高效液相色譜儀常見故障原因分析和解決方法

卓宇楨（正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310023）

作為當前分離分析技術(shù)中的典型代表，高效液相色譜以其自身應(yīng)用范圍廣、分析速度快、靈活度與分析效率高等優(yōu)勢被廣泛用于生化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中。然而實際操作過程中也可能存在故障現(xiàn)象，使分析結(jié)果受到不同程度影響，要求操作人員做好及時排查與維護，提高高效液相色譜儀的使用效果。

1 故障產(chǎn)生的原因與解決方法分析

1.1 液相色譜儀的泵壓問題

泵壓問題在高效液相色譜儀運行中主要體現(xiàn)在：第一，無壓力問題。該問題產(chǎn)生的原因可能因泵內(nèi)存有氣體，或流動相單向閥因緩沖鹽過多而發(fā)生堵塞，也因設(shè)備高壓密封墊的使用造成變形問題。對此問題的解決要求對流動相進行合理選擇，擰松排氣閥并控制流速，同時需對高壓密封墊及時更換。第二，壓力過高問題。產(chǎn)生這種問題的原因為溶劑過濾頭、管路與手動進樣器發(fā)生堵塞以及保護柱、混合氣與色譜柱出現(xiàn)被污染情況等。解決方式需利用沖洗液對堵塞情況沖洗，而污染問題要求對保護柱進行更換，利用沖洗液清除色譜柱的污染并引入HPLC級水使混合器置于其中完成清洗。第三，壓力過低問題。該問題存在的原因如系統(tǒng)漏液或氣泡存于泵內(nèi)等，需要對漏液部位檢測且及時更換裝置，氣泡現(xiàn)象則需使排氣閥擰松，實現(xiàn)排氣的目標。第四，壓力不穩(wěn)問題。除高壓密封墊受損或污染與堵塞等因素外，如比例閥失效或空氣存于溶劑內(nèi)都可能造成壓力不穩(wěn)，需要對比例閥進行更換，并通過排氣閥的設(shè)置與流速的控制實現(xiàn)超聲脫氣[1]。

1.2 高效液相色譜儀基線問題分析

基線問題方面的故障主要包括基線漂移與噪聲過大兩方面問題。其中基線漂移問題的產(chǎn)生主要受色譜柱、流動相、檢測池的污染以及不穩(wěn)定的電壓與柱溫波動等影響，解決方式通常應(yīng)利用清洗劑解決污染問題，并適時檢查電壓，避免在陽光充足或氣流作用明顯區(qū)域放置柱子。另外也存在流動相不合理的情況出現(xiàn)基線的上下波動，要求在溶液使用方面做到精密量取，保證混合配制合理。而噪聲問題存在的原因主要取決于電干擾所引起的偶然噪聲、污染引起的隨機噪聲以及氣泡或檢測器等方面產(chǎn)生的噪聲，對此需對如水溶等產(chǎn)生干擾的來源進行檢查，清洗設(shè)備污染情況并對流動相進行脫氣。

1.3 峰形問題的分析

峰形問題常見的故障類型主要包括：第一，平頭峰故障。這種故障產(chǎn)生的原因體現(xiàn)在紫外燈、檢測池方面的原因以及進樣量過大，應(yīng)在高效液相色譜儀運行中對紫外燈與檢測池進行適時檢修與清洗，并控制進樣量。第二，分叉峰故障。分叉峰故障多表現(xiàn)在雙峰或肩峰方面，產(chǎn)生的原因除檢測池、色譜柱、進樣閥與保護柱污染方面，也存在溶劑選擇不合理以及樣品過載等原因，可采取清洗措施，保證溶劑合理選擇并減少進樣量。第三，拖尾峰故障，其產(chǎn)生的原因體現(xiàn)為：流動相的pH、流速、配比等不合理，且樣品純度較低，要求對流速進行控制，合理選擇pH與配比，對樣品需進一步純化。第四，伸舌峰故障。產(chǎn)生的原因與拖尾峰故障較為相似，不同的是柱溫較低、樣品過載，應(yīng)做好溫度與進樣量的控制。

1.4 保留時間問題

高效液相色譜儀中保留時間問題首先表現(xiàn)在保留時間變化方面，其產(chǎn)生的原因為柱溫與柱內(nèi)條件的變化、柱污染以及緩沖液容量不足等。對此需要引入恒溫箱，適時清洗柱，并利用緩沖液解決緩沖液容量不足問題。其次，保留時間過長問題，該故障出現(xiàn)的原因主要受流動相組成變化、管路泄漏與硅膠柱活性點發(fā)生改變等，需要避免流動相出現(xiàn)沉淀顯現(xiàn)，進行泵密封圈的更換，同時需將改性劑引入流動相中[2]。

2 對高效液相色譜儀采取的主要維護方式分析

日常維護設(shè)備過程中主要針對進樣閥、溶劑過濾頭、單向閥、色譜柱以及檢測池等方面。從進樣閥方面，在實驗過程中進樣閥的污染容易造成如分叉峰等問題，對設(shè)備的準確性產(chǎn)生一定影響。所以在清洗過程中可針對含有緩沖鹽與不含緩沖鹽的樣品采取不同的策略，若緩沖鹽存于樣品中，則需將HPLC級水注射在進樣口處，直到清洗干凈為止，而對不含緩沖鹽的樣品清洗時，在方式上與前者相同，但清洗次數(shù)相對較少。從溶劑過濾頭清洗角度，如前文所述在使用中往往因污染或堵塞產(chǎn)生泵壓故障問題，在日常維護過程中需在利用HPLC級水清洗后對流動相流速進行設(shè)置，注意分析過濾器內(nèi)是否存在氣泡問題，保證霉菌菌團被破壞后，說明過濾器內(nèi)可使流動相自由通過。從單向閥角度，其出現(xiàn)污染或堵塞的情況多由于密封性較差或存有顆粒物質(zhì)，維護過程中應(yīng)利用純凈水進行超聲清洗。在色譜柱清洗方面，其作為HPLC主要部件，很容易在使用過程中出現(xiàn)柱壓不穩(wěn)或峰形變化問題，維護中在保證鹽類被清洗干凈的前提下，引入甲醇沖洗，并將正相柱在如乙烷等溶劑中保存。

3 結(jié)語

故障的分析與解決是保證高校液相色譜有效運行的重要途徑。分析過程中應(yīng)根據(jù)存在的泵壓、基線、峰形以及保留時間等問題產(chǎn)生的原因進行研究并采取相應(yīng)的策略，而在日常實驗后也需對進樣閥以及色譜柱等方面做好日常維護檢查工作，以此發(fā)揮設(shè)備的應(yīng)有效果。

[1]賀小蔚,李衛(wèi)建,婁炯炯,黃金麗,范中南,汪聰慧.高效液相色譜儀的常見故障及簡易排除方法[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2012,01:151-154.

[2]徐曉玲,樓雪芳.高效液相色譜儀使用中的常見故障及維護方法[J].山東化工,2014,09:43-48.

[3]陳蓮,高洪,肖嘯.高效液相色譜儀使用過程中常見問題及其解決方法[J].中國飼料,2010,08:37-38.