畜禽血液樣品采集與保存方法

楊成財(cái)

(涼州區(qū)柏樹(shù)鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，733000)

血液樣品的采集、分離、保存、運(yùn)送，在畜禽疫病免疫抗體監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)工作中是一個(gè)十分重要的環(huán)節(jié)，是保證監(jiān)測(cè)結(jié)果正確性的必要前提，也是正確反應(yīng)畜禽免疫抗體效價(jià)高低的前提。如果忽視了這一點(diǎn)，就會(huì)直接影響血樣的質(zhì)量，進(jìn)而造成監(jiān)測(cè)結(jié)論不正確而對(duì)免疫程序和免疫效果錯(cuò)誤評(píng)估，最終導(dǎo)致畜禽疫病綜合防制措施達(dá)不到預(yù)期目標(biāo)。因此，筆者結(jié)合多年在基層采集分離畜禽血液樣品的工作經(jīng)驗(yàn)，就如何正確進(jìn)行血液樣品的采集和保存談幾點(diǎn)體會(huì)，僅供參考。

1 器材的準(zhǔn)備

真空采血管或采血器（一次性塑料注射器）、一次性試管、試管架、碘酊棉球、酒精棉球、一次性塑料離心管、離心機(jī)、膠布或標(biāo)簽紙、記號(hào)筆、相關(guān)表格、防護(hù)服、手套、口罩、膠靴等。

2 血液樣品采集

2.1 禽類(lèi)翅靜脈采血

助手抓住禽兩翅及兩腿，右側(cè)臥保定，采血者右手持5mL一次性注射器（也可用真空采血器），左手食指中指固定左翅，拇指壓住近心端翅靜脈，用酒精棉球消毒后，右手將針尖接近平行刺破表皮和血管壁，感覺(jué)無(wú)阻力時(shí)緩緩拉動(dòng)注射器活塞（或接入真空管），血液便緩緩進(jìn)入注射器內(nèi)（或真空管內(nèi)）。每只采集全血1.5mL～2.5mL。雞皮和血管壁薄，應(yīng)注意針尖斜面與角度傾斜大或力度大會(huì)刺破雙層血管而發(fā)生血腫現(xiàn)象。采血完畢后，用干棉球緊壓采血部位拔出注射器，持續(xù)壓住采血部位1-2min，至不出血為止。

2.2 豬血樣品的采集方法

2.2.1 豬耳緣靜脈采血：站立保定，助手用力在耳根處捏壓靜脈的近心端，手指輕彈耳緣后，用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張。將一次性采血器針頭（或真空采血管針頭）沿血管刺入，見(jiàn)有血液回流，緩慢抽取所需量血液或接入真空采血管。每頭采集全血3ml-5ml，用棉球按壓止血。

2.2.2 豬前腔靜脈采血

2.2.2.1 選取合適的針頭，由于豬的大小不同，前腔靜脈的深淺不一樣，要求使用的針頭也不一樣。針頭太短，刺不到前腔靜脈；針頭太長(zhǎng)，則可能刺穿前腔靜脈，同樣采集不到血液。

2.2.2.2 大豬用保定繩固定(站立保定)，要求盡可能把頭吊得高一點(diǎn)，使豬的頭頸與水平面呈30°以上角度，這樣既方便采血人員察看采血部位，又使前腔靜脈向外突出，靜脈血充脹。30kg 以下的小豬，可由1-2 個(gè)工作人員抓起，倒立，后背緊靠在欄架上，還可以將豬仰臥保定，采血時(shí)將頭盡量往下壓，使靜脈充分拉直。

2.2.2.3 抽血部位，豬前腔靜脈在第一對(duì)肋骨間的胸腔入口處的氣管腹側(cè)面，由左右兩側(cè)頸靜脈和腋靜脈匯合形成。當(dāng)小豬仰臥時(shí)第一肋骨與胸骨柄結(jié)合部的前側(cè)方會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)凹陷窩，多于右側(cè)凹陷窩進(jìn)行采血。該血管在一周齡豬直徑約5mm，成年豬約1cm 以上。越往頭部越淺，但也越細(xì)；越靠胸部越粗，但越深。所以采血應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)牟课?。小豬采血的部位太靠前，血管太小，很難扎中，而且扎中了也很難抽到血液，所以小豬的采血部位應(yīng)稍靠后。中大豬和公母豬血管比較粗，往后太深，針頭夠不到血管，所以應(yīng)略靠前。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，30kg 以下的小豬應(yīng)采兩前肢與氣管交匯處，公母豬和30kg 以上中大豬可選頸部最低凹處采血。20-30kg 左右的豬，采血的時(shí)候針的深度一般掌握在0.6-0.9cm。當(dāng)針頭刺入不見(jiàn)血液時(shí),可以將針頭左右或來(lái)回動(dòng)一下，當(dāng)看到針管內(nèi)有血液時(shí)，說(shuō)明已刺入血管，立即采血，采血完畢，局部消毒。

