中，基底膜FN亦陰性表達(dá)的有1例。見表3。經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，基底膜FN及MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.478，P=0.000）。

表3 基底膜FN與MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性

組別觀察指標(biāo)表達(dá)情況MMP14陽性弱表達(dá)陰性鼻咽癌組基底膜FN陽性108弱表達(dá)/陰性362鼻咽炎組基底膜FN陽性213弱表達(dá)/陰性21

3討論鼻咽癌是我國常見的頭頸部腫瘤，其發(fā)生發(fā)展過程十分復(fù)雜，是多因素共同作用的結(jié)果。 FN是一種糖蛋白，在血漿中以可溶性二聚體形式存在，在細(xì)胞表面和細(xì)胞外基質(zhì)中以二聚體或多聚體形式存在。FN可與膠原蛋白、纖維蛋白、肝素和肌動蛋白等結(jié)合，參與細(xì)胞黏附、運動、調(diào)理作用，促進(jìn)傷口愈合，并維持細(xì)胞形狀等生物學(xué)過程。MMP14是一種模型基質(zhì)金屬蛋白酶，可激活MMP2間接降解細(xì)胞外基質(zhì)，也可通過降解膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白、玻璃粘連蛋白等直接降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，從而在細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、分化、血管生成和宿主免疫逃避過程中發(fā)揮重要作用。endprint

局部浸潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是鼻咽癌最主要的死亡原因之一，降解細(xì)胞外基質(zhì)突破基底膜是腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。FN作為基底膜的重要組成成分，對維持細(xì)胞的穩(wěn)定性具有重要作用。有文獻(xiàn)報道[3～5]，F(xiàn)N表達(dá)與鼻咽癌、結(jié)腸癌及人纖維肉瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，與惡性甲狀腺腫瘤、惡性周圍神經(jīng)鞘瘤的惡性程度有關(guān)。另有文獻(xiàn)證實[6]，F(xiàn)N蛋白能與Caspase3結(jié)合，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡反應(yīng)。而MMP14能降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，在腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)[7～13]，MMP14在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、頭頸部腫瘤及宮頸癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤的惡性程度、遷移侵襲呈正相關(guān)。且在胃癌中，MMP14可以激活非經(jīng)典Wnt通路中Wnt5a的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞向上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的遷移侵襲[14]。此外，MMP14高表達(dá)與彌漫性浸潤型星形細(xì)胞瘤的進(jìn)展相關(guān)[15]。

本實驗中我們通過免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，基底膜FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)低于鼻咽炎組織，呈斷續(xù)或條索狀，或碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失，而MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯高于鼻咽炎組織，且兩者在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)?；啄N和MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)與年齡、性別無明顯相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期顯著相關(guān)，在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中，基底膜FN的表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，而MMP14在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中的表達(dá)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，證實了MMP14在鼻咽癌中高表達(dá)，且與鼻咽癌的局部浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，推測高表達(dá)的MMP14可能通過降解基底膜FN，使基底膜FN的表達(dá)下降，從而破壞腫瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性，使腫瘤細(xì)胞黏附性下降，易于脫落，為腫瘤細(xì)胞在其他部位及遠(yuǎn)處的生長創(chuàng)造了有利條件，對鼻咽癌的浸潤與轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。

本實驗中基底膜FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)低于鼻咽炎組織，呈斷續(xù)或條索狀，或碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失，而間質(zhì)FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)高于鼻咽炎組織，推測基底膜FN及間質(zhì)FN可能在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中具有不同作用。間質(zhì)FN在鼻咽癌組織中表達(dá)增加的機制尚不清楚，可能是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長運動，抑或是機體的一種反應(yīng)，但有研究表明間質(zhì)FN的增多與腫瘤的惡性程度相關(guān)，是預(yù)后不良的因素之一[16]。本實驗同樣證明了這一觀點。

綜上所述，F(xiàn)N及MMP14在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。因而FN及MMP14的表達(dá)改變可作為判斷鼻咽癌預(yù)后的標(biāo)志物之一，且為MMP14作為鼻咽癌晚期治療的靶向標(biāo)志物提供了理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)[1] Chang ET，Adami HO.The enigmatic epidemiology of nasopharyngeal carcinoma [J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（10）：17651777.

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（收稿日期：2015-02-12修回日期：2015-04-27）

（編輯：潘明志）endprint