銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的臨床分布和耐藥性分析

王亞華 祝永明 吳曉燕 宋秀蘭 李旭梅 陳松勁 馮雪君 邵平揚

[摘要] 目的 調查分析醫(yī)院2012～2013年銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的臨床分布及耐藥性，為臨床合理使用抗菌藥物和及早預防和控制醫(yī)院感染提供科學依據(jù)。 方法 回顧性統(tǒng)計2012年1月～2013年12月嘉興地區(qū)兩所綜合性三甲醫(yī)院中分離的銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的臨床資料，進行耐藥性分析。 結果 銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌分離率以痰液最高，分別占68.35%和81.79%；科室分布銅綠假單胞菌以呼吸內科為主（17.65%），鮑曼不動桿菌以ICU為主（19.03%）；銅綠假單胞菌對亞胺培南和美洛培南的耐藥率呈逐年上升趨勢，分別從8.45%、8.09%上升到13.10%、11.16%；鮑曼不動桿菌對頭孢吡肟、亞胺培南、美洛培南、頭孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星等抗菌藥物耐藥率為19.36%～32.80%，對氨曲南、頭孢曲松的耐藥率達90%。 結論 銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌是醫(yī)院最常見的條件致病菌，臨床應加強耐藥性監(jiān)測，減少多重耐藥菌的產生，避免院內感染和暴發(fā)流行。

[關鍵詞] 銅綠假單胞菌；鮑曼不動桿菌；抗菌藥物；耐藥性

[中圖分類號] R378.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2015）06（a）-0020-05

Clinical distribution and drug resistance analysis of pseudomonas aeruginosa and acinetobacter baumanmii

WANG Yahua1 ZHU Yongming2 WU Xiaoyan3 SONG Xiulan4 LI Xumei2 CHEN Songjin3 FENG Xuejun3 SHAO Pingyang3

1.Department of Pharmacy， the First Hospital of Jiaxing， Zhejiang Province， Jiaxing 314001， China； 2.Department of Pharmacy， the Second Hospital of Jiaxing， Zhejiang Province， Jiaxing 314000， China； 3.Department of Laboratory， the Second Hospital of Jiaxing， Zhejiang Province， Jiaxing 314000， China； 4.Department of Laboratory， the First Hospital of Jiaxing， Zhejiang Province， Jiaxing 314001， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical distribution and drug resistance of pseudomonas aeruginosa and acinetobacter baumanmii in hospital during 2012-2013， and provide scientific basis for rational use of antibiotics in clinic and early prevention-control of hospital infections. Methods Retrospective statistics were performed for the clinical data of pseudomonas aeruginosa and acinetobacter baumannii detached from two comprehensive three-grade hospitals during January 2012 to December 2013 in Jiaxing， then drug resistance was analyzed. Results The detach rates of pseudomonas aeruginosa and acinetobacter baumannii were the highest in sputum， was 68.35% and 81.79% separately. Pseudomonas aeruginosa was mainly distributed in respiration medicine （17.65%）， and acinetobacter baumannii was mainly distributed in ICU （19.03%）. The resistant rate of pseudomonas aeruginosa to Imipenem increased from 8.45% to 13.10% year by year， and the resistant rate of pseudomonas aeruginosa to Meropenem increased from 8.09% to 11.16%. The drug resistance rate of acinetobacter baumanmii to Cefepime， Imipenem， Meropenem， Cefoperazone/Sulbactam and Levofloxacin ranged from 19.36% to 32.80%， and the drug resistance rate of acinetobacter baumanmii to Aztreonam and Ceftriaxon reached 90%. Conclusion Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii are the most common opportunistic pathogen in hospital. Drug resistance surveillance should be strengthened， so as to reduce the generate of multiple resistant bacteria， avoid the hospital infection and fulminant epidemic.

