異氟醚對(duì)老年大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力及海馬RhoA蛋白表達(dá)的影響

張文超 王庚 胡中華 段開明 歐陽文

[摘要] 目的 探討異氟醚吸入麻醉對(duì)老年大鼠海馬CA3區(qū)RhoA蛋白表達(dá)及空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 方法 篩選出30只健康22月齡SD大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組C組（n = 10）、麻醉組Ⅰ組（n = 10）和Ⅱ組（n = 10）。麻醉組以3%的異氟醚誘導(dǎo)，采用經(jīng)口明視氣管插管建立老年大鼠吸入麻醉模型，并以2%異氟醚維持麻醉2 h。C組大鼠不給任何麻醉藥，只置于麻醉箱中吸入氧氣2 h，氧流量為2 L/min。Ⅰ、Ⅱ組分別于麻醉后24、72 h進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和Y-迷宮實(shí)驗(yàn)并計(jì)算成績(jī)。比較三組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，并采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)三組海馬區(qū)RhoA蛋白表達(dá)。 結(jié)果 ①Y-迷宮實(shí)驗(yàn)：Ⅰ組的Y-迷宮學(xué)習(xí)次數(shù)[（70.50±16.25）次]明顯多于Ⅱ組[（61.80±23.49）次]和C組[（49.20±8.56）次]（P < 0.05），C組與Ⅱ組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：三組的中央格停留時(shí)間、直立次數(shù)、跨格次數(shù)、總活動(dòng)量次數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。②免疫組織化學(xué)法：Ⅰ組海馬CA3區(qū)RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)（112.66±11.56）多于Ⅱ組（97.77±7.47）與C組（99.33±12.10）（P < 0.05），Ⅱ組與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 22月齡SD大鼠接受異氟醚麻醉后24 h空間學(xué)習(xí)記憶能力下降，于麻醉后72 h基本恢復(fù)，異氟醚麻醉后大鼠海馬區(qū)Rho蛋白家族信號(hào)傳導(dǎo)分子變化介導(dǎo)的神經(jīng)突觸形態(tài)學(xué)改變可能是短期空間學(xué)習(xí)記憶能力損傷的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 異氟醚；Y-迷宮；老年大鼠；RhoGTPases；RhoA

[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）06（a）-0038-04

Affect of Isoflurane on spatial memory function and hippocampal RhoA expression in aged rats

ZHANG Wenchao1 WANG Geng1 HU Zhonghua2 DUAN Kaiming2 OUYANG Wen2▲

1.Department of Anesthesiology， Beijing Jishuitan Hospital， Beijing 100035， China； 2.Department of Anesthesiology， the Third Xiangya Hospital of Central South University， Hu'nan Province， Changsha 410083， China

[Abstract] Objective To study affect of Isoflurane with inhalation anesthesia on hippocampal RhoA expression and spatial memory function in aged rats. Methods Thirty 22-month-old Sprague-Dawley rats were randomly assigned to control group （group C， 10 cases）， anesthesia group Ⅰ （10 cases） and anesthesia group Ⅱ （10 cases）. The inhalation anesthesia model of aged rat was established by using endotracheal intubation， 2% Isoflurane was applied to maintain anesthesia of 2 hours after anesthesia induction with 3% Isoflurane by inhalation in anesthesia groups. Any drug was not used in rat of group C， which inhaled 100% oxygen for 2 hours， oxygen flow rate was 2 L/min. Open-field experiment and Y-maze experiment were implemented， performance was calculated after anesthesia of 24， 72 hours in group Ⅰ and group Ⅱ. Learning and memory ability in rats of three groups were compared. Hippocampal RhoA expression in rats of three groups were detected by using the immune histochemical method. Results ①Y-maze experiment： Y-maze learning time of group Ⅰ [（70.50±16.25） times] was significantly more than that of group Ⅱ [（61.80±23.49） times] and group C [（49.20±8.56） times] respectively （P < 0.05）. Y-maze learning time of group C and group Ⅱ was compared， with no statistical difference （P > 0.05）. Open-field experiment： there were no statistical difference on the middle of residence time， number of upright， number of across grid， number of total activity among three groups （P > 0.05）. ②Immune histochemical method： RhoA positive cell count of hippocampal CA3 area in group Ⅰ （112.66±11.56） was more than that in group Ⅱ （97.77±7.47） and group C （99.33±12.10） respectively （P < 0.05）. RhoA positive cell count of hippocampal CA3 area in group Ⅱ and group C was compared， with no statistical difference （P > 0.05）. Conclusion Spatial learning and memory ability of 22-month Sprague-Dawley rats received Isoflurane anesthesia of 24 hours decline， basic recovery after anesthesia of 72 hours. The hippocampus of rat after Isoflurane anesthesia Rho protein signal transduction molecular change mediated synaptic morphology change may be the cellular basis of short-term spatial learning and memory damage.