2.3 牛尾靜脈采血

在日常對(duì)牛血樣采集工作中，一般采取頸靜脈采集。采取頸靜脈采血，有諸多不利因素，危險(xiǎn)性大，容易引起牛發(fā)驚，傷人等，特別是奶牛應(yīng)激嚴(yán)重，引起產(chǎn)奶量減少。采取牛尾靜脈采血法采集，牛尾神經(jīng)相對(duì)遲鈍，容易保定。

2.3.1 牛尾靜脈采血部位 牛尾靜脈位于牛尾腹側(cè)面的中心線皮下位置，因離尾根大約20cm 處，靜脈較粗且較淺，所以此處為采血最佳部位。

2.3.2 采血過(guò)程 助手將牛牽好，采血者左手托起牛尾巴，與水平線成45°角左右。在離尾根10cm 左右（第4、5 尾椎骨交界處）中點(diǎn)凹陷處，先用酒精棉球消毒，用右手將采血針針頭垂直刺入（約1cm 深）、針頭觸及尾骨后再回抽1mm 抽血，每頭采集全血3ml～5ml。采血結(jié)束，消毒并按壓止血。

2.4 羊頸靜脈采血

采用頸靜脈采血方法，保定羊(側(cè)臥)，使頭部稍前伸并拉直，使靜脈繃緊，對(duì)頸靜脈局部進(jìn)行剪毛、消毒，用左手手指在采血部位稍下方壓迫靜脈血管，使之充盈、怒張。右手持真空采血器針頭，沿頸靜脈溝與皮膚呈45°角由下向上方剌入，刺入皮膚血管內(nèi)，見(jiàn)回血證明已刺入，松開(kāi)壓迫脈管的左手，接入真空采血管，采完后，用酒精干棉球壓迫局部并拔出針頭。

3 血液樣品的分離與運(yùn)送

3.1 血清的分離

3.1.1 可將采集到的血液保存在一次性注射器中自然析出血清，采血時(shí)將注射器活塞向后拉，留出1cm 左右的空隙，用針帽將針頭蓋上，防止污染，編號(hào)，將注射器針頭朝下傾斜放好，待血樣完全凝固后才能進(jìn)行包裝和運(yùn)輸，途中嚴(yán)禁振蕩，以免溶血。

3.1.2 將血液樣品放置在室溫（20℃）0.5h 左右，待血液凝固后，用離心機(jī)1500-3000r/min 離心5-10min，取上清液置于另一離心管內(nèi)。在離心管管蓋或管壁上用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記。

3.1.3 析出的血清量較少時(shí)，可用100-300ul 的移液器吸取上清液置于另一離心管中，一份血清更換一個(gè)吸頭，用記號(hào)筆在離心管編號(hào)。

3.2 血清的保存與解凍

分離，密封好的血清，應(yīng)冷凍或冷藏保存。一般情況下，在5d 內(nèi)測(cè)定的血清樣品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存。樣品待檢時(shí)間超過(guò)1 周的，-15℃以下低溫冷凍保存。血清從低溫冰箱取出后，最好經(jīng)冰箱、室溫、37℃水浴條件逐步均勻融解，血清應(yīng)完全融解混勻后再用。血清不宜反復(fù)凍融，反復(fù)凍融會(huì)使血清中的脂蛋白和纖維蛋白變性，導(dǎo)致出現(xiàn)絮狀沉淀物，血清的抗體效價(jià)降低。

3.3 血清的送檢

如果血液樣品能在24h 內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室，可保存于4℃環(huán)境的保溫箱內(nèi)，如果24h 內(nèi)不能抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，樣品必須冷凍處理后，并在低溫下運(yùn)送。運(yùn)送途中防止樣品泄漏，密封并加冰袋運(yùn)送，防止暴曬。