[Key words] Pseudomonas aeruginosa； Acinetobacter baumannii； Antimicrobial agents； Resistance

銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌屬于非發(fā)酵革蘭陰性菌，是目前醫(yī)院感染的主要條件致病菌，也是非發(fā)酵菌屬中分離率最高的兩種細菌。近年來隨著臨床抗菌藥物的廣泛使用以及各種侵入性操作的增多，使銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的多藥耐藥和泛耐藥菌株不斷增加，給醫(yī)院感染控制和臨床抗感染治療帶來極大困難。為更好地指導臨床合理使用抗菌藥物，筆者對2012～2013年嘉興地區(qū)兩所綜合性三甲醫(yī)院銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌的臨床分布及耐藥性進行回顧性調查與分析，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 菌株來源

來自2012年1月1日～2013年12月31日嘉興地區(qū)兩所綜合性三甲醫(yī)院各類臨床送檢標本，包括痰液、分泌物、尿液、膽汁、胸腹水、血液、導管、腦脊液等。

1.2 病原菌鑒定與藥敏試驗

病原菌鑒定與藥敏采用法國梅里埃公司VETIK-2 Compact全自動細菌鑒定儀，及其配套GP、GN、GP-67、GN-16、GN-13鑒定和藥敏卡。分離與鑒定參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行。藥物敏感試驗結果判讀參照美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）每年更新內容進行判讀。

1.3 質控菌株

大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC-27853、金黃色葡萄球菌 ATCC29213、糞腸球菌ATCC 29212和肺炎克雷伯菌ATCC70063，購自原衛(wèi)生部臨床檢驗中心。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用WHO細菌耐藥性監(jiān)測推薦的Whonet 5.6軟件進行耐藥性分析，剔除重復菌株。

2 結果

2.1 病原菌的標本分布

2012年1月～2013年12月兩家醫(yī)院各類標本共檢出1858株銅綠假單胞菌、1829株鮑曼不動桿菌，銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌均以痰液分離率最高，分別占68.35%和81.79%；其次為分泌物，占16.95%和8.26%；尿液，占5.17%和 3.66%。見表1。

表1 銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌標本來源分布及構成比[n（%）]

注：分泌物包括傷口分泌物和膿液

2.2 病原菌的科室分布

銅綠假單胞菌的科室分布以呼吸內科為主，占17.65%，其次為ICU、普外科、腫瘤科、神經外科，分別占15.98%、12.43%、6.40%和6.19%；鮑曼不動桿菌的科室分布以ICU為主，占19.03%，其次為兒科、呼吸內科、神經外科、普外科，分別占15.42%、12.47%、7.11%和6.83%。見表2。

表2 銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌科室分布及構成比[n（%）]

2.3 銅綠假單胞菌的耐藥率

銅綠假單胞菌對阿米卡星和妥布霉素耐藥率最低，僅為1.15%～3.02%，對頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、慶大霉素、亞胺培南、美洛培南、阿米卡星、妥布霉素耐藥率小于10%，對亞胺培南和美洛培南的耐藥率呈上升趨勢，分別從2012年的8.45%、8.09%上升到2013年的13.10%、11.16%；而對阿莫西林/克拉維酸和氨芐西林/舒巴坦的耐藥率高（>90%）。見表3。

2.4 鮑曼不動桿菌的耐藥率

鮑曼不動桿菌對妥布霉素、阿米卡星耐藥率較低，為6.18%～14.6%，對替加環(huán)素的耐藥性增長迅速，從2012年的2.20%上升到2013年的24.00%；對頭孢吡肟、亞胺培南、美洛培南、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、復方新諾明、四環(huán)素和慶大霉素具有一定的耐藥性，耐藥率為19.36%～32.80%，而對氨曲南、頭孢曲松的耐藥率高（>90%）。見表4。

3 討論

3.1 銅綠假單胞菌感染的臨床分布及耐藥性

銅綠假單胞菌是一種需氧革蘭陰性桿菌，對周圍生存繁殖環(huán)境和營養(yǎng)要求不高，在醫(yī)院內潮濕環(huán)境和人體腸道可定植，引起抵抗力受損患者發(fā)生院內感染，可導致人體局部器官及全身性、多發(fā)性醫(yī)院感染[1]。近年來由于廣譜抗菌藥物、激素及免疫抑制劑的廣泛應用，各種侵入性診斷與治療操作的不斷普及，銅綠假單胞菌已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一，給臨床抗感染治療帶來了極大困難[2]，在免疫力低下的醫(yī)院獲得性肺炎患者中尤其多見[3]?；颊吒腥玖算~綠假單胞菌，尤其是多重耐藥或者廣泛耐藥菌株后，由于對抗菌藥物的敏感性差，治療困難，病情常常遷延不愈，嚴重時可導致銅綠假單胞菌膿毒癥，具有重癥性、難治性、持續(xù)反復性等特點，已經引起國內外專業(yè)人士的關注。