[Key words] Isoflurane； Y-maze； Aged rat； RhoGTPases； RhoA

近年來，許多研究從大腦海馬區(qū)神經(jīng)突觸形態(tài)學(xué)的變化來探究神經(jīng)結(jié)構(gòu)對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的影響。異氟醚對(duì)神經(jīng)軸突與樹突結(jié)構(gòu)有很大的可塑性，而這種可塑性的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力的細(xì)胞基礎(chǔ)[1]。Rho蛋白家族是與受體偶聯(lián)的小G蛋白家族，分子量為20～30 kD，屬于Ras超家族成員，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要的功能[2]。其主要成員RhoA蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的聚合，對(duì)神經(jīng)纖維延長(zhǎng)與塌陷、神經(jīng)生長(zhǎng)方向具有導(dǎo)向作用，通過對(duì)肌動(dòng)蛋白的調(diào)控而起調(diào)控樹突狀偽足和樹突棘形態(tài)的動(dòng)態(tài)變化，影響神經(jīng)可塑性，而這一現(xiàn)象在學(xué)習(xí)基本形式的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（LTP）中有充分的體現(xiàn)[3]。本研究以老齡SD大鼠作為研究對(duì)象，通過建立吸入麻醉模型，使用動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察異氟醚麻醉后老年大鼠興奮性、探索性指標(biāo)以及空間辨別能力的變化，通過免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠海馬區(qū)RhoA蛋白的表達(dá)變化，為探討22月齡大鼠短時(shí)間異氟醚麻醉后興奮性、空間辨別能力改變的的機(jī)制提供理論依據(jù)，從而更好地闡明吸入異氟醚后對(duì)認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

22月齡老齡SD大鼠，訂購于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)（生產(chǎn)許可證SCXK湘2006-0001）體重550～620 g。飼養(yǎng)條件為（22±1）℃，相對(duì)濕度40%～50%，自然晝夜非直接光照。經(jīng)穿梭箱回避實(shí)驗(yàn)篩選出30只學(xué)習(xí)記憶能力正常的大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組C組（n = 10）、麻醉后24 h Ⅰ組（n = 10）和麻醉后72 h Ⅱ組（n = 10）。

1.2 模型建立

采用Deatex-Ohmeda氣體監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)自制麻醉箱中異氟醚濃度。待麻醉箱內(nèi)異氟醚濃度調(diào)節(jié)至3%時(shí)將麻醉組大鼠放于麻醉箱內(nèi)5 min，再將處于誘導(dǎo)狀態(tài)的老年大鼠，置于自制拱形氣管插管臺(tái)上，采用經(jīng)口明視氣管插管方法，將14G靜脈套管經(jīng)鋼絲引導(dǎo)插入老鼠氣管中[4]。PetCO2探頭確定氣管插管操作成功后，將氣管導(dǎo)管與麻醉機(jī)相連，大鼠自主吸入麻醉氣體，異氟醚濃度調(diào)為2%。應(yīng)用鼠尾無創(chuàng)血壓檢測(cè)儀與分析系統(tǒng)（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）于麻醉誘導(dǎo)前，麻醉誘導(dǎo)過程中，麻醉維持2 h與蘇醒后分別檢測(cè)大鼠鼠尾無創(chuàng)收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓（MAP）、心率（HR）。麻醉結(jié)束后，大鼠在吸入純氧下自然蘇醒。

1.3 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[5]，將大鼠放入Y-迷宮箱中適應(yīng)3～5 min，然后隨機(jī)開始實(shí)驗(yàn)：隨機(jī)變換電擊區(qū)和安全區(qū)，觀察動(dòng)物學(xué)會(huì)逃離電擊區(qū)而進(jìn)入安全區(qū)的反應(yīng)能力。大鼠進(jìn)入安全區(qū)后，燈光繼續(xù)維持5 s，以便大鼠確認(rèn)安全位置。兩次測(cè)試時(shí)間間隔為30 s，每次訓(xùn)練20次，休息5 min，連續(xù)測(cè)試直到學(xué)會(huì)為止，若測(cè)試次數(shù)﹥100次則不再測(cè)試，并以100為最大計(jì)數(shù)值。每次測(cè)試后，清理Y-迷宮箱，以免動(dòng)物氣味對(duì)下次測(cè)試結(jié)果造成影響[6]。

1.3.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[7-8]采用自制曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察箱100 cm×100 cm×50 cm（長(zhǎng)×寬×高），箱底分為25個(gè)方格（20 cm×20 cm），墻壁涂黑。將曠場(chǎng)分析箱從左上開始，按左到右順序以不同編號(hào)為相同的25個(gè)小格，其中7、8、9、12、13、14、17、18和19為中央?yún)^(qū)域，其余為外周格，13號(hào)為中央格子。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)捏住大鼠尾巴距根部2/3處輕放入中央格中，觀察大鼠5 min內(nèi)活動(dòng)情況，每次測(cè)定結(jié)束將動(dòng)物排泄物清除干凈，每只僅測(cè)定1次。實(shí)驗(yàn)時(shí)間結(jié)束錄像分析結(jié)果。設(shè)兩位觀察者分別觀察記錄不同指標(biāo)。以跨格次數(shù)為水平活動(dòng)得分，直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分，記錄中央格停留時(shí)間。

1.4 標(biāo)本制備

行為學(xué)測(cè)試后，用麻醉致死法對(duì)大鼠腹腔注射麻醉藥，在大鼠心臟還在跳動(dòng)時(shí)通過左心耳快速灌注4℃生理鹽水100 mL洗凈血液，然后以4%多聚甲醛200～300 mL灌注固定。止血鉗剝離大鼠顱骨，取出完整大腦置于4℃ 4%多聚甲醛中浸泡6 h，而后移入4℃的30%蔗糖溶液，將大腦冰凍切片（片厚為30 μm），用pH 7.4的0.01% PBS切片，接著進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

免疫組織化學(xué)染色：切片移入0.1Triton～0.001% H2O2溶液中，在37℃下反應(yīng)30 min，PBS緩沖液漂洗后，以3%正常羊血清封閉30 min，然后加兔抗RhoA抗體，4℃溫盒內(nèi)孵育72 h。漂洗后加入即用型二抗（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司），37℃孵育30 min，PBS沖洗，0.05% DAB～0.01% H2O2溶液顯色，脫水，封片。應(yīng)用彩色病理圖片分析系統(tǒng)，對(duì)所有切片在同一光度下，每張切片隨機(jī)選取3個(gè)200倍鏡下視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，以單個(gè)標(biāo)本為單位，取平均值。

1.5 RhoA分析

參照大鼠腦圖譜，每只大鼠選含背側(cè)海馬相應(yīng)斷面，選擇其中顯色較好且非特異性背景染色控制良好的切片3張。在光鏡下從每張切片的海馬CA3區(qū)有代表性區(qū)域分別隨機(jī)選擇3個(gè)高倍視野（10×40倍），統(tǒng)計(jì)各視野RhoA陽性細(xì)胞數(shù)。陽性標(biāo)準(zhǔn)：棕黃色顆粒，特異性分布于胞質(zhì)與胞核。染色深度達(dá)到足以區(qū)分細(xì)胞周界的神經(jīng)元被計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值。同時(shí)分別在20倍與400倍鏡下采集圖像，通過圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0對(duì)切片免疫組織化學(xué)陽性染色細(xì)胞進(jìn)行定量分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

三組22月齡大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。麻醉組老齡SD大鼠中麻醉前后收縮壓、舒張壓、MAP、HR、鼠尾氧飽和度保持在正常范圍，PetCO2維持在36～42 mm Hg（1 mm Hg = 0.133 kPa）且波形規(guī)則，皮膚顏色紅潤，未出現(xiàn)血壓較大波動(dòng)及缺氧現(xiàn)象。

2.2 三組大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：三組大鼠跨格次數(shù)、直立次數(shù)、總活動(dòng)量次數(shù)及中央格停留時(shí)間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P> 0.05）；Y-迷宮實(shí)驗(yàn)：Ⅰ組Y-迷宮學(xué)習(xí)次數(shù)明顯多于Ⅱ組和C組（P < 0.05），而Ⅱ組與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