本研究結果顯示，銅綠假單胞菌最常見分離自呼吸道標本（68.35%），其次為分泌物（16.95%），與國內的報道一致[4-5]?？剖曳植純瓤埔院粑鼉瓤坪虸CU為主，分別占17.65%和15.98%，這些科室的患者多為老年患者或患病嚴重、住院時間長、免疫力低下，同時大量使用廣譜抗菌藥物造成菌群失調，致使銅綠假單胞菌繼發(fā)感染，藥物敏感的銅綠假單胞菌被殺滅，耐藥性菌株得以存活并成優(yōu)勢菌群。外科則以普外科、腫瘤科、神經外科為主，分別占12.43%、6.40%和6.19%，因此加強消毒滅菌制度的落實，減少侵入性操作及合理使用抗菌藥物是預防銅綠假單胞菌的有效措施。

銅綠假單胞菌具有固有耐藥和獲得性耐藥，經常表現(xiàn)對β-內酰胺類、喹諾酮類、氯霉素類和磺胺類等抗菌藥物的多重耐藥，耐藥率呈逐年上升趨勢，且與抗菌藥物使用量存在相關性。銅綠假單胞菌是全球共識的多藥耐藥非發(fā)酵菌，共具有復雜的耐藥形成機制：①該菌能產生破壞抗菌藥物活性的多種滅活酶、鈍化酶和修飾酶；②基因發(fā)生突變使得抗菌藥物的作用靶位變化；③細胞外膜固有的微孔蛋白缺失及膜通透性降低；④細胞主動泵出機制使進入菌細胞的抗菌藥物排出菌體；⑤銅綠假單胞菌感染宿主后形成生物膜，可阻擋白細胞、各種抗體、抗菌藥物進入菌細胞內吞噬和殺滅細菌。攜帶不同耐藥質粒不同類型的銅綠假單胞在醫(yī)院內環(huán)境中大量繁殖、廣泛傳播，致使多藥耐藥銅綠假單胞菌的數(shù)量日益增多，耐藥率也逐年攀升[6]。本研究結果顯示，銅綠假單胞菌對阿莫西林/克拉維酸和氨芐西林/舒巴坦的耐藥率>90%，表明這類抗菌藥物已經不適于銅綠假單胞菌感染的治療。近年來以亞胺培南為主的碳青霉烯類抗菌藥物被視為控制革蘭陰性菌感染的強效藥物，在臨床經驗用藥中廣泛應用，使銅綠假單胞菌對亞胺培南和美洛培南的耐藥率呈上升趨勢。本研究結果顯示，銅綠假單菌對亞胺培南和美洛培南的耐藥率分別從2012年的8.45%、8.09%上升到2013年的13.10%、11.16%。由于抗菌藥物的不合理使用會增加銅綠假單胞菌適應性耐藥，因而臨床上應加強抗菌藥物最優(yōu)劑量的管理，慎重、合理地使用碳青霉烯類抗菌藥物，密切關注銅綠假單胞菌耐藥性的發(fā)展，采用有效的感染控制措施。銅綠假單胞菌對頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌藥物較敏感，耐藥率為6.22%～9.85%，臨床常選擇其作為治療呼吸道感染的經驗性用藥。銅綠假單胞菌對阿米卡星和妥布霉素敏感，耐藥率僅為1.15%～3.02%，盡管這類藥物對銅綠假單胞菌抗菌作用良好，但由于其耳、腎毒性等不良反應，限制了其在臨床的應用，尤其是老年患者應慎用，一般不單用，常與β-內酰胺類抗生素聯(lián)合使用。

3.2 鮑曼不動桿菌感染的臨床分布及耐藥性

鮑曼不動桿菌屬于非發(fā)酵革蘭陰性菌，廣泛存在于自然界、醫(yī)院環(huán)境及人體皮膚，常引起慢性病患者、老年人、有侵入性治療、長期使用廣譜抗菌藥物治療的患者以及免疫力低下的患者發(fā)生感染[7]，是常見的院內感染主要致病菌之一。鮑曼不動桿菌耐藥現(xiàn)象普遍，多重耐藥菌和泛耐藥菌呈逐年上升趨勢，?？稍诓骞?、機械通氣、長期住院患者的呼吸道、泌尿道、傷口等部位分離到，嚴重者可出現(xiàn)菌血癥及心內膜炎[8]。一旦感染治療效果差，病死率高[9]。