表1 三組大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（x±s）

注：與Ⅰ組比較，*P < 0.05

2.3 三組大鼠免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果

光鏡下免疫組織化學(xué)結(jié)構(gòu)顯示：大鼠海馬組織中可見RhoA主要分布于椎體細(xì)胞層和輻射層，陽性細(xì)胞呈棕褐色，染色均勻，排列規(guī)則，呈弧形分布。200倍鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野大鼠海馬區(qū)RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，Ⅰ組RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)多于Ⅱ組和C組（P < 0.05），Ⅱ組與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），表明在異氟醚吸入麻醉后24 h，大鼠海馬區(qū)RhoA表達(dá)增加，吸入麻醉后72 h有所恢復(fù)。見表2。

表2 三組大鼠海馬CA3區(qū)RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

注：與Ⅰ組比較，*P < 0.05

3 討論

術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperative cognitive dysfunction，POCD）是指麻醉術(shù)后老年患者性格改變、學(xué)習(xí)記憶能力下降等中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙[9-11]。作為老年患者術(shù)后常見并發(fā)癥給患者術(shù)后生活帶來嚴(yán)重?zé)?，?dǎo)致患者喪失社會(huì)活動(dòng)、工作學(xué)習(xí)以及生活自理能力，因此減少麻醉術(shù)后認(rèn)知障礙發(fā)生具有非常重要的意義。調(diào)查顯示，盡管醫(yī)療技術(shù)水平有了很大提高，但是對(duì)于POCD發(fā)病機(jī)制以及預(yù)防和治療方法未得到顯著改善。鑒于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和認(rèn)知相關(guān)研究的復(fù)雜性，POCD發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制一直沒有得到圓滿解答。突觸是一個(gè)神經(jīng)元的沖動(dòng)傳到另一個(gè)神經(jīng)元或傳到另一個(gè)細(xì)胞間相互接觸的結(jié)構(gòu)，是神經(jīng)元之間在功能上發(fā)生聯(lián)系的部位，也是信息傳遞的關(guān)鍵部位。神經(jīng)軸突與樹突結(jié)構(gòu)有很大的可塑性，而這種可塑性的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)[12]。

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，主要采用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究藥物對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的影響，人和動(dòng)物的內(nèi)部心理過程很難直觀觀察到，通過客觀的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠黹g接推測(cè)腦內(nèi)所發(fā)生的過程，從而反映動(dòng)物認(rèn)知能力的水平與變化[13]。目前，國內(nèi)外多采用建立條件反射方法檢測(cè)動(dòng)物的行為能力和高級(jí)腦功能。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是將一定面積劃分為不同區(qū)域，并以相應(yīng)的格子對(duì)應(yīng)。大鼠在新環(huán)境中是由緊張、興奮、探索再到適應(yīng)的一系列過程，興奮性的老鼠在適應(yīng)的環(huán)境中表現(xiàn)為行動(dòng)活躍，四處走動(dòng)，留下自身的生物氣息，跨格次數(shù)的多少反映其興奮程度?？绺翊螖?shù)的多少與動(dòng)物的行動(dòng)量成正比，跨格次數(shù)多，活動(dòng)的距離也相應(yīng)增加，這些觀察指標(biāo)可以間接地反映動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮或抑制狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)中，三組大鼠中央格停留時(shí)間、跨格次數(shù)、直立次數(shù)、總活動(dòng)量次數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明2%異氟醚麻醉后24、72 h對(duì)大鼠的緊張、興奮、探索等興奮性指標(biāo)沒有顯著變化，因此可以認(rèn)為短時(shí)間吸入異氟醚對(duì)老年大鼠的空間學(xué)習(xí)能力影響不是由于其中樞興奮狀態(tài)的改變而產(chǎn)生的。Y-迷宮用于檢測(cè)大鼠的空間辨別能力，老年大鼠在迷宮中對(duì)電刺激和光刺激出現(xiàn)被動(dòng)的逃避反應(yīng)，經(jīng)過多次訓(xùn)練后大鼠就能學(xué)會(huì)并記住迷宮的安全位置，間接地反映出老年大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[14]。Y-迷宮達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的次數(shù)能夠較客觀地表現(xiàn)大鼠的學(xué)習(xí)能力。

多年來，海馬一直被認(rèn)為是參與學(xué)習(xí)記憶的重要腦區(qū)，因海馬是大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分，參與外界信息中樞傳遞的整合，一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域研究的焦點(diǎn)，海馬區(qū)突觸結(jié)構(gòu)與大鼠學(xué)習(xí)記憶能力密切相關(guān)。海馬區(qū)神經(jīng)元在學(xué)習(xí)記憶過程中主要參與學(xué)習(xí)記憶鞏固的早期過程[15-16]，而后期的學(xué)習(xí)記憶過程更多是與其他腦區(qū)有關(guān)[17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ⅰ組大鼠達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所需的訓(xùn)練次數(shù)明顯多于對(duì)照組（C組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），Ⅱ組與C組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明2%異氟醚麻醉2 h后可導(dǎo)致老年大鼠空間學(xué)習(xí)能力受損，學(xué)習(xí)能力下降，這種現(xiàn)狀在麻醉后第1天表現(xiàn)最為明顯，而第3天基本恢復(fù)，學(xué)習(xí)結(jié)果體現(xiàn)在海馬區(qū)神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)的變化基礎(chǔ)上，通過免疫組織化學(xué)法可以直觀觀察海馬區(qū)RhoA陽性細(xì)胞的變化與學(xué)習(xí)成績(jī)變化趨勢(shì)相同，因此可以推斷異氟醚麻醉后老年大鼠短期內(nèi)認(rèn)知能力受損與異氟醚麻醉對(duì)海馬CA3區(qū)RhoA表達(dá)的影響干擾了突觸偽足的形成與塌陷有關(guān)。Kaech等[18]為觀察全麻藥物對(duì)突觸的影響，使用熒光顯微鏡實(shí)時(shí)拍攝技術(shù)，觀察樹突棘的形態(tài)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)液中加入異氟醚后，神經(jīng)細(xì)胞樹突棘活力下降，說明吸入麻醉藥會(huì)影響海馬區(qū)樹突棘的動(dòng)力性和棘突結(jié)構(gòu)的改變。神經(jīng)軸突與樹突應(yīng)對(duì)麻醉刺激有很大的可塑性，而這種形態(tài)學(xué)的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力改變的細(xì)胞基礎(chǔ)[19-20]。RhoA通過影響肌球蛋白收縮引起軸突生長(zhǎng)錐的回縮及塌陷，RhoA主要通過Rho相關(guān)激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白微絲骨架的聚集，進(jìn)而影響細(xì)胞的極性和形態(tài)，RhoA可使多個(gè)氨基酸位點(diǎn)磷酸化而激活，肌球蛋白磷酸酶結(jié)合亞單位是活化Rho相關(guān)激酶的底物，磷酸化失活后，促使肌動(dòng)蛋白微絲骨架聚合，從而影響細(xì)胞收縮[21]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察老年大鼠海馬組織中Rho蛋白家族RhoA表達(dá)變化，試圖從異氟醚對(duì)海馬組織中神經(jīng)突觸間信號(hào)傳導(dǎo)分子變化的角度來闡釋麻醉后學(xué)習(xí)空間能力的改變。實(shí)驗(yàn)中觀察到麻醉后大鼠海馬組織中RhoA表達(dá)增高，麻醉后72 h恢復(fù)正常水平，說明異氟醚吸入麻醉后，大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元處于活躍狀態(tài)。麻醉24 h后RhoA表達(dá)增加，說明RhoA介導(dǎo)的突觸塌陷占主要地位，新的神經(jīng)突觸的建立處于抑制狀態(tài)，麻醉72 h后表達(dá)有所恢復(fù)，說明新的突觸生長(zhǎng)已經(jīng)恢復(fù)到麻醉前水平，而突觸的塌陷可能是神經(jīng)細(xì)胞重塑的表現(xiàn)。異氟醚麻醉后老年大鼠短期內(nèi)認(rèn)知能力受損，很可能是由于異氟醚麻醉對(duì)RhoA表達(dá)的影響干擾了突觸偽足的形成與塌陷。神經(jīng)形態(tài)學(xué)的變化與神經(jīng)傳導(dǎo)功能具有重要的相關(guān)性，異氟醚影響海馬區(qū)Rho蛋白家族信號(hào)傳導(dǎo)分子變化所介導(dǎo)的神經(jīng)突觸形態(tài)學(xué)改變很可能是學(xué)習(xí)記憶能力的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2015-03-05 本文編輯：李亞聰）