本研究結果顯示，鮑曼不動桿菌最常見分離自痰液標本（占81.79%），與國內的報道一致[10]。有研究顯示，鮑曼不動桿菌院內感染最常見部位是肺部，其次是血流感染，是醫(yī)院獲得性肺炎（HAP），尤其是呼吸機相關肺炎（VAP）重要的致病菌[11]。本研究表明，鮑曼不動桿菌的科室分布以ICU為主，占19.03%，這與全國的CHINET監(jiān)測報道一致[12]，但所占科室比例明顯低于張勇等[11]報道的45.96%和葉春幸等[13]報道的63.39%，這可能與醫(yī)院ICU床位分布有關。這一結果與入住ICU患者存在以下相關危險因素有關，如長時間住院、入住ICU、接受機械通氣、侵入性操作、抗菌藥物暴露以及嚴重基礎疾病等，同時與ICU的院內感染控制措施有關。

多項研究表明，鮑曼不動桿菌可以產生質粒介導的TEM-1、TEM-2，染色體AmpC型頭孢菌素酶，通過接合、轉導、轉化等方式在菌種間傳遞，導致耐藥性傳播；碳青霉烯酶的產生、高產AmpC酶伴外膜孔蛋白缺失、靶位點轉移、主動泵出系統(tǒng)過量表達等均是多藥耐藥產生的原因；對喹諾酮類抗菌藥物的耐藥性則主要與gyrA和parC基因突變導致的DNA旋轉酶或拓撲異構酶的改變、膜通透性降低等有關[10]。鮑曼不動桿菌耐藥機制復雜，其中產β-內酰胺酶、碳青霉烯酶是其主要耐藥機制，且極易經質粒結合方式獲得耐藥性，常有多種耐藥質粒共存，故鮑曼不動桿菌對頭孢菌素類、青霉素類和氨基糖苷類呈交叉耐藥。由于廣譜頭孢菌素和碳青霉烯類抗菌藥物廣泛應用，鮑曼不動桿菌的多耐藥、泛耐藥株感病例逐漸增多[14]。

本研究結果顯示，鮑曼不動桿菌對氨曲南、頭孢曲松的耐藥率>90%，表明這類抗菌藥物已經不適于鮑曼不動桿菌感染的治療。對頭孢吡肟、亞胺培南、美洛培南、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、復方新諾明、四環(huán)素和慶大霉素耐藥率在19.36%～32.80%，表明鮑曼不動桿菌對大多數(shù)抗菌藥物均存在一定的耐藥性。尤其值得關注的是鮑曼不動桿菌對亞胺培南和美洛培南的耐藥率分別達26.52%～26.65%和29.88%～32.80%，其耐藥機制主要是產生了碳青霉烯酶，多數(shù)為OXA型β-內酰胺酶。造成耐藥株增多的原因除與亞胺培南和美洛培南使用廣泛有關外，還與耐藥克隆株在醫(yī)院環(huán)境中定植及在病房內播散有關。鮑曼不動桿菌對妥布霉素、阿米卡星耐藥率較低，為6.18%～14.60%，但由于本類藥物的耳腎毒性，限制了其在臨床的應用，尤其是老年患者，一般不單用，常與β-內酰胺類等抗菌藥物聯(lián)合使用。本研究結果顯示，鮑曼不動桿菌對替加環(huán)素的耐藥性增長迅速，從2012年的2.20%上升到2013年的24.00%，這可能與該藥物作為新型抗菌藥物在臨床的廣泛使用有關，導致其耐藥性快速上升。β-內酰胺類與酶抑制劑的復方制劑如氨芐西林/舒巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦常被用來治療鮑曼不動桿菌的感染，由于舒巴坦不僅對β-內酰胺酶有抑制作用，對鮑曼不動桿菌也有直接抗菌活性，是治療鮑曼不動桿菌的較為有效的藥物，本研究數(shù)據(jù)顯示，對頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率在30%以下，值得臨床經驗用藥。除此之外，國內外報道米諾環(huán)素、多黏菌素、替加環(huán)素等也是治療泛耐鮑曼不動桿菌的常用藥物[13]。

銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌是引起醫(yī)院感染常見的條件致病菌，針對近年來多重耐藥菌和泛耐藥菌的出現(xiàn)，臨床應注重感染性疾病的病原學檢查，控制抗菌藥物用藥頻度，合理使用抗菌藥物，加強消毒措施，遏制耐藥菌株的產生、播散與流行。

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（收稿日期：2015-03-02 本文編輯：程 銘）